热休克预处理抑制过氧化氢所致C2C12肌原细胞释放天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物及细胞凋亡

为探讨热休克预处理对过氧化氢所致C2C12肌原细胞凋亡和第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物从线粒体释放的影响 ,采用 0 .5mmol L过氧化氢作用于C2C12肌原细胞。Hoechst332 5 8荧光染色 ,观察细胞形态学改变并计算凋亡百分率 ,抽提DNA作琼脂糖电泳 ,以确定细胞凋亡情况。采用天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶活性定量检测试剂盒及蛋白质印迹观察天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 3,天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 9的活化情况。采用免疫荧光及细胞成分分离后蛋白质印迹检测第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物从线粒体的释放。结果发现 ,过氧化氢处理 1～ 2h ,第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物逐渐从线粒体释放入胞浆 ;处理 4h天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 3,天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 9活性升高 ,12h达高峰 ;处理 2 4h细胞明显出现凋亡 ,凋亡百分率明显升高。热休克预处理可诱导C2C12肌原细胞中热休克蛋白 90 ,热休克蛋白 70及αB 晶状体蛋白的表达增高 ;抑制第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物释放、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 3,天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 9的活化及细胞凋亡的发生。结果提示 ,线粒体信号通路在?

电针对骶上脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠尿流动力学及脊髓组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的:观察电针对骶上脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠尿流动力学、髓内细胞凋亡率及脊髓组织中Caspase-3表达的影响。方法:从60只雌性SD大鼠中随机抽取36只,按脊髓横断法制作神经源性膀胱模型后,将符合要求的模型大鼠24只随机分为模型组、电针组各12只,其余24只随机分为空白组、假手术组各12只;术后第19天取"次髎""中极""三阴交""大椎"行电针干预,连续治疗7天后行尿流动力学检测,并用TUNEL法测定髓内细胞凋亡率、Western Blot法测定脊髓组织中Caspase-3蛋白的表达情况。结果:(1)尿流动力学,与空白组及假手术组比较:模型组、电针组的膀胱基础压力、膀胱最大压力、漏尿点压力升高(P<0.05),膀胱最大容量及顺应性降低(P<0.01);与模型组比较:电针组的膀胱基础压力、膀胱最大压力、漏尿点压力均降低(P<0.05),膀胱最大容量及顺应性均升高(P<0.01);(2)髓内细胞凋亡率,与空白组及假手术组比较:模型组及电针组的脊髓组织TUNEL阳性率明显升高(P<0.01);与模型组比较:电针组的脊髓组织TUNEL阳性率明显降低(P<0.01);(3)Caspase-3蛋白表达,与空白组及假手术组比较:模型组、电针组脊髓组织中Caspase-3蛋白表达明显升高(P<0.01);与模型组比较:电针组脊髓组织中的Caspase-3蛋白表达下降(P<0.05)。结论:电针"次髎""中极""三阴交""大椎"可改善骶上脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠的膀胱压力、最大容量及顺应性,降低受损脊髓组织的凋亡率,其作用机制可能与脊髓组织中凋亡效应蛋白Caspase-3的表达下调有关。

周期性张应力下成肌细胞中半胱天冬氨酸蛋白酶9参与力学信号传导

背景:功能矫形使面颌部肌肉发生适应性改建,以纠正错颌畸形。成肌细胞是适应性改建的主要体现者,周期性牵张应力导致成肌细胞凋亡,而半胱天冬氨酸蛋白酶9是线粒体凋亡通路中的重要因子。目的:明确半胱天冬氨酸蛋白酶9在不同时间周期性张应力作用下的表达变化。方法:以大鼠L6成肌细胞为实验对象,在成功构建成肌细胞体外培养-力学刺激模型的基础上,通过多通道细胞牵张应力加载系统,分别对待测细胞持续施加1,6,12,24 h的周期性张应力,不加力组为对照组。倒置相差显微镜下观察成肌细胞的形态学改变和生长状况;运用RT-PCR和Western Blot技术检测周期性张应力作用下半胱天冬氨酸蛋白酶9的mRNA和蛋白含量变化。结果与结论:倒置相差显微镜观察结果显示成肌细胞施加周期性张应力后贴壁生长情况良好,细胞无变性并且脱落率极低,说明成功构建了成肌细胞体外培养-力学刺激模型。RT-PCR和Western Blot检测结果显示,随着加力时间的延长,半胱天冬氨酸蛋白酶9 mRNA含量和活化型半胱天冬氨酸蛋白酶9的蛋白含量均显著增加,而半胱天冬氨酸蛋白酶9前体蛋白含量随着加力时间的延长均显著降低。可见半胱天冬氨酸蛋白酶9参与了周期性张应力作用下的力学信号传导。

