竹节参皂苷IVa通过抗炎和抗氧化减轻脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤

目的:探讨竹节参皂苷IVa(saponin from Panax japonicus IVa,SPJ IVa)对大鼠急性肺损伤的影响,并对其可能的保护机制进行初步的探索。方法:将60只SD大鼠随机均分为4组,每组15只:对照组、模型组、低剂量SPJ IVa组和高剂量SPJ IVa组。以脂多糖(LPS,2 mg/kg)气管内滴注法建立大鼠急性肺损伤模型,低、高剂量SPJ IVa组大鼠在造模后30 min分别腹腔注射15和45 mg/kg SPJ IVa。造模后24 h,收集血清、支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)和肺组织。HE染色法评估肺组织病理形态学变化;称重法测定肺组织湿重/干重值;ELISA法检测血清和BALF中白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;试剂盒法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)的水平;免疫组织化学标记cleaved caspase-3法和TUNEL染色法评估肺组织中细胞凋亡情况;Western blot法测定肺组织中核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)、血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)、核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65和Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)表达。结果:与对照组比较,模型组肺组织发生明显损伤病变,肺损伤积分(0.21±0.22 vs 2.98±0.46)和湿/干重比值(3.09±0.41 vs 6.36±0.61)显著上升(均P<0.01);与模型组比较,低、高剂量SPJ IVa组肺损伤积分(1.80±0.31和1.05±0.25 vs 2.98±0.46)和湿/干重比值(5.25±0.44和3.89±0.35 vs 6.36±0.61)显著降低(均P<0.01)。LPS可致血清和BALF中促炎因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)和氧化指标MDA水平升高(P<0.01),抗氧化指标SOD、GSH降低(P<0.01),低、高剂量SPJ IVa治疗均可降低LPS导致的上述促炎因子和氧化指标MDA(P<0.01),并升高SOD和GSH水平(P<0.05或P<0.01)。模型组肺组织中可见显著细胞凋亡,低、高剂量SPJ IVa治疗可抑制LPS导致的肺组织中TUNEL阳性细胞和cleaved caspase-3表达(P<0.01)。模型组肺组织中Nrf2、HO-1、NF-κB p65和TLR4表达高于对照组(P<0.01);低、高剂量SPJ IVa治疗后,Nrf2和HO-1表达进一步上调(P<0.01),而NF-κB p65和TLR4表达降低(P<0.01)。结论:SPJ IVa可抑制LPS所致ALI大鼠肺损伤,此作用可能与其抑制TLR4/NF-κB和Nrf2/HO-1介导的炎症反应和氧化应激有关。

基于标准汤剂的竹节参配方颗粒质量标准研究

目的基于标准汤剂建立竹节参配方颗粒质量标准。方法HPLC法测定标准汤剂、配方颗粒中人参皂苷Ro、竹节参皂苷Ⅳa含量,计算转移率。建立标准汤剂HPLC特征图谱,并进行聚类分析、主成分分析。再建立配方颗粒HPLC特征图谱。结果17批标准汤剂HPLC特征图谱中有9个共有峰,相似度大于0.9(除S6、S12外),聚为2类,3种主成分累积方差贡献率达86.7%。3批配方颗粒中人参皂苷Ro含量为83.1~88.6 mg/g,转移率为53.1%~55.5%;竹节参皂苷Ⅳa含量为14.8~15.0 mg/g,转移率为47.4%~48.1%。3批配方颗粒HPLC特征图谱中有9个共有峰,相似度分别为0.998、0.998、0.999。结论该方法合理可靠,可全面评价竹节参配方颗粒质量,为其质量控制提供参考。

竹节参果实呈色生理机制研究

以5个不同呈色时期竹节参果实为试材,采用酶标仪检测法,研究了竹节参果实生长发育过程中叶绿素、类胡萝卜素、花色苷、类黄酮和总酚含量对果实呈色的影响,以期为揭示竹节参果实呈色生理机制提供参考依据。结果表明:果实、果皮叶绿素含量变化规律随果实转色呈逐渐降低趋势,果实绿果期含量最高1.060 mg·g^(-1);类胡萝卜素含量变化规律与叶绿素含量变化规律呈相反趋势,果皮成熟期含量最高0.234 mg·g^(-1);花色苷含量的变化规律与类胡萝卜素含量变化相似呈逐渐上升趋势,果皮成熟期含量最高3.393 mg·g^(-1)。而果实总酚、类黄酮含量合成变化规律呈先升高后降低再升高的趋势,均是成熟时期果皮含量最高,总酚为2.790 mg·g^(-1),类黄酮为7.256 mg·g^(-1)。因此,竹节参果实从绿果期进入转色期时,果实中的叶绿素逐渐被破坏,类胡萝卜素开始在果皮显现出来,花色苷也开始合成,总酚与类黄酮物质对竹节参果实呈色为正向调控作用。

