去葡萄糖竹节参皂苷Ⅳa对缺氧复氧心肌细胞损伤的保护作用

目的研究去葡萄糖竹节参皂苷Ⅳa(DCⅣa)是否为龙牙木匆心木总皂苷抗心肌缺血的有效成分之一。方法取体外培养的新生大鼠心肌细胞建立缺氧6 h复氧3 h心肌细胞损伤模型,并于缺氧及复氧开始时分别加入终浓度为2.5,1.0和0.1 mg.L-1的DCⅣa。检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)漏出量,丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。MTT法检测心肌细胞存活率。结果DCⅣa(2.5,1.0 mg.L-1)显著减少缺氧及复氧后LDH和CK漏出量,降低MDA含量,提高SOD活性,提高心肌细胞存活率。结论DCⅣa为龙牙木匆心木总皂苷抗心肌缺血的有效成分之一,可减轻缺氧复氧对心肌细胞的损伤,对心肌细胞具有直接的保护作用。

去葡萄糖竹节参皂苷Ⅳa抗实验性心律失常作用

目的研究去葡萄糖竹节参皂苷Ⅳa(DCⅣa)是否具有抗实验性心律失常的作用。方法采用氯化钡、乌头碱、毒毛花苷G及结扎左冠状动脉前降支诱发大鼠或豚鼠心律失常模型,八道生理记录仪观察并记录Ⅱ导联心电图,观察DCⅣa对实验性心律失常的预防作用。结果DCⅣa能缩短氯化钡和乌头碱诱发大鼠心律失常的持续时间,增加恢复正常心律的动物数;增加诱发豚鼠心律失常的毒毛花苷G用量;延长冠脉结扎致大鼠心律失常发生的潜伏期,缩短心律失常的持续时间,降低室颤发生的百分率。结论DCⅣa具有明显的抗心律失常作用。

HPLC-DAD-ELSD法同时测定牛膝中β-蜕皮甾酮、人参皂苷R0、竹节参皂苷Ⅳa的含量

目的:采用高效液相色谱-二极管阵列检测器-蒸发光散射检测器(HPLC-DAD-ELSD)法同时测定牛膝中3种化合物β-蜕皮甾酮、人参皂苷R0、竹节参皂苷Ⅳa的含量。方法:采用Agilent 5 TC-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.08%甲酸(A),水-2.5%异丙醇-0.08%甲酸(B)不同比例进行梯度洗脱;流速为0.9 mL/min,运行时间80 min,β-蜕皮甾酮采用DAD进行检测,检测波长为248 nm;人参皂苷R0和竹节参皂苷Ⅳa采用ELSD进行检测,漂移管温度为110℃,载气流速3.2 L/min。结果:β-蜕皮甾酮在0.001 9~0.096 3 mg/mL浓度范围内浓度与峰面积间呈良好的线性关系(r^2=0.999 9);人参皂苷R0、竹节参皂苷Ⅳa分别在0.002 2~0.469 5 mg/mL和0.004 7~0.483 0 mg/mL浓度范围内浓度的对数与峰面积的对数间呈良好的线性关系(r^2=0.999 5,r^2=0.999 4)。牛膝中三种化合物(β-蜕皮甾酮、人参皂苷R0、竹节参皂苷Ⅳa)的平均加样回收率分别为99.29%(RSD为2.14%)、99.13%(RSD为2.04%)和98.30%(RSD为2.11%)。结论:本研究所建立的方法简便,快速,且稳定性、精密度、重复性良好,适用于牛膝中甾酮类和皂苷类成分的同时测定,也可用于牛膝药材的质量控制。

陕西不同产区珠子参中竹节参皂苷Ⅳa含量比较研究

目的测定陕西不同产区珠子参中竹节参皂苷Ⅳa含量,以评价药材质量。方法采用HPLC法,色谱柱为Inert-sil ODS-sp(150 mm×4.6 mm,5μm)柱,以乙腈-0.2%磷酸溶液(35∶65)为流动相,流速为1.0 mL.min-1,检测波长为203 nm。结果陕西不同产区珠子参中竹节参皂苷Ⅳa含量存在一定的差异,其中野生珠子参中竹节参皂苷Ⅳa含量普遍高于移植珠子参,但移植2年的珠子参中竹节参皂苷Ⅳa的含量明显高于移植1年的珠子参。结论不同地域环境的珠子参其质量存在差异。

