竹柏内酯E通过升高c-Jun促进肺癌细胞程序性细胞死亡蛋白配体1蛋白表达

目的基于程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)及其配体程序性细胞死亡蛋白配体1(PD-L1)的抗体治疗现已显著改善非小细胞肺癌患者的生存,然而大多数患者仍未从抗PD-1/PD-L1疗法中获益,与具有上调PD-L1表达能力的抗肿瘤药物联合或是一种增强抗PD-1/PD-L1疗效的策略。本研究拟探讨具有肿瘤抑制功能的天然产物竹柏内酯E(NLE)在肺癌细胞中对PD-L1表达影响及其机制。方法Western印迹法和实时荧光定量PCR分别检测PD-L1的蛋白和mRNA表达,流式细胞术和免疫荧光测定细胞膜上的PD-L1水平。Western印迹法检测c-Jun和c-Jun氨基末端激酶(JNK)的蛋白磷酸化和表达,核质分离蛋白免疫印迹法和免疫荧光测定c-Jun的核定位。结果NLE能够上调人肺癌NCI-H460细胞PD-L1的蛋白表达,并增加细胞膜上的PD-L1。实时荧光定量PCR检测发现,NLE升高PD-L1的mRNA水平,提示NLE通过转录水平上调PD-L1。进一步的机制研究发现,NLE可升高c-Jun的磷酸化和表达,及其上游蛋白JNK的磷酸化,且促进了c-Jun在细胞核中的定位。为了确定JNK-c-Jun通路在NLE调控PD-L1中的作用,使用小干扰RNA(siRNA)沉默c-Jun或使用JNK抑制剂SP600125抑制JNK的激活,发现均能降低NLE诱导的PD-L1蛋白和mRNA的上调,表明JNK-c-Jun通路在转录水平上介导NLE升高PD-L1。结论NLE能够通过JNK-c-Jun的激活上调肺癌细胞PD-L1的表达,具有与PD-1/PD-L1抗体疗法联用的潜在价值。