基于标准汤剂的竹节参配方颗粒质量标准研究

目的基于标准汤剂建立竹节参配方颗粒质量标准。方法HPLC法测定标准汤剂、配方颗粒中人参皂苷Ro、竹节参皂苷Ⅳa含量,计算转移率。建立标准汤剂HPLC特征图谱,并进行聚类分析、主成分分析。再建立配方颗粒HPLC特征图谱。结果17批标准汤剂HPLC特征图谱中有9个共有峰,相似度大于0.9(除S6、S12外),聚为2类,3种主成分累积方差贡献率达86.7%。3批配方颗粒中人参皂苷Ro含量为83.1~88.6 mg/g,转移率为53.1%~55.5%;竹节参皂苷Ⅳa含量为14.8~15.0 mg/g,转移率为47.4%~48.1%。3批配方颗粒HPLC特征图谱中有9个共有峰,相似度分别为0.998、0.998、0.999。结论该方法合理可靠,可全面评价竹节参配方颗粒质量,为其质量控制提供参考。

竹节参皂苷IVa通过抗炎和抗氧化减轻脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤

目的:探讨竹节参皂苷IVa(saponin from Panax japonicus IVa,SPJ IVa)对大鼠急性肺损伤的影响,并对其可能的保护机制进行初步的探索。方法:将60只SD大鼠随机均分为4组,每组15只:对照组、模型组、低剂量SPJ IVa组和高剂量SPJ IVa组。以脂多糖(LPS,2 mg/kg)气管内滴注法建立大鼠急性肺损伤模型,低、高剂量SPJ IVa组大鼠在造模后30 min分别腹腔注射15和45 mg/kg SPJ IVa。造模后24 h,收集血清、支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)和肺组织。HE染色法评估肺组织病理形态学变化;称重法测定肺组织湿重/干重值;ELISA法检测血清和BALF中白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;试剂盒法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)的水平;免疫组织化学标记cleaved caspase-3法和TUNEL染色法评估肺组织中细胞凋亡情况;Western blot法测定肺组织中核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)、血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)、核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65和Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)表达。结果:与对照组比较,模型组肺组织发生明显损伤病变,肺损伤积分(0.21±0.22 vs 2.98±0.46)和湿/干重比值(3.09±0.41 vs 6.36±0.61)显著上升(均P<0.01);与模型组比较,低、高剂量SPJ IVa组肺损伤积分(1.80±0.31和1.05±0.25 vs 2.98±0.46)和湿/干重比值(5.25±0.44和3.89±0.35 vs 6.36±0.61)显著降低(均P<0.01)。LPS可致血清和BALF中促炎因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)和氧化指标MDA水平升高(P<0.01),抗氧化指标SOD、GSH降低(P<0.01),低、高剂量SPJ IVa治疗均可降低LPS导致的上述促炎因子和氧化指标MDA(P<0.01),并升高SOD和GSH水平(P<0.05或P<0.01)。模型组肺组织中可见显著细胞凋亡,低、高剂量SPJ IVa治疗可抑制LPS导致的肺组织中TUNEL阳性细胞和cleaved caspase-3表达(P<0.01)。模型组肺组织中Nrf2、HO-1、NF-κB p65和TLR4表达高于对照组(P<0.01);低、高剂量SPJ IVa治疗后,Nrf2和HO-1表达进一步上调(P<0.01),而NF-κB p65和TLR4表达降低(P<0.01)。结论:SPJ IVa可抑制LPS所致ALI大鼠肺损伤,此作用可能与其抑制TLR4/NF-κB和Nrf2/HO-1介导的炎症反应和氧化应激有关。