HPLC同时测定竹节参中竹节参皂苷Ⅴ和Ⅳa含量

目的：建立HPLC同时测定竹节参中竹节参皂苷Ⅴ和Ⅳa的含量测定方法,并对不同产地的竹节参药材进行含量测定。方法：采用Hibar C18色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,柱温30℃,检测波长203 nm。结果：竹节参皂苷Ⅴ在0.36--7.20μg（r〉0.999）范围内线性关系良好,平均加样回收率为96.0%,（RSD=0.73%,n=6）;竹节参皂苷Ⅳa在0.57~11.40μg（r〉0.999）范围内线性关系良好,平均加样回收率为104.2%（RSD=0.86%,n=6）。结论：该方法结果准确、重复性好,可用于竹节参药材的质量控制。

珠子参中竹节参皂苷Ⅳa的含量测定

目的建立高效液相色谱法测定珠子参中竹节参皂苷Ⅳa的含量。方法供试品用60%乙醇超声提取40min,滤过,取续滤液作为供试品溶液;高效液相色谱仪测定峰面积。色谱柱：InertsilODS-sp（5μm,4.6 mm×150 mm）;流动相：乙腈-0.2%磷酸溶液（35∶65）;柱温：30℃;流速：1.0 ml/min;检测波长：203 nm。结果珠子参中竹节参皂苷Ⅳa与其他组分分离良好,保留时间12.5 min。竹节参皂苷Ⅳa对照品线性范围1.007 6~10.076μg,r=0.999 9,平均回收率为103.46%,RSD为0.81%。结论该法操作简便,方法稳定性,分离度好,灵敏度高,可用于珠子参中竹节参皂苷Ⅳa的含量测定。

不同采收期珠子参中竹节参皂苷Ⅳa含量测定

目的测定不同采收期珠子参药材中竹节参皂苷Ⅳa的含量并确定珠子参的最佳采收期。方法供试品用60%乙醇超声提取40 min,滤过,取续滤液作为供试品溶液,高效液相色谱仪测定峰面积。色谱柱:Kromasil-C18(5 um,4.6 mm×150 mm);流动相:乙腈-0.2%磷酸溶液(36:64);柱温:30℃;流速:1.0 mL/min;检测波长:203 nm。结果不同采收期珠子参中竹节参皂苷Ⅳa的累积量差异较大且7月含量最高。结论以竹节参皂苷Ⅳa为指标性成分确定珠子参的最佳采收期应为7月份。

竹节参皂苷Ⅳa对高脂饮食小鼠小肠干细胞及其微环境Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨竹节参皂苷Ⅳa对高脂饮食小鼠小肠干细胞及其微环境Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:C57BL小鼠雌雄各半随机分成4组,每组10只,即正常对照组、模型组及竹节参皂苷Ⅳa低、高剂量组。HE染色观察小肠形态学变化,免疫组化检测各组小肠干细胞数量、PCNA表达及其微环境Wnt/β-catenin信号通路的变化。结果:与正常对照组比较,模型组小肠绒毛长度、V/C值、PCNA表达量及杯状细胞数量、Bmi1阳性表达的小肠干细胞数量显著升高,小肠干细胞微环境Wnt/β-catenin信号显著上调(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,竹节参皂苷Ⅳa组绒毛长度、V/C值、PCNA表达量、杯状细胞数量、Bmi1阳性表达的小肠干细胞数量显著降低,小肠干细胞微环境Wnt/β-catenin信号显著下调(P<0.05或P<0.01)。结论:竹节参皂苷Ⅳa可通过Wnt/β-catenin信号通路调控小肠干细胞微环境,改善其过度增殖分化状态和抑制小肠干细胞增多,调节小肠干细胞功能。

太白楤木活性成分竹节参皂苷Ⅳa抗氧化及抗衰老作用研究

目的探讨太白楤木皂苷中的重要成分竹节参皂苷Ⅳa(CHS)抗氧化及抗衰老作用。方法取5~8代的小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs),使用过氧化氢(H2O2)诱导细胞氧化应激以及细胞衰老模型。MTT法分别检测不同浓度CHS及H2O2对细胞活力的影响;DCFH-DA染色流式细胞仪检测细胞总活性氧(ROS)水平;Mito SOX染色流式细胞仪检测细胞线粒体ROS水平;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色检测细胞衰老状态;Western blot法检测衰老标志蛋白p53、p21蛋白表达水平以及关键抗氧化应激Nrf2通路(Nrf2、HO-1、GCLC、GCLM)蛋白表达。结果浓度≤160μg·m L-1的CHS对MEFs细胞无明显毒性作用;H2O2能够显著提高细胞总ROS和线粒体ROS水平,诱导细胞衰老指标SA-β-gal活性增加,提高p53、p21表达水平,提高抗氧化信号通路Nrf2通路表达水平。CHS能够剂量依赖地降低H2O2诱导的细胞总ROS和线粒体ROS水平,减轻H2O2诱导的SA-β-gal活性升高,抑制p53、p21以及Nrf2、HO-1、GCLC、GCLM蛋白表达水平的升高。结论 CHS具有显著的抗氧化应激和抗衰老作用。

