竹荪多糖提取工艺及抗氧化活性

采用缓冻协同微波法对竹荪中的多糖成分进行提取并进行工艺研究,依次考察缓冻时间、微波功率、液料比、提取时间对多糖得率的影响,在单因素试验基础上,运用响应面设计优化得到最佳提取工艺。利用1,1二苯基2三硝基苯肼(DPPH)自由基清除法、2,2'联氮双(3乙基苯并噻唑啉6磺酸)二铵盐(ABTS)自由基清除法、羟自由基清除法、总还原能力4种试验,对比缓冻协同微波法提取得到的竹荪多糖(PW 1)和单一微波法获得的竹荪多糖(PW 2)的抗氧化活性,并借助高效液相色谱联用多角度激光散射(HPSEC MALLS RI)技术和红外光谱分析多糖初步结构。结果表明:最佳提取条件为缓冻时间16 h、微波功率260 W、液料比53 mL/g、提取时间8 min,在最佳提取条件下,PW 1的得率为11.87%。在4种抗氧化活性试验中,PW 1表现的抗氧化活性比PW 2更强。初步结构分析发现PW 1与PW 2分别是由4个主色谱峰和3个主色谱峰构成,并以α糖苷键连接为主的吡喃型糖,重均分子量均为1.018×10^(6)~14.980×10^(6)g/mol。

分级醇沉竹荪多糖的结构及抗氧化活性比较

通过缓冻协同微波法提取竹荪多糖,以20%~80%乙醇分级制备得到4种多糖组分,分别为PI-20、PI-40、PI-60和PI-80;采用UV、FI-IR、HPSEC-MALLS-RI、HPAEC对多糖结构进行分析.结果表明4种组分均含有少量蛋白质,但未检测到糖醛酸存在,PI-20和PI-40多糖含量均在50%以上;低浓度乙醇醇沉的多糖PI-20和PI-40的相对分子质量达到千万级,而高体积分数乙醇醇沉的多糖相对分子质量在万级水平;20%~60%醇沉多糖均由Gal、Glu和Man构成,PI-80仅由Glu和Man组成.4种醇沉多糖组分均具有一定的抗氧化能力,在3种抗氧化试验中,4种醇沉组分PI-80综合抗氧化能力最佳,清除ABTS自由基半抑制质量浓度为0.2484 mg/mL,PI-40综合抗氧化活性最弱,清除ABTS自由基半抑制质量浓度为2.9043 mg/mL.

MAPK通路在红托竹荪多糖诱导人胃癌MKN-45细胞凋亡中的作用机制研究

目的:研究红托竹荪多糖对人胃癌MKN-45细胞增殖与凋亡的影响,并基于丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号通路探讨其可能的作用机制。方法:体外培养MKN-45细胞,分为对照组,红托竹荪多糖低、中及高剂量组,采用终浓度分别为0、4、6及8 mg/mL的红托竹荪多糖作用于细胞48 h后,采用细胞计数法检测红托竹荪多糖对人胃癌MKN-45细胞增殖的影响;采用倒置显微镜观察不同浓度的红托竹荪多糖作用于人胃癌MKN-45细胞48 h后细胞形态学的变化。设立实验组的红托竹荪多糖终浓度为8 mg/mL,采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染色流式细胞技术检测细胞的凋亡率;采用流式细胞术检测细胞周期分布;采用蛋白质印迹法检测红托竹荪多糖作用胃癌细胞后p38蛋白激酶(p38)、磷酸化p38蛋白激酶(p-p38)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)、C-JUN氨基末端激酶(JNK)、磷酸化C-JUN氨基末端激酶(p-JNK)、B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)和活化的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)蛋白的表达,即与3-磷酸甘油醛脱氢酶(GADPH)灰度值比值。结果:作用48 h后,不同浓度的红托竹荪多糖(4、6及8 mg/mL)对人胃癌MKN-45细胞增殖的抑制率分别为(8.27±5.99)%、(21.83±5.77)%和(56.95±5.21)%;在检测的浓度范围下,随着浓度的升高,红托竹荪多糖对MKN-45细胞增殖的抑制率逐渐升高。倒置显微镜下显示,经8 mg/mL的红托竹荪多糖作用48 h后,MKN-45细胞密度与对照组相比明显减少。流式细胞术检测结果显示,与对照组相比,实验组人胃癌MKN-45细胞凋亡率显著升高(P<0.05);细胞周期结果显示,实验组G_(1)期细胞比例明显减少(P<0.05),G_(2)期细胞比例明显增多(P<0.05),S期细胞比例明显减少(P<0.05);蛋白质印迹法结果显示,与对照组相比,实验组MKN-45细胞中cleaved Caspase-3的表达有升高趋势(P<0.05),Bcl-2的表达有降低趋势(P<0.05),p-P38/P38比值、p-ERK/ERK比值与p-JNK/JNK比值均低于对照组(P<0.05),上述差异均有统计学意义。结论:红托竹荪多糖在体外能抑制人胃癌MKN-45细胞增殖并诱导细胞凋亡,使肿瘤细胞阻滞在G_(2)/M期,其作用可能通过调控MAPK信号通路实现。

