水稻矮缩病毒第七号基因的序列分析及在大肠杆菌中的表达

应用反转录-PCR技术合成并扩增了水稻矮缩病毒(RDV)中国福建分离物基因组第七号片段(S7)cDNA,将PCR产物克隆在载体 pBluescript SK(+)上,进行了亚克隆和序列分析。结果表明克隆片段全长1578bp,含有一个1518bp长的开放阅读框架(ORF),编码一个由506个氨基酸组成的理论分子量为56000的蛋白。该片段与RDV日本分离物基因组的相应片段相比,在核苷酸及氨基酸水平上的同源率分别为93.2％和94.1％。该片段编码的56000蛋白与同属的伤瘤病毒(WTV)基因组第七号片段编码的57000蛋白相比,在靠近N端的区域(aa61～aa141)有较高的氨基酸序列同源性。将RDV S7 cDNA克隆到原核表达载体 pBV221上,通过温度诱导在大肠杆菌中得到表达。表达产物占菌体可溶性总蛋白的13.73％。对表达产物进行了 Western blotting分析。本工作为进一步纯化RDV S7编码蛋白、分析其功能和转化水稻打下了良好基础。