竹节参皂苷Ⅳa及其衍生物的药理活性及作用机制研究进展

目的:了解竹节参皂苷Ⅳa及其衍生物药理活性和作用机制的研究进展,为其进一步开发利用提供参考。方法:以"竹节参""竹节参皂苷""竹节参皂苷Ⅳa""衍生物""药理活性""Chikusetsusaponin""ChikusetsusaponinⅣa""Panacis Japonici""Derivative""Pharmacological activity"等为关键词,组合查询1989年1月-2017年12月发表并收录于中国知网、万方、维普、Pub Med、Web of Science等数据库的相关文献,就竹节参皂苷Ⅳa及其衍生物的种类、药理活性、作用机制及靶点进行归纳与总结。结果与结论:共检索得到相关文献489篇,其中有效文献43篇。具药理活性的相关化合物包括竹节参皂苷Ⅳa、竹节参皂苷Ⅳa甲酯、竹节参皂苷Ⅳa丁酯、去葡萄糖竹节参皂苷Ⅳa,主要药理活性为保护心/脑、调节代谢、抗炎、抗凝血、抗肿瘤、抗病毒等。其相关作用机制及靶点主要包括激活沉默信息调节因子2相关酶1/细胞外调节蛋白激酶1/2/突触后膜骨架蛋白Homer1a途径,增强机体清除氧自由基的能力、降低心肌细胞膜脂质过氧化的程度,上调同源丢失性磷酸酶张力蛋白、下调核因子κB的表达,调节Ca2+、K+、Na+等离子的跨膜转运,促进糖原合酶激酶3β的磷酸化,抑制蛋白激酶C的磷酸化,抑制细胞外因子/β-联蛋白信号通路,抑制炎症因子表达,抑制血小板聚集,诱导肿瘤细胞周期停滞及凋亡,导致病毒直接失活或抑制子代病毒释放等。目前尚缺乏竹节参皂苷Ⅳa及其衍生物单体药理活性及作用机制的系统性深入研究,同时上述化合物是否具有其他药理作用、其药动学特征及剂型研发等均有待进一步探索。

竹节参皂苷Ⅳa对FFA诱导肝细胞脂肪沉积保护作用及机制

目的研究竹节参皂苷Ⅳa(CHS)抗混合游离脂肪酸(FFA)诱导的L-02肝细胞脂肪沉积的作用及机制。方法取人L-02肝细胞,分为对照组、FFA处理组和3个CHS药物干预组,采用FFA和CHS处理分别处理FFA处理组和3个CHS药物干预组2 w。2 w后,流式细胞仪荧光法分别检测细胞总活性氧(T-ROS)和线粒体活性氧(M-ROS)水平;采用相应的试剂盒检测细胞和线粒体丙二醛(MDA)水平及甘油三酯(TG)水平;Western blot法检测细胞中LC3、AMPK、p-AMPK、ULK1和p-ULK1水平。结果 FFA处理可以明显提高L-02细胞T-ROS和M-ROS水平,以及MDA和TG水平。不同剂量CHS干预可以剂量依赖地降低FFA处理引起的上述变化,同时FFA处理可以显著降低LC3II蛋白水平、AMPK及ULK1磷酸化水平,而不同剂量CHS可以拮抗FFA对这些蛋白分子的抑制作用。结论 CHS可以通过降低细胞线粒体ROS水平,提高AMPK/ULK1途径的自噬水平,从而发挥抗FFA诱导的肝细胞脂肪沉积作用。

畲药山里黄根中竹节参皂苷Ⅳa的含量测定

目的：建立高效液相色谱法测定山里黄根中竹节参皂苷Ⅳa的含量。方法：应用HPLC法测定,色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（33∶67）;流速为1.0 ml·min-1,柱温为30℃;检测波长为203 nm。结果：山里黄根中竹节参皂苷Ⅳa与其他组分分离效果良好,理论板数在10 000以上。竹节参皂苷Ⅳa的线性范围为12.610～252.200μg·ml-1（r=1.000 0）;平均加样回收率为98.13%,RSD=1.26%（n=6）。结论：该方法简便易行、准确、重复性好,可用于山里黄根的质量控制。