竹节参皂苷调控核因子κB信号通路对肺癌大鼠的影响

目的:探究竹节参皂苷调控核因子κB(NF-κB)信号通路对肺癌大鼠脑神经损伤、微血管密度(MVD)及肿瘤坏死因子-β(TNF-β)表达的影响。方法:选取40只无特定病原体(SPF)级斯泼累格·多雷(SD)雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、白术多糖组、竹节参皂苷组,每组10只,对模型组、白术多糖组、竹节参皂苷组采用肺叶支气管内灌注致癌碘化油进行肺癌建模,建模成功后,对白术多糖组灌胃80 mg/kg的白术多糖,对竹节参皂苷组灌胃40 mg/kg的竹节参皂苷,正常组不建模,正常组、模型组同期给予灌胃同体积生理盐水。采用苏木精-伊红(HE)染色法检测肺组织病理形态,TUNEL法检测大鼠脑神经损伤,ELISA法检测大鼠血清中TNF-β水平,免疫组织化学法检测肺组织MVD,蛋白质免疫印迹法检测大鼠肺组织核因子κB蛋白表达。结果:正常组肺组织结构、肺泡正常完整,模型组可见明显病理改变,与模型组比较,白术多糖组、竹节参皂苷组病理结构明显改善,且竹节参皂苷组比白术多糖组改善明显;与正常组比较,模型组海马组织细胞凋亡、MVD、核因子κB蛋白表达明显增多(P<0.05),血清中TNF-β表达明显降低(P<0.05),与模型组比较,白术多糖组、竹节参皂苷组大鼠海马组织细胞凋亡、MVD、核因子κB蛋白表达、肿瘤体积明显降低(P<0.05),血清中TNF-β表达明显升高(P<0.05),且竹节参皂苷组比白术多糖组变化显著(P<0.05)。结论:竹节参皂苷可能是通过负向调控NF-κB信号通路显著改善大鼠脑神经损伤及MVD,提高TNF-β表达水平。

竹节参醇提物化学成分研究

目的研究五加科植物竹节参(Panax japonicus C.A.Mey.)干燥根茎的化学成分。方法竹节参醇提物经柱色谱与制备液相等多种方法进行分离纯化,根据化合物的理化性质、核磁共振图谱及质谱数据对其进行结构解析与鉴定。结果从竹节参中共分离鉴定出了11种皂苷类化学成分,分别为:人参皂苷Re(1)、人参皂苷Rg_(1)(2)、竹节参皂苷Ⅴ(3)、24-(R)珠子参苷(4)、竹节参皂苷Ⅳa(5)、竹节参皂苷Ⅳa甲酯(6)、竹节参皂苷Ⅳ(7)、竹节参皂苷Ⅳ甲酯(8)、竹节参皂苷Ⅰ(9)、金盏花苷E(10)、竹节参皂苷Ⅳa乙酯(11)。结论化合物4、10、11位首次从竹节参中分离得到。

Box-Behnken设计优化竹节参多糖酶法提取工艺

目的:优选竹节参多糖的最佳提取工艺,评价其体外抗氧化活性。方法:采用单因素试验和Box-Behnken响应面设计,以添加酶量、酶解温度、酶解时间、液料比作为考察因素,通过单因素实验得到最佳实验条件,利用Box-Behnken响应面法设计获得竹节参多糖的最佳酶法提取工艺;并采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)法测定竹节参多糖的抗氧化活性。结果:优化得到竹节参多糖酶法提取的最佳工艺为采用纤维素酶酶解;酶量为3%,酶解温度52℃,酶解时间2 h,液料比55 mL/g,此条件下预测多糖得率为86.19 mg/g,并具有较强的抗氧化活性。结论:优选出的竹节参多糖的提取工艺切实可行,竹节参多糖具有一定的抗氧化能力。