竹节参皂苷调控核因子κB信号通路对肺癌大鼠的影响

目的:探究竹节参皂苷调控核因子κB(NF-κB)信号通路对肺癌大鼠脑神经损伤、微血管密度(MVD)及肿瘤坏死因子-β(TNF-β)表达的影响。方法:选取40只无特定病原体(SPF)级斯泼累格·多雷(SD)雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、白术多糖组、竹节参皂苷组,每组10只,对模型组、白术多糖组、竹节参皂苷组采用肺叶支气管内灌注致癌碘化油进行肺癌建模,建模成功后,对白术多糖组灌胃80 mg/kg的白术多糖,对竹节参皂苷组灌胃40 mg/kg的竹节参皂苷,正常组不建模,正常组、模型组同期给予灌胃同体积生理盐水。采用苏木精-伊红(HE)染色法检测肺组织病理形态,TUNEL法检测大鼠脑神经损伤,ELISA法检测大鼠血清中TNF-β水平,免疫组织化学法检测肺组织MVD,蛋白质免疫印迹法检测大鼠肺组织核因子κB蛋白表达。结果:正常组肺组织结构、肺泡正常完整,模型组可见明显病理改变,与模型组比较,白术多糖组、竹节参皂苷组病理结构明显改善,且竹节参皂苷组比白术多糖组改善明显;与正常组比较,模型组海马组织细胞凋亡、MVD、核因子κB蛋白表达明显增多(P<0.05),血清中TNF-β表达明显降低(P<0.05),与模型组比较,白术多糖组、竹节参皂苷组大鼠海马组织细胞凋亡、MVD、核因子κB蛋白表达、肿瘤体积明显降低(P<0.05),血清中TNF-β表达明显升高(P<0.05),且竹节参皂苷组比白术多糖组变化显著(P<0.05)。结论:竹节参皂苷可能是通过负向调控NF-κB信号通路显著改善大鼠脑神经损伤及MVD,提高TNF-β表达水平。

竹节参果实呈色生理机制研究

以5个不同呈色时期竹节参果实为试材,采用酶标仪检测法,研究了竹节参果实生长发育过程中叶绿素、类胡萝卜素、花色苷、类黄酮和总酚含量对果实呈色的影响,以期为揭示竹节参果实呈色生理机制提供参考依据。结果表明:果实、果皮叶绿素含量变化规律随果实转色呈逐渐降低趋势,果实绿果期含量最高1.060 mg·g^(-1);类胡萝卜素含量变化规律与叶绿素含量变化规律呈相反趋势,果皮成熟期含量最高0.234 mg·g^(-1);花色苷含量的变化规律与类胡萝卜素含量变化相似呈逐渐上升趋势,果皮成熟期含量最高3.393 mg·g^(-1)。而果实总酚、类黄酮含量合成变化规律呈先升高后降低再升高的趋势,均是成熟时期果皮含量最高,总酚为2.790 mg·g^(-1),类黄酮为7.256 mg·g^(-1)。因此,竹节参果实从绿果期进入转色期时,果实中的叶绿素逐渐被破坏,类胡萝卜素开始在果皮显现出来,花色苷也开始合成,总酚与类黄酮物质对竹节参果实呈色为正向调控作用。

竹节参醇提物化学成分研究

目的研究五加科植物竹节参(Panax japonicus C.A.Mey.)干燥根茎的化学成分。方法竹节参醇提物经柱色谱与制备液相等多种方法进行分离纯化,根据化合物的理化性质、核磁共振图谱及质谱数据对其进行结构解析与鉴定。结果从竹节参中共分离鉴定出了11种皂苷类化学成分,分别为:人参皂苷Re(1)、人参皂苷Rg_(1)(2)、竹节参皂苷Ⅴ(3)、24-(R)珠子参苷(4)、竹节参皂苷Ⅳa(5)、竹节参皂苷Ⅳa甲酯(6)、竹节参皂苷Ⅳ(7)、竹节参皂苷Ⅳ甲酯(8)、竹节参皂苷Ⅰ(9)、金盏花苷E(10)、竹节参皂苷Ⅳa乙酯(11)。结论化合物4、10、11位首次从竹节参中分离得到。