不同炮制方法对珠子参中竹节参皂苷Ⅳa含量的影响

目的探究干热烘制和湿热蒸煮制对珠子参中竹节参皂苷Ⅳa含量的影响。方法采用直接烘干、蒸制和煮制后烘干对珠子参进行炮制加工,以HPLC测定不同炮制品中竹节参皂苷Ⅳa的含量。结果相比直接烘干,蒸制和煮制烘干的珠子参中竹节参皂苷Ⅳa含量有降低。结论直接干燥对珠子参中竹节参皂苷Ⅳa含量影响不大,该方法适合珠子参药材的加工炮制。

HPLC法同时测定狭叶竹节参中4种皂苷成分的含量

目的:建立同时测定狭叶竹节参中人参皂苷Rb1、人参皂苷Ro、竹节参皂苷Ⅳ和竹节参皂苷Ⅳa4种皂苷成分含量的HPLC法。方法:采用Phenomenex Kinetex Biphenyl(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱流动相为乙腈(A)-0.2%磷酸溶液(B),梯度洗脱流速:1.0 ml·min-1,检测波长:203 nm,柱温:30℃。结果:人参皂苷Rb1、人参皂苷Ro、竹节参皂苷Ⅳ和竹节参皂苷Ⅳa分别在0.20~4.02μg、1.84~36.80μg、0.49~9.80μg和0.40~8.04μg范围内呈良好线性关系(r≥0.9990),平均回收率分别为102.20%,100.77%,100.51%,102.72%,RSD分别为1.71%,1.02%,1.38%,2.39%(n=9)。结论:该方法简便、准确,分离效果好,可为狭叶竹节参药材的质量控制提供参考。

基于标准汤剂的竹节参配方颗粒质量标准研究

目的基于标准汤剂建立竹节参配方颗粒质量标准。方法HPLC法测定标准汤剂、配方颗粒中人参皂苷Ro、竹节参皂苷Ⅳa含量,计算转移率。建立标准汤剂HPLC特征图谱,并进行聚类分析、主成分分析。再建立配方颗粒HPLC特征图谱。结果17批标准汤剂HPLC特征图谱中有9个共有峰,相似度大于0.9(除S6、S12外),聚为2类,3种主成分累积方差贡献率达86.7%。3批配方颗粒中人参皂苷Ro含量为83.1~88.6 mg/g,转移率为53.1%~55.5%;竹节参皂苷Ⅳa含量为14.8~15.0 mg/g,转移率为47.4%~48.1%。3批配方颗粒HPLC特征图谱中有9个共有峰,相似度分别为0.998、0.998、0.999。结论该方法合理可靠,可全面评价竹节参配方颗粒质量,为其质量控制提供参考。

藤珠胃康颗粒中4种皂苷成分的大鼠体内药代动力学研究

目的研究藤珠胃康颗粒中人参皂苷Re、Ro、Rb1和竹节参皂苷Ⅳa在大鼠体内的药代动力学特征。方法大鼠灌胃藤珠胃康颗粒(9 g·kg^(-1)),于不同时间点眼眶静脉丛采血,乙腈沉淀蛋白,采用HPLC-MS法检测大鼠血浆中的人参皂苷Re、Ro、Rb1和竹节参皂苷Ⅳa,应用DAS 2.1.1软件拟合药动学参数。结果人参皂苷Re、Ro、Rb1和竹节参皂苷Ⅳa的t_(1/2)分别为(13.72±9.14)、(6.94±3.51)、(28.80±9.99)、(5.17±2.41)h,tmax分别为(1±0.00)、(4±0.00)、(2±0.00)、(4±0.00)h,Cmax分别为(370.27±88.27)、(649.06±98.22)、(111.10±3.38)、(686.94±145.55)ng·m L^(-1),AUC0~t分别为(2188.75±599.81)、(4743.44±509.26)、(1699.06±35.66)、(4427.82±1396.29)μg·h·L^(-1)。结论建立的人参皂苷Re、Ro、Rb1和竹节参皂苷Ⅳa血浆样品分析方法及得到的药动学参数,可为藤珠胃康颗粒的药代动力学研究提供参考。

竹节参超微粉的质量标准研究

目的建立竹节参超微粉的质量标准,为其作为新型饮片提供质量控制基础.方法观察竹节参超微粉的显微特征,采用激光散射法测定超微粉粒径特征;采用薄层色谱法鉴别样品,高效液相色谱(HPLC)测定其主要有效成分人参皂苷Ro和竹节参皂苷Ⅳa的含量.结果竹节参超微粉黄白色,显微镜下可见散在破碎的草酸钙簇晶、导管、淀粉粒、厚角细胞、木栓细胞、树脂道、油细胞等;D_(90)粒径不超过100μm,在与人参皂苷Ro和竹节参皂苷Ⅳa相应位置上,竹节参供试液薄层图谱相应位置上显相同颜色的斑点,其主要有效成分人参皂苷Ro和竹节参皂苷Ⅳa含量均超过3.0%.结论所建立的方法简便、准确、重复性好,可用于竹节参超微粉的质量控制.