竹节参总皂苷缓解CCl_(4)诱导的大鼠急性肝损伤:基于调控PI3K/Akt/NF-κB信号通路

目的探讨土家族药用植物竹节参提取物总皂苷对CCl_(4)致急性肝损伤的保护作用及潜在的药理学机制。方法将6周龄SPF级雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、联苯双酯组(100 mg/kg)、竹节参总皂苷低、中、高(50、100、200 mg/kg)剂量组,各组8只,除空白组外,其余各组采用CCl_(4)诱导大鼠急性肝损伤模型,处理组于造模中给予药物灌胃干预。比较各组大鼠的血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBil)和碱性磷酸酶(ALP)水平;HE染色观察肝组织病理学改变;免疫组化检测肝脏组织PI3K/Akt/NF-κB信号通路相关分子的表达;酶联免疫法测定肝脏组织总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平;蛋白免疫印迹法检测肝脏组织PI3K-Akt和SIRT6-NF-κB通路相关蛋白表达情况。结果网络药理学分析显示,竹节参总皂苷对急性肝损伤的有治疗作用,其关键的通路为PI3K/Akt等信号通路。血清学和酶联免疫学实验结果显示,与正常组相比,模型组大鼠血清和肝组织的AST、ALT、ALP、TBil和MDA明显增高(P<0.01),T-SOD和GSHPx水平显著降低(P<0.01);与模型组相比,各治疗组ALT、AST、ALP、TBIL和MDA水平显著降低(P<0.01),T-SOD和GSH-Px水平显著升高(P<0.01)。免疫组化结果显示,正常组大鼠肝组织细胞内未见p-NF-κB表达阳性,与正常组相比,模型组中p-NF-κB阳性表达则明显增加,阳性细胞数增多(P<0.01);与模型组比较,各治疗组阳性表达明显减少(P<0.01)。免疫印迹结果显示,相对于正常组,模型组PI3K、p-Akt蛋白的表达水平下降,p-NF-κB、TNF-α和IL-6蛋白的表达水平升高(P<0.05);与模型组相比,各治疗组PI3K、p-Akt和SIRT6蛋白的表达水平显著升高,p-NF-κB p65、TNF-α和IL-6的蛋白的表达水平显著降低(P<0.05)。结论竹节参总皂苷可以通过调节PI3K/Akt和NF-κB通路,有效减缓CCl_(4)诱导的大鼠急性肝损伤,发挥其抗炎、抗氧化应激和保护肝损伤的作用。

不同栽培年限竹节参中主要成分含量的动态变化

[目的]建立同时测定竹节参药材中3种主要化学成分(竹节参皂苷Ⅴ、竹节参皂苷Ⅳa和竹节参皂苷Ⅳ)的HPLC含量测定方法;在此基础上,考察湖北恩施竹节参各主要成分含量与栽培年限之间的动态变化。[方法]采用HPLC对不同生长年限的竹节参栽培品中竹节参皂苷Ⅴ、竹节参皂苷Ⅳa、竹节参皂苷Ⅳ的含量进行测定。色谱条件:色谱柱为Ultimate XB-C18色谱柱,(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈-浓度0.2%乙酸铵溶液(32∶68,V/V);流速为1.0 ml/min;检测波长203 nm,柱温30℃。[结果]竹节参皂苷Ⅴ、竹节参皂苷Ⅳa、竹节参皂苷Ⅳ的含量分别在0.06～4.00、0.04～3.00、0.04～3.00μg/ml浓度范围内线性关系良好(r1=0.999 6、r2=0.999 4、r3=0.999 5);平均加样回收率分别为100.61%、99.06%、101.12%,RSD分别为1.28%、1.63%、0.89%;竹节参中各主要成分含量随栽培年限变化较大。[结论]该方法简便、可靠,可用于测定竹节参各主要成分的含量;通过监测竹节参各主要成分的累积规律,可为制定竹节参规范化栽培措施提供依据。

蒽酮硫酸法与苯酚硫酸法测定竹节参多糖含量的比较研究

目的考察蒽酮硫酸法与苯酚硫酸法测定竹节参多糖(Panax japonicus polysaccharides,PJPS)含量的可行性并比较其差异,建立竹节参多糖含量测定方法。方法对蒽酮硫酸法和苯酚硫酸法测定竹节参多糖含量的显色条件和方法学进行研究,比较2种方法测定结果的差异。结果蒽酮硫酸法含量测定结果高于苯酚硫酸法,其差异有统计学意义,蒽酮硫酸法的线性、重现性和稳定性都优于苯酚硫酸法。结论蒽酮硫酸法比苯酚硫酸法更适合测定竹节参中多糖的含量。

