鸡卵清蛋白基因5′端调控区的克隆及其序列分析

应用PCR技术从鸡输卵管组织基因组中扩增出了 1.0 0kb的鸡卵清蛋白基因 5′端调控区序列。序列分析表明 ,该区域含有TATA框及激素识别位点 ,具备输卵管定位表达的调控能力。为外源基因在鸡输卵管中的定位表达奠定了基础。

猞猁GH基因部分序列及其5′端调控区的克隆与分析

根据已报道的哺乳动物GH基因序列设计一对引物 ,利用PCR技术直接扩增猞猁GH基因部分序列和 5′端调控区序列 ,将PCR产物克隆到质粒pUC19的HincⅡ位点 ,重组子经HindⅢ /EcoRⅠ双酶切鉴定和序列分析 ,扩增片段长度为 783bp。测序结果与其它报道的哺乳动物GH基因对应片段比较 ,5′端侧翼序列和第一外显子高度保守 ,第一内含子和部分第二内含子存在 89%同源性 ,且第二个外显子中突变多发生在密码子的兼并位点上。PCR结果和序列分析表明 。

异源四倍体鲫鲤Sox4基因部分序列及其5′端调控区启动子片段的克隆与分析

通过PCR技术从异源四倍体鲫鲤基因组DNA中分离到Sox4基因部分基序.序列分析表明,其5′端调控区具有多种启动子所特有的序列元件,如TATA框,CAAT框等,据此推测,它具有启动子活性.采用高保真PCR方法克隆了异源四倍体鱼Sox4基因5′端调控区600bp启动子片段,将其插入启动子缺失的增强绿色荧光蛋白(EGFP)表达载体pEGFP-1中,构建重组载体pAtsox4EGFP-1.通过瞬时转染HeLa细胞,在倒置荧光显微镜下可检测到绿色荧光.结果表明,克隆的Atsox4基因5′端调控区具有启动子活性,并成功构建了含四倍体鱼Sox4基因启动子片段的报告基因载体,为以后研究Sox4基因表达调控的分子机制奠定了基础.

新疆绵羊β-乳球蛋白(BLG)5′端调控区的克隆与序列测定

用聚合酶链式反应(PCR)技术,从新疆绵羊全血中扩增了β-乳球蛋白5′端调控区890bp的片段。通过T4DNA连接酶将其连接于质粒载体pGEM-T上,转化至受体菌DH5α中。提取质粒经PCR扩增、酶切鉴定,证明重组质粒pT-BLG中含有β-乳球蛋白5′端调控区基因片段。经核苷酸序列测定,克隆的片段与发表的基因序列高度一致。

鸡卵清蛋白5′端调控区的克隆和序列分析

通过PCR技术从产蛋鸡输卵管基因组中扩增出1.1kb的鸡卵清蛋白5′调控区,将其克隆入pMD18-T载体的多克隆位点(命名为pOV),经酶切鉴定和序列测定可作为调控序列来启动外源基因的表达。为下一步构建其调控外源基因的质粒表达载体作准备。

鸭卵清蛋白5'端调控区的克隆和序列分析

通过PCR技术从产蛋鸭输卵管基因组中扩增出1.2 kb的鸭清蛋白5’端调控区,将其亚克隆入phD18-T载体的多克隆位点(命名为 pOV),经酶切和测序鉴定可作为启动外源基因表达的调控序列.为构建其启动外源基因的质粒表达载体作准备.

鹅GnRH基因5′端调控区单核苷酸多态性分析

运用PCR-SSCP方法对皖西白鹅GnRH基因5'端调控区进行多态性检测。结果表明,GnRH基因5'端调控区存在3个SNP位点,分别为GnRH基因5'端调控区的-192位置存在G/C转换的多态性位点、-206位置存在A/T转换的多态位点、-417位置存在T/G转换的多态性位点。

哺乳动物DMRT1基因调控区分析

dmrt1基因是迄今为止发现的第一个在种属间具有进化保守性的性别分化基因。该基因在哺乳动物的性别分化过程中发挥着重要作用。通过对哺乳动物dmrt1基因5′端和3′端调控区的分析,发现它们分别存在3个和7个同源性较高(>60%)的保守区。PCR扩增得到该基因的启动子、3′端调控区及编码区,并构入表达载体转染COS-7和ST细胞,结果显示,克隆的5′端和3′端调控区都能有效引导报告基因gfp以及dmrt1基因的表达,但表达效率在不同细胞中存在较大差异,显示dmrt1的表达存在着细胞特异性及复杂的调控机制。

波尔山羊FSHR5’端序列的SNP多态性及超排效果分析

为探索波尔山羊超排个体排卵数差异与个体遗传特性的相关性,对波尔山羊的FSHR基因(950 bp),分成四段分别设计引物进行PCR-SSCP多态性分析,结果发现一个SNP位点,导致5-’1出现两种基因型。序列分析显示该突变位点位于转录起始点上游-739bp处,属于远端转录启动调控区。统计分析表明AA型个体的平均排卵数与AB型个体的平均排卵数差异极显著(P<0.01),平均胚胎可利用率差异显著(P<0.05),这说明个体的超排潜力可能与其本身的FSHR基因的遗传特性有关。

柞蚕Dsx基因的体外扩增

依据已测知的天蚕卵黄原基因5’端调控区序列设计特异性引物以柞蚕基因组DNA为模板对柞蚕卵黄原基因5’端调控区序列进行克隆并测序,成功获得了柞蚕卵黄原基因5’端调控区部分序列并在其中找到了柞蚕Bm dsx性别决定位点(ACATTGT)及CdxA,CREB,和GATA等昆虫基因调控元件。