竹节参皂苷Ⅳa通过调节miR199a-5p/Atg5改善大鼠心肌肥厚的实验研究

研究竹节参皂苷Ⅳa(chikusetsu saponinⅣa, CHS-Ⅳa)对异丙肾上腺素(isoproterenol, ISO)诱导的大鼠心肌肥厚的改善作用,并探讨其可能的分子机制。采用ISO诱导大鼠心肌肥厚模型,同时采用CHSⅣa低、高剂量(5、15 mg·kg^(-1)·d^(-1))进行干预。测量大鼠尾动脉压,心脏超声检查,计算心重指数,HE染色法观察心肌组织形态学改变,Masson染色法观察心肌组织中胶原沉积情况;qRT-PCR法检测心肌组织肥大指标心钠肽(atrial natriuretic peptide, ANP)、脑钠肽(brain natriuretic peptide, BNP)、自噬相关基因5(autophagy related gene 5,Atg5)、选择性自噬接头蛋白P62/SQSTM1(P62)、自噬调控因子(beclin1)、miR199a-5p mRNA的表达情况;Western blot法检测Atg5蛋白表达情况。结果显示,模型组中大鼠尾动脉收缩压、心重指数明显升高;左室心肌厚度明显增厚;心肌细胞体积增大,心肌纤维排列紊乱,间质增宽,且有大量胶原蛋白聚集在细胞外间质和血管周围;ANP、BNP表达明显增加;自噬相关基因P62表达升高,beclin1表达降低。经过CHSⅣa不同剂量干预后,可有效改善大鼠心肌肥厚,增强心肌组织中自噬活性,miR199a-5p表达降低而Atg5表达升高,同时生物信息学预测Atg5是miR199a-5p靶基因。这些结果表明,CHSⅣa药物可能通过miR-199a-5p/Atg5信号通路调节心肌细胞自噬发挥对心肌肥厚模型的干预作用。

竹节参皂苷Ⅳa调节miR-17-5p/MFN2信号通路改善非酒精性脂肪性肝炎

该文研究了竹节参皂苷Ⅳa(Panax japonicus saponinⅣa,SPJ-Ⅳa)通过miR-17-5p/mitofusin 2(MFN2)信号通路改善非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)的作用。采用高脂饮食(high-fat diet,HFD)联合CCl4诱导Balb/c雄性小鼠NASH模型,并采用不同剂量SPJ-Ⅳa进行干预,处理5周后留取血清及肝脏,称量体质量及肝重,计算肝指数,检测血清生化指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、甘油三酯(TG)及葡萄糖(Glu)的含量,HE及Masson染色法观察肝脏形态学变化及纤维化病变情况,Real-time PCR法检测脂代谢相关基因[脂肪酸合成基因(fatty acid synthase gene,FASN)、碳水化合物反应元件结合蛋白(carbohydrate response element binding protein,chREBP)、乙酰辅酶A羧化酶1(acetyl CoA carboxylase 1,ACC1)、肝X受体(liver X receptor,LXR)]、炎症因子白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)、miR-17-5p及MFN2的表达情况,Wes-tern blot法检测MFN2蛋白表达水平。结果显示,与正常组相比,HFD+CCl4组中肝指数明显增加,生化指标ALT,TG,Glu的含量明显增高;形态学结果显示有大量脂肪空泡出现,表现出明显的脂肪变性,并可见明显的胶原纤维沉积;脂代谢相关基因、炎症因子IL-6和IL-1β及miR-17-5p mRNA表达水平明显增加,MFN2 mRNA表达水平明显降低;MFN2蛋白水平降低。经SPJ-Ⅳa干预后,生化指标ALT,TG,Glu的含量有所下降,脂肪变性有所减轻,胶原纤维沉积有所减少,脂代谢相关基因、炎症因子IL-6和IL-1β及miR-17-5p mRNA表达水平有所下降,MFN2 mRNA表达水平有所升高;MFN2蛋白水平也升高。该研究结果表明,miR-17-5p/MFN2信号通路可能参与了NASH的发生发展,且SPJ-Ⅳa对NASH有保护作用,其机制可能与调控miR-17-5p/MFN2信号通路有关。