红托竹荪多糖提取、表征及生物活性研究进展

红托竹荪多糖(Dictyophora rubrovalvata polysaccharide,DRP)是一种天然植物类多糖。它是红托竹荪主要的生物活性成分之一,具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、降血糖、抑菌等多种生物活性功能。本文主要从红托竹荪多糖的提取技术、结构表征方法和生物活性功能等方面的研究进行综述,旨在为探索出更优的红托竹荪多糖提取工艺条件,为红托竹荪资源的深加工开发提供理论依据参考。

红托竹荪多糖抗疲劳和耐缺氧作用研究

考察红托竹荪多糖(Dictyophora rubrovalvata polysaccharide,DRP)抗疲劳和耐缺氧活性。采用水提醇沉法提取DRP,建立小鼠负重游泳模型和耐缺氧模型,同时灌胃不同剂量的DRP溶液,15 d后测定小鼠力竭游泳时间、耐缺氧时间以及小鼠力竭游泳后血乳酸(BLA)、血尿素氮(BUN)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和肝糖原、肌糖原含量。实验结果表明DRP能延长负重小鼠的游泳时间,降低疲劳小鼠BLA、BUN、MDA含量,升高SOD、肝糖原和肌糖原含量,延长小鼠常压耐缺氧存活时间。

面向规模化应用的竹荪多糖液态深层发酵工艺优化

利用规模化生产工艺提高竹荪菌丝体胞内多糖得率,通过对竹荪菌丝体液态深层发酵培养基组分的筛选,采用单因素试验与Box-Behnken响应面法确定竹荪菌丝体液态深层发酵的最佳培养基配方为:葡萄糖32.3 g/L,酵母粉4.5 g/L,磷酸二氢钾2.1 g/L,硫酸镁2.5 g/L。在此条件下竹荪胞内多糖得率的预测值为1.23 g/L,摇瓶实验验证胞内多糖得率为1.19 g/L,与预测值相当。在5、30 L和50 L发酵罐中验证胞内多糖得率分别达到1.43、1.28 g/L和1.26 g/L,分别高于预测值16.26%、4.06%和2.43%。本研究优化获得的竹荪菌丝体液态深层发酵工艺有效促进了竹荪胞内多糖的高产,该工艺可为竹荪多糖的规模化生产应用提供较好的参考。

竹荪多糖对砷中毒大鼠肝组织、血液及尿液中砷含量的影响

目的:探讨竹荪多糖对砷中毒大鼠体内砷含量的影响。方法:将24只清洁级健康SD大鼠均分为对照组、模型组、竹荪干预组3组,每组雌雄各半;对照组以常规饲料饲养,竹荪干预组和模型组喂饲砷含量50 mg/kg的饲料,竹荪干预组每日以10 g/L的竹荪多糖按大鼠体质量20 m L/kg灌胃,观察各组大鼠喂养过程中的毛发光泽度等一般情况,记录喂养0、30、60及90 d时大鼠的体质量;喂养3月时,取各组大鼠血液及尿液、并处死大鼠取肝脏组织,采用原子荧光光谱法检测其中砷含量,同时称取各组大鼠肝脏重量并计算脏器系数。结果:对照组大鼠发育正常,精神良好,毛发有光泽,模型组大鼠生长中等,体态中等,毛发较暗淡且稀疏,竹荪干预组大鼠发育、精神及毛发光泽度介于两组之间;与对照组相比,饲喂相同的时间,模型组和竹荪干预组体质量均降低,在饲喂30 d、90 d时差异有统计学意义(P<0.05);开始饲喂后,竹荪干预组大鼠体质量与模型组相比升高,但仅30 d时差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,模型组和竹荪干预组脏器重量和脏器系数、肝砷、血砷、尿砷均升高(P<0.05);与模型组相比,竹荪干预组与模型组相比,竹荪干预组肝砷降低而尿砷升高(P<0.05)。结论:竹荪多糖可以降低砷中毒大鼠肝脏、血液、尿液中的砷含量。

