黑曲霉HU53菌株产酸性蛋白酶的条件和酶学性质

本文报道了黑曲霉(Aspergillus niger)HU53菌株产酸性蛋白酶的固体发酵条件优化和酶学特性的研究结果。适合该菌株的最佳固体发酵培养基为麦麸38.8%,豆粕9.7%,NH4NO3 1.5%和水50.0%,最佳起始pH5.5。在28℃下发酵50h后酸性蛋白酶的比活力达到93.8 U/g,且在52h发酵期内基本不产孢子。该酸性蛋白酶的最佳反应酸碱度为pH3.0,最佳反应温度为50℃,对酪蛋白的Km为2.8016 mg/ml,在40℃下保温180min后相对酶活力为93.50%。2.0 mmol/L的Cu2+和Mn2+对该酸性蛋白酶具有极其显著的激活作用,相对酶活力分别为对照的171.9%和121.1%;而相同浓度的Fe3+和Ca2+则对其表现出强烈的抑制作用,相对酶活力分别仅为对照的62.5%和44.6%。

黑曲霉Aspergillus niger SL2-111所产酸性蛋白酶的分离纯化及酶学特性

采用硫酸铵盐析、Sephadex G-25柱脱盐、DEAE—Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephacryl S-200分子筛层析和高效液相色谱等方法，从黑曲霉菌株Aspergillus niger SL2—111的发酵曲中提取了一种酸性蛋白酶，经SDS—PAGE验证，该酶纯化水平已达到电泳纯．该酶的表观分子量（Mr）约为47×10^3，最适pH值为3．0，pH稳定性范围为2．5—6．0，最适温度为50℃，温度稳定性范围为30—60℃；Cu^2＋、Mn^2＋对其有激活作用，Hg^2＋、Ag^＋对其则有轻度的抑制作用；该酶的氨基酸组成为：中极性酸性氨基酸占17．29％，极性碱性氨基酸占4．50％，极性中性氨基酸占38．50％，其它为非极性氨基酸；N端氨基酸序列为SKGSAVTFPQ，经序列同源性比对，表明该酶与其它曲霉酸性蛋白酶具有极高的同源性．

泸型大曲黑曲霉产酸性蛋白酶条件的优化及其酶学性质的研究

以泸型大曲中分离的黑曲霉为菌种,采用固态发酵来产酸性蛋白酶,以发酵产物中酸性蛋白酶酶活为指标,对菌种产酸性蛋白酶的发酵条件进行了优化,同时对所产酸性蛋白酶的酶学性质进行了研究,实验结果表明:当麸皮:豆粕=6:4、玉米粉2.0%(g/g)、NH4Cl浓度2.5%(g/g)、持水量95%(mL/g)、初始pH6.0,培养时间50h,培养温度28℃,接种量6.0%时,发酵产物酸性蛋白酶酶活达24350U/g,平均酶活比初始培养基提高64.6%。对菌株所产酸性蛋白酶酶学性质的研究得出:该酶最佳反应温度为55℃,最佳反应pH为3.5,温度50℃以下该酶较稳定,2mmoL/L的K+、Cu2+、Ca2+、Fe+、Ag+离子对该酶具有激活作用,而同浓度的Fe3+、Fe2+、Zn2+离子对该酶具有抑制作用。

黑曲霉酸性蛋白酶EXPA的克隆表达与酶学性质解析

酸性蛋白酶在食品、酿造、饲料和皮革等行业具有重要的应用价值。然而,现有的酸性蛋白酶在50℃以上或pH> 3. 0时不稳定,限制了其应用范围。该研究通过分子克隆技术将黑曲霉CICIM F0510的酸性蛋白酶基因exp A在毕赤酵母中进行了克隆表达,构建获得了重组菌GS115 (p PIC-expA)。摇瓶发酵条件下,重组酶EXPA的酶活为257 380 RFU/h。生物信息学分析的结果显示,该酶属于天冬氨酸蛋白酶A1A家族。酶学性质的研究表明,该重组酶的最适反应温度和pH分别为50℃和3. 0;分别在40～50℃或pH 2. 5～3. 5孵育1 h后,仍能保留80%左右的活力。Zn^(2+)、Ca^(2+)、Fe^(2+)和Mn^(2+)对其活性有一定的促进作用;而Cu^(2+)、Co^(2+)、Fe^(3+)、EDTA和SDS则对其活性有显著的抑制作用。此外,重组酶EXPA对大豆分离蛋白、水溶性玉米蛋白和小麦水解蛋白均具有较好的水解作用。较好的耐热性和pH稳定性为EXPA在食品、饲料等领域的应用奠定了基础。