竹节参总皂苷缓解CCl_(4)诱导的大鼠急性肝损伤:基于调控PI3K/Akt/NF-κB信号通路

目的探讨土家族药用植物竹节参提取物总皂苷对CCl_(4)致急性肝损伤的保护作用及潜在的药理学机制。方法将6周龄SPF级雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、联苯双酯组(100 mg/kg)、竹节参总皂苷低、中、高(50、100、200 mg/kg)剂量组,各组8只,除空白组外,其余各组采用CCl_(4)诱导大鼠急性肝损伤模型,处理组于造模中给予药物灌胃干预。比较各组大鼠的血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBil)和碱性磷酸酶(ALP)水平;HE染色观察肝组织病理学改变;免疫组化检测肝脏组织PI3K/Akt/NF-κB信号通路相关分子的表达;酶联免疫法测定肝脏组织总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平;蛋白免疫印迹法检测肝脏组织PI3K-Akt和SIRT6-NF-κB通路相关蛋白表达情况。结果网络药理学分析显示,竹节参总皂苷对急性肝损伤的有治疗作用,其关键的通路为PI3K/Akt等信号通路。血清学和酶联免疫学实验结果显示,与正常组相比,模型组大鼠血清和肝组织的AST、ALT、ALP、TBil和MDA明显增高(P<0.01),T-SOD和GSHPx水平显著降低(P<0.01);与模型组相比,各治疗组ALT、AST、ALP、TBIL和MDA水平显著降低(P<0.01),T-SOD和GSH-Px水平显著升高(P<0.01)。免疫组化结果显示,正常组大鼠肝组织细胞内未见p-NF-κB表达阳性,与正常组相比,模型组中p-NF-κB阳性表达则明显增加,阳性细胞数增多(P<0.01);与模型组比较,各治疗组阳性表达明显减少(P<0.01)。免疫印迹结果显示,相对于正常组,模型组PI3K、p-Akt蛋白的表达水平下降,p-NF-κB、TNF-α和IL-6蛋白的表达水平升高(P<0.05);与模型组相比,各治疗组PI3K、p-Akt和SIRT6蛋白的表达水平显著升高,p-NF-κB p65、TNF-α和IL-6的蛋白的表达水平显著降低(P<0.05)。结论竹节参总皂苷可以通过调节PI3K/Akt和NF-κB通路,有效减缓CCl_(4)诱导的大鼠急性肝损伤,发挥其抗炎、抗氧化应激和保护肝损伤的作用。

竹节参总皂苷通过HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路改善游离脂肪酸诱导肝细胞脂肪变性的实验研究

目的:通过HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路探讨竹节参总皂苷(TSPJ)改善游离脂肪酸(FFA)诱导的肝癌细胞HepG2脂肪变性的作用机制。方法:体外培养HepG2细胞,随机分成对照组、FFA组、FFA+高迁移率族蛋白1(HMGB1) p-NC组、FFA+HMGB1 siRNA组、FFA+TSPJ组、FFA+pcDNA+TSPJ组、FFA+HMGB1 pcDNA+TSPJ组、FFA+HMGB1 p-NC+TSPJ组、FFA+HMGB1 siRNA+TSPJ组。RT-qPCR和Western blot检测HMGB1 siRNA干扰效率;油红O染色观察TSPJ对细胞脂质蓄积的影响;检测TSPJ对甘油三酯(TG)的作用。RT-qPCR和Western blot检测各组细胞HMGB1、蛋白Toll样受体4(TLR4)和核因子κB(NF-κB)表达水平。结果:HepG2细胞经0.5 mmol/L FFA处理后,脂质水平及TG含量升高(P<0.05);TSPJ干预使肝细胞脂质水平及TG含量降低(P<0.05);干扰HMGB1表达后,肝细胞脂质水平及TG含量降低(P<0.05);TSPJ处理的同时过表达HMGB1,FFA诱导的脂质水平和TG含量恢复(P<0.05)。FFA诱导使肝细胞HMGB1、TLR4和NF-κB表达升高(P<0.05);TSPJ处理使肝细胞HMGB1、TLR4和NF-κB表达降低(P<0.05);干扰HMGB1表达后TLR4和NF-κB p65进一步降低(P<0.05)。结论:竹节参总皂苷通过HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路改善FFA诱导肝细胞脂肪变性。