竹荪多糖产生条件及其对无机硒的转化

本文筛选了在深层发酵条件下竹荪多糖产量最高的培养基，得到了竹荪多糖产生曲线，并初步测定了竹荪对无机硒的转化率。用正交试验，确定发酵瓶配方为：麦芽糖２％，玉米粉１％，酵母膏０．２％，ＫＨ＿２ＰＯ＿４０．３％，ＭｇＳＯ＿４０．１５％，以粽子叶煮汁（２０％）配制，自然ｐＨ。以ＤＮＳ法测糖，确定多糖产生曲线。以３ｐｐｍ时竹荪对硒的转化率最高。

竹荪多糖对砷中毒大鼠肝功能及肝纤维化的影响

目的:探讨竹荪多糖对砷中毒大鼠肝损伤的影响。方法:将24只清洁级健康SD大鼠均分为对照组、模型组、竹荪干预组3组,每组雌雄各半;对照组以常规饲料饲养,竹荪干预组和模型组喂饲砷含量50 mg/kg的饲料,竹荪干预组每日以10 g/L的竹荪多糖20 m L/kg灌胃,各组大鼠喂养3个月时取血检测血清谷草转氨酶(AST)及谷丙转氨酶(ALT)活力、总蛋白(TP)及白蛋白(ALB)水平、白蛋白与球蛋白比值(A/G)、粘连蛋白(LN)、透明质酸酶(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)以及Ⅳ型胶原(PCIV)的水平;取大鼠同一肝小叶行HE及Masson染色,观察肝组织病理学改变,并计算肝纤维化增生面积。结果:与对照组相比,竹荪干预组和模型组大鼠血清内AST的活力均升高,ALB水平降低,LN、HA、PCIV水平增高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,竹荪干预组大鼠血清内AST和ALT的活力均降低,TP、A/G、ALB水平升高,LN、PCIV水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);HE和Masson染色结果显示,竹荪干预组和模型组均出现不同程度的肝损伤;通过图像分析系统测量,对照组、竹荪干预组、模型组大鼠肝脏增生纤维面积呈增加趋势,竹荪干预组和模型组与对照组相比胶原纤维沉积面积差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:竹荪多糖对砷中毒大鼠肝脏有一定的保护作用。

长裙竹荪多糖Di-S2P的分离纯化和鉴定

长裙竹荪 (Dictyophoraindusiata)子实体经 ρ(Na2 CO3 ) =2 %溶液提取 ,用蛋白酶法和Sevag法相结合除去蛋白 ,乙醇分级沉淀 ,级分 2经DEAE -SephadexA -2 5柱层析纯化得到长裙竹荪多糖Di-S2P .经测定该多糖为均一组分 ,分子量约为 8 7× 10 5,红外光谱呈现出典型的多糖吸收峰 ,紫外扫描无核酸和蛋白质的特征吸收峰 .纸层析和气相层析分析得知Di -S2P含有D -葡萄糖、D-半乳糖、D -甘露糖和D -木糖 ,其摩尔比为 1 6 2∶1 87∶1 0 0∶0 93。

竹荪多糖提取工艺及其抗氧化性

以竹荪为原料,采用水提法提取竹荪多糖,比较了提取温度、p H、料液比和提取时间对竹荪多糖得率的影响,并且在单因素实验的基础上,采用正交实验,确定了水提法提取竹荪多糖的最佳工艺参数,即提取温度为90℃、p H为8.0、料液比为1∶70 g/m L,时间为2.5 h。在上述提取条件下,提取竹荪多糖得率可达到13.09%。抗氧化实验结果表明,0.6 mg/m L的竹荪多糖对ABTS自由基的清除率可达92.76%,25 mg/m L的竹荪多糖对DPPH自由基的清除率可达70.55%。竹荪多糖提取工艺合理、可行,所提多糖具有较强的抗氧化性。