竹节参总皂苷对环磷酰胺致免疫低下小鼠免疫功能的影响

目的研究竹节参总皂苷(Total Saponins of Panax japonicus Rhizoma,TSPJ)对环磷酰胺诱导的免疫低下小鼠免疫功能的影响。方法腹腔注射环磷酰胺(Cy)复制免疫功能低下的动物模型;摘取脾脏称质量并计算脾脏指数,MTT法检测T淋巴细胞增殖活性,微量分光光度法检测血清溶血素抗体HC50形成水平,流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群(CD4+T细胞、CD8+T细胞)比例、B细胞及NK细胞比例,ELISA法检测血清IFN-γ量。结果 TSPJ可增加免疫低下小鼠脾脏质量与脾脏指数,促进脾脏T淋巴细胞增殖,提高免疫低下小鼠血清溶血素水平,上调外周血CD4+/CD8+比例、B淋巴细胞及NK细胞比例,提高血清中IFN-γ的水平。结论 TSPJ通过刺激小鼠的特异性及非特异性免疫应答,对环磷酰胺致免疫低下小鼠的免疫功能有良好的增强作用。

大孔吸附树脂富集纯化竹节参总皂苷工艺条件优选

目的研究大孔吸附树脂富集纯化竹节参中总皂苷的工艺条件及参数。方法以竹节参总皂苷的吸附量和洗脱率为指标,筛选大孔吸附树脂,并研究所选树脂富集纯化竹节参总皂苷的吸附和洗脱条件。结果 D101树脂对竹节参总皂苷有较好的吸附分离性能。最佳工艺条件为上样质量浓度为0.2 g生药/mL,以3BV 70%乙醇溶液洗脱,吸附及洗脱体积流量均为1 mL/min,洗脱液蒸干,即得纯化的竹节参总皂苷提取物。纯化后竹节参总皂苷质量分数为82.53%,精制度达338.81%。结论 D101大孔吸附树脂富集纯化竹节参中总皂苷是可行的。

竹节参与珠子参质量比较研究

目的研究建立珠子参和竹节参中竹节参皂苷Ⅳa的含量测定方法,并比较二者化学成分的差别。方法采用薄层色谱法进行珠子参和竹节参鉴别,高效液相色谱法测定二者竹节参皂苷Ⅳa的含量。结果二者在主要化学成分含量和种类上存在一定区别,珠子参中竹节参皂苷Ⅳa含量在2.42%~4.99%之间,而竹节参中竹节参皂苷Ⅳa含量3.09%。结论珠子参和竹节参化学成分存在一定差异。

紫外分光光度法测定竹节参中微量元素硒的含量

采用湿法消解处理了来自中国不同地区的竹节参药材,调节pH将Se6+还原成Se4+,Se4+与邻苯二胺络合,用紫外分光光度计在335nm波长下,测定了样品中硒的含量.结果表明:湖北恩施地区竹节参药材中硒的含量最高,其中建始县和咸丰县竹节参药材中硒的含量分别为1.68 mg/g和1.52 mg/g.此法操作简单、灵敏、快速、稳定,可作为竹节参中硒的微量测定.

竹节参中总皂苷和三萜苷元齐墩果酸的测定

目的建立竹节参中总皂苷和齐墩果酸的含量测定方法。方法以人参皂苷Re为对照品,采用香草醛-高氯酸比色法测定竹节参中总皂苷的含量;HPLC测定其三萜苷元齐墩果酸,色谱条件为YMC-pack C18-AQ色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(90:10:0.04:0.02),检测波长为210nm。结果测定了湖北五峰、恩施以及四川峨嵋地区竹节参样品中总皂苷和齐墩果酸的含量。结论所建方法均符合含量测定的要求,可分别作为测定竹节参中总皂苷和齐墩果酸含量的方法。

竹节参名称及基原考

《科学的民间药草》是竹节参一名的最早来源,但药用记载应是清代《本草纲目拾遗》。民间作竹节参药用的植物主要是竹节参(大叶三七)PanaxjaponicumC.A.Mey.及其三个变种:羽叶三七Panax japonicusC.A.Mey.var.bipinnatifidus(Seem.)C.Y.Wu et Feng、秀丽假人参(扣子七)Panax japonicusC.A.Mey.var.major(Burk.)C.Y.Wu et K.M.Feng.、狭叶竹节参PanaxjaponicusC.A.Mey.var.angustifolius(burk.)Cheng et Chu.等,与《中华人民共和国国药典》中竹节参基原为竹节参Panax japonicumC.A.Mey.的规定不一致。建议加强药化、药效学研究,为归并提供依据,并为竹节参种质提纯和选育遗传稳定的竹节参栽培种。