超快速液相色谱-三重四级杆/线性离子阱质谱法比较分析竹节参根与根茎中多元指标成分

目的建立超快速液相色谱-三重四级杆/线性离子阱质谱法(UFLC-QTRAP-MS/MS)同时测定竹节参根与根茎中皂苷、氨基酸及核苷类共33种成分含量的方法。方法采用XBridge C_(18)(4.6 mm×100 mm,3.5μm),以0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈为流动相,梯度洗脱,流速0.8 mL·min^(-1),柱温30℃,多反应监测离子扫描模式(MRM)测定。根据33种目标成分的含量,采用聚类、非线性映射及主成分分析进行综合评价。结果33种成分在一定浓度范围内均呈现良好的线性关系,相关系数均大于0.9990;精密度、重复性和稳定性良好;平均加样回收率为96.90%~101.6%,RSD均≤3.6%。统计分析结果显示从33种成分的含量角度,竹节参根与根茎中皂苷、氨基酸及核苷类成分较为相似。结论所建立的方法准确、可靠,可为竹节参药材内在质量的综合评价和全面控制提供新的方法参考,同时为竹节参根的开发利用提供基础资料。

竹节参降糖作用及其机制的研究进展

目的:了解竹节参降糖作用及其机制研究进展,为竹节参的开发利用和开发高效、低毒、多靶点的抗糖尿病新药提供参考。方法:计算机检索中国知网、万方、维普数据库、百度学术等有关竹节参的成分、降糖药理作用及其机制研究的文献,进行筛选归纳与总结。结果:竹节参降糖作用成分主要为竹节参皂苷。降糖作用机制主要包括:促进胰岛素的释放;增强胰岛素敏感性,改善糖尿病相关胰岛素抵抗;抑制a葡萄糖苷酶、胰脂肪酶活性,延迟饮食碳水化合物和脂肪的肠道吸收,改善糖脂代谢并减轻肥胖。结论:竹节参药理作用广泛,但文献对竹节参降糖作用的研究不够系统、深入和全面,且临床有效性评价较少,后续应更系统、深入、全面的进行竹节参体内、外降糖作用和临床有效性评价的研究。

竹节参总皂苷减轻高脂饮食诱导的小鼠睾丸支持细胞连接功能损伤

目的探究竹节参总皂苷(TSPJ)对高脂饮食诱导的小鼠睾丸支持细胞功能损伤的保护作用及机制。方法将40只C57BL/6J雄性小鼠随机分为正常饮食组、高脂饮食组、TSPJ低剂量(25 mg/kg)组和TSPJ高剂量(75 mg/kg)组,10只/组。正常饮食组给予普通饲料喂养,其余组均给予高脂饲料喂养,TSPJ连续灌胃给药5月,小鼠称重处死,取出睾丸和附睾组织称重并计算其指数;取附睾组织进行精液分析;HE染色观察小鼠睾丸组织形态变化,测量统计生精上皮厚度与生精小管直径;Western blot检测睾丸支持细胞紧密连接功能蛋白ZO-1、Occludin和Claudin11以及外质特化功能蛋白N-cadherin、E-cadherin和β-catenin的表达水平;免疫荧光法检测睾丸组织中ZO-1和β-catenin蛋白定位及表达;免疫荧光双标法检测睾丸支持细胞中LC3B、p-AKT和p-mTOR表达变化。结果与高脂饮食组相比,TSPJ能明显减轻高脂饮食小鼠体质量(P<0.001),增加睾丸和附睾指数(P<0.05,P<0.01),提高精子浓度与精子活率(P<0.05,P<0.01),改善睾丸组织形态异常,增加生精上皮厚度(P<0.05,P<0.001),但对生精小管直径无明显影响。Western blot结果显示,TSPJ能增加ZO-1、Occludin、N-cadherin、E-cadherin和β-catenin的蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01,P<0.001),但对Claudin11的表达无显著性影响;免疫荧光结果显示,TSPJ能增加睾丸组织中ZO-1和β-catenin蛋白的表达(P<0.001),下调睾丸支持细胞中LC3B的表达,上调p-AKT和p-mTOR蛋白表达。结论TSPJ能减轻高脂饮食诱导的睾丸支持细胞连接功能损伤,改善小鼠生精功能减退,其机制可能与激活支持细胞AKT/mTOR信号通路抑制自噬有关。