不同醇沉竹荪多糖组分对青春双歧杆菌体外增殖作用的影响

本文以竹荪为原料提取多糖成分并以乙醇分级制备竹荪多糖(DPs)不同组分,通过青春双歧杆菌体外增殖试验初步评价竹荪多糖及其分级醇沉组分的益生元功效。结果显示在α-淀粉酶溶液中水解4 h后,20%、40%、50%、60%竹荪多糖醇沉组分水解度分别为9.10%、8.02%、8.88%、11.67%,与对照组菊粉(水解度13.15%)相比差异显著(P<0.05);80%竹荪多糖醇沉组分、未分级醇沉组分与菊粉对照组相比差异不显著(P>0.05)。在模拟胃液中水解6 h后,20%、40%、50%竹荪多糖醇沉组分水解度分别为17.30%、14.52%、9.61%,与对照组菊粉(水解度5.72%)相比差异显著(P<0.05);60%竹荪多糖醇沉组分、80%竹荪多糖醇沉组分、未分级醇沉组分水解度与对照组相比无显著差异(P>0.05)。随着竹荪多糖添加量的增加,青春双歧杆菌的菌体浓度呈现先增大而后不断减小的趋势。分级醇沉浓度达到80%的竹荪多糖组分和未分级的多糖组分,青春双歧杆菌体外增殖作用与p H下降显著且效果优于菊粉(P<0.05),并在20 h的发酵时间内两者表现出相似的效果。不同竹荪多糖醇沉组分对青春双歧杆菌均有增殖效果,且不同竹荪多糖醇沉组分的增殖效果和抗水解能力随乙醇浓度的增加而增强,未分级的多糖组分同样可以加强青春双歧杆菌增殖能力,具有益生元潜力。

竹荪多糖提取工艺及其对肿瘤抑制作用的研究

以多糖的提取总量作为考察指标,利用正交试验法考察以水为溶媒的提取条件;以不同浓度的竹荪多糖对不同肿瘤细胞用药,并以MTT法研究竹荪多糖对肿瘤细胞的增殖抑制作用。最佳提取条件为提取温度60℃,提取时间2 h,浸提2次,液料比40∶1;竹荪多糖在48 h对A549与Hela两种细胞影响明显。优化后的提取工艺提取竹荪多糖的效率高,经实验验证可行,研究结果为进一步开发竹荪多糖提供科学依据。竹荪多糖对肿瘤细胞具有抑制作用,但较其他阳性药物弱,如何增强其效果还需进一步研究。

竹荪多糖对砷中毒大鼠肝脏IL-6和TNF-α水平的影响

目的探讨竹荪多糖对砷中毒大鼠肝脏IL-6和TNF-α水平的影响。方法SPF级6周龄SD大鼠30只,雌雄各半,随机分为对照组(喂食正常饲料)、砷中毒组(喂食含砷50 mg/kg的饲料)及竹荪多糖组(喂食含砷50 mg/kg的饲料5个月后,以10 g/L竹荪多糖连续灌胃30 d);染毒终点记录大鼠体质量后麻醉处死、经心脏取血分离血清检测草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)水平,取大鼠肝脏计算脏器系数,取肝组织HE染色观察肝脏损伤情况,免疫组织化学法检测大鼠肝组织白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达。结果与对照组相比,砷中毒组大鼠体质量明显下降,肝脏脏器系数升高,血清中ALT和AST的含量均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与砷中毒组比较,竹荪多糖组大鼠体质量升高、肝脏脏器系数下降,血清中ALT和AST表达均有所下降,除ALT外,差异均有统计学意义(P<0.05);HE染色结果显示,砷中毒组大鼠肝脏有损伤,竹荪多糖组大鼠肝脏损伤程度有一定缓解;砷中毒组大鼠肝组织IL-6和TNF-α蛋白含量升高,竹荪多糖组大鼠肝组织中两指标下降(P<0.05)。结论竹荪多糖可能通过抑制炎症因子IL-6和TNF-α的表达,减轻砷暴露大鼠肝组织损伤。