黑曲霉的紫外诱变及酸性蛋白酶缺陷株的选育

以黑曲霉3.2130为出发菌株,经紫外线诱变处理,采用平板培养筛选,获得一酸性蛋白酶缺陷的菌株L4。通过对紫外照射时间、照射距离、孢子悬液稀释倍数的影响分析,得出最佳诱变条件,即照射时间180 s,照射距离30 cm,孢子液中孢子数量约为109个/L。该株的酸性蛋白酶活性为原始菌株的3.7%,而其β-葡萄糖苷酶活性基本不变,可作为外源基因高效分泌表达的宿主菌。

黑曲霉Aspergillus niger H菌株所产酸性蛋白酶的质谱法鉴定及酶学特性

采用质谱指纹（MS mapping）分析方法,直接对黑曲霉Aspergillus niger H菌株发酵液中所产蛋白进行鉴定,通过与质谱数据库比对分析,确定此蛋白为曲霉酸性蛋白酶Aspergillopepsin I（EC.3.4.23.18）。对其酶学性质的研究表明,此蛋白酶分子量约为47kDa,最适温度为50℃,温度稳定性范围为30-50℃,最适pH为3.0,pH稳定性为2-5,其表征与其它已报道的曲霉酸性蛋白酶基本一致,证实此质谱指纹分析方法可快速有效地鉴定混合发酵液中的未知蛋白,并省去中间繁琐的分离纯化步骤。

黑曲霉酸性蛋白酶酶学性质的研究

对黑曲霉菌株ANS1产酸性蛋白酶基本酶学性质的研究表明:酸性蛋白酶适宜pH在2.5～4.0之间,在pH为3.5时,相对酶活最高;适宜温度在40～50℃之间,在45℃时,相对酶活最高;酸性蛋白酶有着较好的热稳定性,曲酶粉在80℃保温至5min保留有51.4%的酶活,液态酶在80℃恒温水浴中保温1min保留有54.6%的酶活力,曲酶粉较液态酶有着更好的抗热性;金属离子对酸性蛋白酶活力有一定的影响,在2.0mmol·L-1的浓度下,Mn2+和Cu2+酸性蛋白酶有较强的激活作用,Fe3+对该酶表现出明显的抑制作用。研究结果表明,黑曲霉菌株ANS1产酸性蛋白酶可以作为生物饲料添加剂。

酒用酸性蛋白酶的研究进展

酒用酸性蛋白酶在白酒酿造的发酵过程中起协同作用,具有溶解发酵原料的颗粒、促进微生物繁殖、分解蛋白质生成香味物质、降解酵母菌体蛋白等多种功能。综述了酒用酸性蛋白酶酶源研究及其酿酒中的酶学功能。

亚硝基胍诱变选育酸性蛋白酶产生菌

利用亚硝基胍对野生黑曲霉DH -0 10进行诱变 ,使用自制的培养基筛选出 10株对羊毛细化具有效果的菌株 ,又通过摇瓶复筛出一株对羊毛细化具有明显效果的菌株并命名为DH -C40。同时设计了一种以羊毛作为底物的酶活力测定方法 ,用此法筛选出的菌株的最高产酶活力可以达到 62 0 μg/ml。

饲用酸性蛋白酶生产研究进展

１前言蛋白酶是工业酶制剂中最重要的一类酶,约占全世界酶销售量的６０%。根据其作用机制和作用最适ｐＨ值,蛋白酶可分为:酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶。酸性蛋白酶用途十分广泛:食品工业上用于啤酒、白葡萄酒的澄清和酱油的酿造;制革工业用于脱毛和皮革软化;医药?..

大豆蛋白水解液脱苦的研究

大豆蛋白酶解常常会产生苦味,蛋白质水解物苦味肽的苦味是长期困扰其应用的问题。本文研究了酶法与微生物法对大豆蛋白水解液脱苦的效果。结果表明:采用端肽酶黑曲霉酸性蛋白酶(3000u/g)与内切酶枯草杆菌碱性蛋白酶(Alcalase 2.4L)协同作用水解大豆蛋白可有效降低水解液苦味,并且由酿酒酵母对水解液进一步处理后,大豆蛋白水解液的苦味降至更低。

金属离子对饲料复合酶稳定性的影响

通过黑曲霉(Aspergillusniger)X1l固体发酵生产饲料复合酶,对该酶中酸性蛋白酶、纤维素酶、果胶酶、淀粉酶等组份的进行研究,发现该酶具有良好的金属稳定性。

内切酶与端肽酶协同水解大豆蛋白的研究

大豆蛋白酶解常常会产生苦味,端肽酶可有效水解苦味肽,但它们对于完整的蛋白大分子几乎没有作用,因此必须与内切酶联合使用或在其后使用。研究了内切酶枯草杆菌碱性蛋白酶(Alcalase 2.4L)与端肽酶黑曲霉酸性蛋白酶(3000U/g)协同水解大豆蛋白制备寡肽的可行性,结果表明:采用端肽酶黑曲霉酸性蛋白酶与内切酶枯草杆菌碱性蛋白酶协同作用水解大豆蛋白,不但水解液的苦味值显著下降,而且大豆蛋白降解率和水解液水解度显著提高。