竹节参多糖的结构表征及体外免疫活性研究

目的:从竹节参中分离纯化均一多糖,对其进行结构表征和体外免疫活性研究。方法:采用水提醇沉法制备粗多糖,经Sevag法脱蛋白得到精制的竹节参多糖(PJPS),通过乙醇分步沉淀法、DEAE-52和Sephacryl S-400柱色谱法分离纯化得到均一多糖PPS,采用高效凝胶渗透色谱HPGPC-RID测定PPS的相对分子量,1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生HPLC法测定单糖组成,GC-MS分析甲基化产物,IR、一维和二维核磁等方法对PPS进行结构表征,并采用小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7细胞株,观察了PJPS和PPS对细胞活力、NO释放、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)表达的影响。结果:PPS是一种葡聚糖,相对分子质量为3.3 kDa,PPS的主链为α-D-(1→4)-连接的葡聚糖,每5个Glcp糖基的6位与α-t-Glcp连接形成侧链。PPS能促进RAW 264.7细胞增殖,PJPS和PPS能促进细胞分泌NO、TNF-α和IL-6。结论:PPS为从竹节参中分离得到的均一多糖,具有一定的免疫活性,对PPS结构和活性的研究可为竹节参的深入开发和利用提供参考。

竹节参总皂苷对脂多糖诱导的BV2细胞炎症反应的影响及机制研究

目的观察竹节参总皂苷(TSPJ)对脂多糖诱导的小鼠小胶质细胞BV2炎症反应的影响,探讨其改善炎症的作用机制。方法采用脂多糖诱导BV2细胞炎症模型,将细胞分为正常组、模型组和TSPJ低、中、高浓度组,分别进行干预后,ELISA检测细胞上清液一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-4和IL-10含量,免疫荧光染色检测小胶质细胞标志物CD86、Arginase-1及自噬蛋白LC3表达,Western blot检测自噬相关蛋白p62、Beclin1、LC3及Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR蛋白表达。结果与正常组比较,模型组细胞上清液NO、TNF-α、IL-1β含量明显增加,IL-4、IL-10含量明显减少,细胞CD86表达明显升高,Arginase-1、LC3表达明显降低,Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达明显降低,p62、p-Akt、p-mTOR蛋白表达明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,TSPJ高浓度组细胞上清液NO、TNF-α、IL-1β含量明显减少,IL-4和IL-10含量明显增加,细胞CD86表达明显降低,Arginase-1、LC3表达明显升高,Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达明显升高,p62、p-Akt、p-mTOR蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与TSPJ组比较,TSPJ和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤联用后细胞Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达明显降低(P<0.01),p62蛋白表达明显升高(P<0.01);TSPJ和Akt抑制剂GSK690693联用后细胞p-Akt、p-mTOR蛋白表达明显降低(P<0.01)。结论TSPJ能抑制脂多糖诱导的BV2细胞炎症反应,通过调节促炎因子和抗炎因子分泌,促进BV2细胞由M1型向M2转化,维持M1/M2平衡,其抗炎作用与提高细胞自噬水平、抑制Akt/mTOR通路磷酸化有关。