不同提取方法对竹荪多糖提取率及抗氧化性影响

对比了不同提取方法下竹荪多糖的提取率和抗氧化性,并进行结构初步表征。超声波辅助提取法、压力辅助提取法和不同pH水浸提法所得的纯多糖提取率依次为12.28%、7.02%和6.61%~6.81%。竹荪多糖的抗氧化活性受提取方法影响较明显,其中超声波辅助提取法所得多糖抗氧化性最强,对羟基自由基和DPPH自由基的清除率在浓度2 mg·mL^-1时分别可达46.53%和60.69%。通过紫外、红外和离子交换色谱检测,分析得出竹荪多糖主要由葡萄糖、半乳糖、甘露糖和木糖组成,具有典型多糖特征吸收峰。

两种竹荪多糖含量测定方法的不确定度比较

竹荪是一种重要的药食两用真菌.多糖含量的测定对其营养价值的评价具有重要意义.本研究以竹荪为研究对象,依据JJF1059.1—2012《测量不确定度评定与表示》,采用苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法两种方法,利用紫外可见分光光度计测定竹荪多糖含量,通过建立数学模型,全面分析不确定度的主要来源,并确定合理的竹荪多糖含量测定方法.苯酚-硫酸法测定竹荪多糖的测定结果为(67.99±3.72)%,扩展不确定度为3.72%(k=2).蒽酮-硫酸法测定竹荪多糖的测定结果为(58.35±4.10)%,扩展不确定度为4.10%(k=2).苯酚-硫酸法与蒽酮-硫酸法均适用于竹荪多糖含量的测定,但苯酚-硫酸法更优.在竹荪多糖测定过程中最主要的不确定度来源为标准曲线拟合和紫外可见分光光度计,采用线性好的标准曲线和灵敏度高的紫外可见分光光度计具有提高检测质量和检测结果的准确性的潜在价值.

2种竹荪多糖的结构鉴定及差异性分析研究

本研究以从竹荪中分离纯化并经不同截留分子量的透析袋透析所得到的DI-1和DI-2为研究对象,借助傅里叶变换红外光谱技术(FTIR)和核磁共振波谱法(NMR)对其结构进行研究。结果表明,FIIR光谱显示,不同截留分子量的透析袋所得DI-1和DI-2的多糖结构明显,无其他结构,为多糖纯品,其单糖是以吡喃糖苷键的形式存在,但DI-1和DI-2具有不同的空间结构;1HNMR谱结果显示,DI-1由4种单糖构成,DI-2由3种单糖组成。上述结果表明,不同截留分子量的透析袋会得到结构不同的多糖。

竹荪多糖对5种肿瘤细胞增殖的抑制效果

目的分析竹荪多糖对乳腺癌细胞MCF-7、肝癌细胞HepG2、宫颈癌细胞HeLa、胃癌细胞MGC803和结肠癌细胞LoVo增殖的抑制作用。方法取乳腺癌细胞MCF-7、肝癌细胞HepG2、宫颈癌细胞HeLa、胃癌细胞MGC803和结肠癌细胞LoVo进行常规复苏、培养,取对数生长期的肿瘤细胞进行实验。使用不同浓度(10、20、40、60μg/mL)的竹荪多糖干预5种肿瘤细胞,干预24、48和72 h后采用四甲基偶氮唑盐法检测5种肿瘤细胞的增殖抑制率。结果竹荪多糖对肝癌细胞HepG2增殖的抑制率可达50%以上,且细胞增殖抑制率随着竹荪多糖浓度的增加和干预时间的延长而增加(均P<0.05)。竹荪多糖对胃癌细胞MGC803和结肠癌细胞LoVo的增殖抑制率未达到50%,但随着竹荪多糖干预时间的延长和干预浓度的增加,肿瘤细胞的增殖抑制率有所增加,可达20%以上。竹荪多糖对乳腺癌细胞MCF-7、宫颈癌细胞HeLa的增殖抑制率均低于15%,且随着竹荪多糖干预时间的延长和干预浓度的增加,肿瘤细胞的增殖抑制率并无增加趋势(均P>0.05)。结论竹荪多糖对肝癌细胞HepG2增殖具有较好的抑制作用,且具有一定的时间依赖性和浓度依赖性,其可能对胃癌细胞MGC803和结肠癌LoVo的增殖也有一定的抑制作用。

竹荪多糖的提取工艺及其体外抗氧化性研究进展

竹荪多糖是竹荪发挥保健作用的主要物质,对于多种人体疾病的预防和治疗有重要意义。综述了竹荪多糖的主要提取方法及其体外抗氧化性研究进展,为工业生产在提高竹荪多糖产率与降低成本等方面提供理论依据。