HPLC测定竹节参中人参皂苷Rg_1、Re、Rb_1含量

目的建立同时测定竹节参中人参皂苷Rg1、Re、Rb1含量的高效液相色谱方法。方法用70%乙醇超声提取竹节参药材,采用Agilent Poroshell 120 C18色谱柱(4.6 mm×100 mm,2.7μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸,梯度洗脱,流速1.0 m L/min,检测波长203 nm,柱温30℃,进样量10μL。结果在该色谱条件下,人参皂苷Rg1、Re、Rb1达到基线分离,线性关系良好,加样回收率分别为99.5%、103.0%、100.5%。结论该方法操作简便,重复性好,分析周期短,能准确测定竹节参中人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量,可为竹节参的质量控制提供参考依据。

竹节参多糖对环磷酰胺致免疫低下小鼠的恢复作用研究

目的:研究竹节参多糖(Panax japonicus polysaccharides)对环磷酰胺所致免疫低下模型小鼠免疫功能的调节作用。方法:腹腔注射环磷酰胺(cyclophosphamide,Cy)制备免疫功能低下模型,计算脾脏指数;MTT法检测脾淋巴细胞增殖活性;分光光度法检测血清溶血素的含量;QHS法检测脾脏分泌抗体形成细胞的能力;流式细胞术检测外周血NK细胞百分比。结果:竹节参多糖能提高免疫低下小鼠的脾脏指数;显著促进脾淋巴细胞的增殖;促进血清溶血素的生成及QHS反应;提高外周血NK细胞比例。结论:竹节参多糖具有较好的免疫增强作用,对免疫低下小鼠的免疫系统具有恢复作用。

鄂产竹节参多糖成分抗疲劳作用的研究

目的：研究鄂产竹节参多糖类成分对小鼠的抗疲劳作用。方法：取♂性昆明种小鼠，体重20～25g，随机分为低、中、高3组，经灌胃给予小鼠竹节参多糖提取物300，600，1200mg·kg^-1·d^-1。同时设空白对照组（纯化水），连续灌胃30d。分别观察小鼠的体重变化情况、负重游泳时间、血清尿素氮、肝糖原和血乳酸的含量。结果：低、中、高3个剂量组对实验小鼠体重变化均无影响，可显著延长小鼠的游泳时间，降低小鼠血清尿素氮的含量；中、高剂量组能明显降低运动后小鼠血乳酸含量并提高肝糖原的储备值。结论：鄂产竹节参多糖类成分具有抗疲劳的作用。

竹节参总皂苷的制备工艺及含量测定

目的：优选竹节参总皂苷的提取纯化工艺，并测定其含量。方法：运用正交试验设计，以药材中总皂苷的转移率作为考察指标，筛选最佳提取工艺；用正丁醇萃取合并醇溶-丙酮沉淀法纯化得到精制皂苷；分别采用分光光度法和HPLC测定其中总皂苷和三萜苷元齐墩果酸的含量。结果：提取工艺以药材粗粉10倍量的60％乙醇，浸泡2h后加热回流提取3次，每次3h最佳；纯化工艺中以正丁醇萃取3次，以85％乙醇充分溶解后，边搅拌边缓慢加入4～5倍量丙酮沉淀效果最佳。经纯化后总皂苷可达83．48％，其中三萜苷元齐墩果酸可达38．30％。结论：本工艺条件对竹节参总皂苷的提取收率高且稳定，测定方法简便可行，重现性好。

竹节参总皂苷对中动脉栓塞模型大鼠血液流变学的影响

目的研究竹节参总皂苷对中动脉栓塞模型大鼠血液流变学的影响,进一步明确其阻抑脑缺血损伤的作用机理。方法建立大鼠永久性中动脉栓塞模型(MCAO),观察竹节参总皂苷对模型大鼠红细胞变形性、聚集性、血液粘度的影响。结果竹节参总皂苷(200、100、50mg/kg)能显著降低中动脉栓塞模型大鼠全血粘度、红细胞聚集性,增加红细胞变形性。结论竹节参总皂苷对脑缺血损伤的保护作用可能与其改善中动脉栓塞模型大鼠血液流变学指标有关。