基于网络药理学与分子对接探讨土家药复方竹节参片对肝损伤的作用机制

应用网络药理学及分子对接技术,探讨土家药复方竹节参片治疗肝损伤(Liver injury,LI)的物质基础及作用机制。从TCMSP数据库和中国知网数据库中提取复方竹节参片的化合物及靶点信息;Uniprot网站将靶点信息转换为Gene,将中药-成分-Gene信息导入Cytoscape V3.8.2获得中药-成分-Gene网络;利用OMIM、GeneCards和DrugBank网站提取“Liver injury”的疾病Gene,Excel绘制Venn图获得成分-疾病交集靶点,并构建交集靶点-成分网络图确定核心成分;利用STRING网站获得交集靶点的蛋白互作(PPI)网络及核心靶点,Matascape网站对核心靶点进行基因本体(GO)功能、京都基因和基因组数据库(KEGG)通路富集分析;用AutoDock工具进行核心成分与核心靶点的分子对接。复方竹节参片中共筛选出68种有效活性成分,治疗LI的核心成分有槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇、木犀草素、(20S)-原人参二醇和β-胡萝卜素等;治疗LI的核心靶点15个,分别为STAT3、JUN、AKT1、TP53、TNF、MAPK1、IL6、RELA、VEGFA、MAPK8、MAPK14、PIK3CA、MYC、CTNNB1和FOS。靶点主要涉及调节与DNA结合的转录因子活性、蛋白激酶活性、细胞氧化应激及炎症反应、癌症相关蛋白的表达和血管生长等生物学过程;重要通路有乙型和丙型肝炎病毒途径、癌症及癌症中的蛋白多糖、流体剪切应力和动脉粥样硬化、糖尿病并发症中的AGE-RAGE、TNF、Toll样受体和MAPK等信号通路。分子对接结果显示,核心成分与关键靶点的结合活性良好。本研究表明,复方竹节参片可能通过作用于上述STAT3、JUN和AKT1等核心靶点,参与相关生物进程及通路的调节,进而发挥对LI的多成分-多靶点-多通路的治疗作用,本文为进一步研究复方竹节参片对LI的作用机制提供理论参考。

HPLC同时测定竹节参中竹节参皂苷Ⅴ和Ⅳa含量

目的：建立HPLC同时测定竹节参中竹节参皂苷Ⅴ和Ⅳa的含量测定方法,并对不同产地的竹节参药材进行含量测定。方法：采用Hibar C18色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,柱温30℃,检测波长203 nm。结果：竹节参皂苷Ⅴ在0.36--7.20μg（r〉0.999）范围内线性关系良好,平均加样回收率为96.0%,（RSD=0.73%,n=6）;竹节参皂苷Ⅳa在0.57~11.40μg（r〉0.999）范围内线性关系良好,平均加样回收率为104.2%（RSD=0.86%,n=6）。结论：该方法结果准确、重复性好,可用于竹节参药材的质量控制。

竹节参化学成分的研究(Ⅱ)

竹节参中分离获得四种皂甙单体:pjs-2,pjs-3,pjs-4,pjs-6。经光谱分析及理化常数测定,证明pjs-2、pjs-4为首次由该属植物中分离得到的齐墩果酸型皂甙;pjs-3为具有强壮安定作用的竹节参皂甙Ⅳ(chikusetsusaponin Ⅳ或araloside A);pjs-6与人参皂甙Re(ginsenoside Re)结构相同。

竹节参总皂苷通过减轻成纤维细胞生长因子21抵抗改善自然衰老大鼠的认知功能障碍

目的探讨竹节参总皂苷对自然衰老大鼠认知功能障碍的改善作用及其相关机制。方法将40只18月龄SD雄性大鼠随机分为模型组、竹节参总皂苷低剂量组、竹节参总皂苷高剂量组、亚精胺组,另取10只5月龄雄性SD大鼠作为对照组。竹节参总皂苷低、高剂量组大鼠分别给予含有药物的混合饲料(给药剂量为10、30 mg·kg^(-1)),亚精胺组大鼠自由饮用含亚精胺的饮用水(浓度为1 mmol·L^(-1)),连续给药4个月。采用Morris水迷宫实验评价大鼠认知功能;HE染色法检测皮层及海马神经元的病理变化;Nissl染色法检测皮层及海马神经元尼氏体的变化;透射电镜检测皮层线粒体超微结构的变化;Western Blot法检测皮层及海马组织成纤维细胞生长因子21(FGF21)-FGFR1/β-Klotho信号通路相关蛋白的表达。结果与对照组比较,模型组大鼠的逃避潜伏期显著延长(P<0.01),目标平台穿越次数、目标象限停留时间均显著减少(P<0.01),首次到达目标平台路程显著增加(P<0.01);神经元损伤明显,尼氏体数目降低,神经元线粒体出现空泡化,嵴排布紊乱;大鼠皮层及海马组织中FGF21蛋白表达水平显著升高(P<0.01),FGFR1、β-klotho、P-ERK蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,竹节参总皂苷高剂量组大鼠的逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),目标平台穿越次数、目标象限停留时间均显著增加(P<0.01),首次到达目标平台路程显著减少(P<0.01);竹节参总皂苷低、高剂量组大鼠的神经元损伤明显减轻,尼氏体数目增加,线粒体空泡化、嵴排布紊乱现象消失;皮层及海马组织中FGF21蛋白表达水平显著降低(P<0.01),P-ERK、FGFR1、β-klotho蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论竹节参总皂苷能有效改善自然衰老大鼠的认知功能障碍,可能与通过FGF21-FGFR1/β-klotho信号通路减轻FGF21抵抗,并改善神经元线粒体结构损伤有关。

基于P53、Bax、Caspase-3基因表达探讨竹节参水提取物对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响

目的基于P53、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3基因表达探讨竹节参水提取物对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响。方法以宫颈癌HeLa细胞为研究对象,给予不同浓度竹节参水提取物(0、50、100、150μg/ml)进行培养(分别为A、B、C、D组),MTT法检测HeLa细胞增殖抑制情况;TUNEL法对比HeLa细胞凋亡率;流式术观察HeLa细胞周期;苏木素-伊红(HE)染色观察细胞形态;RT-PCR法测定P53、Bax、Caspase-3 mRNA表达水平。结果与A组相比,B组宫颈癌细胞增殖活力明显减弱(P<0.05);与B组相比,C组宫颈癌细胞增殖活力明显减弱(P<0.05);与C组相比,D组宫颈癌细胞增殖活力减弱。与A组相比,B组宫颈癌细胞凋亡率明显增加(P<0.05);与B组相比,C组宫颈癌细胞凋亡率明显增加(P<0.05);与C组相比,D组宫颈癌细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。HeLa细胞周期在竹节参水提取物的作用下G0/G1期上升,S期下降。A组未添加竹节参水提取物,HeLa细胞细胞核形态为卵圆状,染色也较为均匀;B组添加竹节参水提取物后,部分HeLa细胞细胞核形态改变,出现缩小和浓缩现象,荧光现象也增强;C、D组细胞因提取物浓度增加,细胞核形态改变加剧,荧光亮度攀升,细胞核边缘破碎。宫颈癌Hela细胞中P53、Bax、Caspase-3 mRNA表达随竹节参水提取物浓度的增加而增加。结论竹节参水提取物可以降低体外宫颈癌细胞的增殖活力,并诱导其自噬和凋亡,这可能是通过竹节参水提取物调控P53、Bax、Caspase-3基因表达来实现的。

竹节参总皂苷中10种活性成分在正常、肥胖大鼠体内药动学比较

目的比较竹节参总皂苷中人参皂苷Re、Rg1、Rf、Rb1、Rg2、Rd,竹节参皂苷Ⅴ、Ⅳ、Ⅳa,拟人参皂苷RT1在正常、肥胖大鼠体内药动学。方法大鼠随机分为正常组和肥胖组,灌胃给予总皂苷0.4%CMC-Na混悬液(0.8 g/kg),于0、0.08、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、4、6、8、12、24、48 h采血,UPLC-MS法测定各活性成分血药浓度,计算主要药动学参数。结果各活性成分C_(max)、AUC_(0~t)与其在总皂苷中的含量呈正相关。竹节参皂苷Ⅴ、Ⅳ、Ⅳa为体内主要暴露成分,t_(1/2)、MRT_(0~t)更长。与正常组比较,肥胖组各活性成分C_(max)(除人参皂苷Rg1)、AUC_(0~t)(除人参皂苷Re、Rg1和拟人参皂苷RT1)降低,t_(1/2)、MRT_(0~t)、T_(max)无明显变化。结论肥胖可影响竹节参总皂苷中部分活性成分的体内药动学,竹节参皂苷Ⅴ、Ⅳ、Ⅳa可能是竹节参总皂苷改善肥胖的关键组分。

竹节参多糖通过PI3K/AKT/NF-κB信号通路对急性肝损伤大鼠的影响

以竹节参(Panax japonicus)为原料,经水提醇沉法制备了竹节参多糖(PSPJ),通过观察和记录大鼠一般情况及肝脏指数(肝脏质量/体质量)探讨了PSPJ通过PI3K/AKT/NF-κB信号通路干预CCl4诱导的急性肝损伤(ALI)大鼠的作用机制;采用苏木素-伊红(H&E)染色法评价了PSPJ对肝组织病理变化的改善作用;采用免疫组织化学(IHC)染色检测了肝脏组织NF-κB的表达情况;通过蛋白免疫印迹(Westernblot)检测考察了PSPJ对ALI大鼠肝脏PI3K/AKT/NF-κB信号通路相关蛋白及炎症指标的表达水平。结果表明,与空白对照组相比,模型组的体质量、肝脏质量和肝脏指数均显著上升(P<0.05,表示差异有统计学意义,下同),模型组出现大量肝组织炎症浸润,用药组肝脏病理变化明显缓解;与空白对照组比较,模型组大鼠肝组织p-PI3K蛋白表达显著下降(P<0.01),PI3K、p-AKT、p-NF-κB、IL-1β蛋白表达显著升高(P<0.05);药物组p-PI3K蛋白表达显著上升(P<0.05),p-AKT、IL-1β蛋白表达显著下降(分别为P<0.01、P<0.05)。PSPJ通过PI3K/AKT/NF-κB通路信号中的相关关键蛋白表达减轻了CCl4诱导的大鼠ALI症状。

濒危药用植物竹节参种子形态特征与萌发特性研究

[目的]探索竹节参种子的休眠特性,研究能够促进其种子萌发的有效方法。[方法]通过测定竹节参种子的千粒重、含水量、生活力以及不同浓度激素处理下种子的萌发率、根长和茎长,为竹节参高效繁育提供理论和技术支撑。[结果]竹节参在鲜果成熟时,种胚处于球形胚阶段,发育不完全,种子具有休眠特性。种子形态休眠自然解除需180 d,湿沙储藏能够有效促进竹节参种子完成“胚后熟”过程,加快种子萌发。竹节参种子籽粒饱满,含水量为54.64%,生活力为85.12%,250 mg/L GA3可有效提高竹节参种子的萌发率,该处理下竹节参茎长的平均值达到54 mm,其次是150mg/L IAA和25 mg/L 6-BA处理,茎长度分别为23 mm和20 mm。[结论]在竹节参种子繁育过程中,湿沙储藏结合250mg/L GA3浸种处理可有效提高种子发芽率,使出苗更加整齐,可作为竹节参高效繁育的重要手段。