X连锁凋亡抑制蛋白和线粒体第二激活因子在锰诱导大鼠生精细胞凋亡蛋白酶表达中的调节作用

目的:研究氯化锰导致的大鼠生精细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)及凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)表达中X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和线粒体第二激活因子(Smac)的调节机制,探讨锰导致的雄性不育机制。方法:雄性SD大鼠随机分为对照组、低剂量(15 mg/kg MnCl_2)和高剂量(30 mg/kg MnCl_2)组,腹腔注射MnCl_2 4周和6周,免疫组织化学检测生精细胞caspase-9、Apaf-1、XIAP和Smac表达。结果:与对照组相比较,各组生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高,XIAP表达降低。同时间的高剂量组与低剂量组比较,同剂量的6周组与4周组比较,生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高,XIAP表达降低。各组caspase-9与Apaf-1表达呈正相关,XIAP与Smac表达呈负相关。结论:锰可促进生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达,抑制XIAP表达,导致细胞凋亡,产生雄性生殖毒性效应。

第二个线粒体衍生半胱天冬氨酸蛋白酶激活剂 催乳剂检测在子宫内膜异位症中的应用价值分析

目的探讨第二个线粒体衍生半胱天冬氨酸蛋白酶激活剂(Smac)、催乳素(PRL)在子宫内膜异位症中的应用价值。方法选取2018年1月-2019年12月在丽水市中心医院治疗的子宫内膜异位症患者80例(观察组),同时选取健康志愿者80例作为对照组,检测血清Smac、PRL水平及子宫内膜厚度。结果观察组血清Smac为(288.93±98.20) ng/L,明显低于对照组(P<0.05),而PRL为(568.39±101.12) k U/L,明显高于对照组(P<0.05);观察组子宫内膜厚度为(6.12±1.14) mm,明显低于对照组(P<0.05);子宫内膜异位症患者血清Smac与子宫内膜厚度呈正相关(r=0.612,P<0.05),PRL与子宫内膜厚度呈负相关(r=-0.599,P<0.05);血清Smac与PRL呈负相关(r=-0.697,P<0.05)。结论子宫内膜异位症患者血清Smac降低,而PRL升高,其与患者子宫内膜厚度有一定相关性。

杏仁核注射红藻氨酸诱导大鼠边缘叶癫痫发作时海马中Smac和XIAP蛋白的表达

应用红藻氨酸(kainic acid,KA)诱导的大鼠边缘叶癫痫发作模型,检测第二个线粒体源的半胱天冬蛋白酶激活物/直接与凋亡抑制蛋白结合的低等电点蛋白(second mitochondrial activator of caspases/direct inhibitor of apoptosis protein-binding protein oflow isoelectric point[PI],Smac/DIABLO)和X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(X-chromosome-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)在癫痫大鼠海马神经元表达。单侧杏仁核内注射KA诱导癫痫发作,1 h后用安定终止发作,然后分别用TUNEL染色和cresvl violet染色观察海马神经元存活和凋亡的变化,用免疫荧光和Western blot检测海马Smac/DIABLO、XIAP和半胱天冬蛋白酶-9(caspase-9)的表达。结果表明,发作终止2 h时KA注射同侧海马CA3区细胞浆内Smac/DIABLO蛋白表达增加,4h时caspase-9出现裂解片断,8 h时出现TUNEL阳性细胞,24 h时达高峰。脑室内注射caspase-9抑制剂z-LEHD-fluoromethylketone(z-LEHD-fmk)可减少TUNEL阳性细胞,增加存活神经元。发作后KA注射同侧海马CA3区神经元caspase-9免疫反应性增强,Smac/DIABLO和XIAP弥散于整个神经元内。对侧海马未检测到TUNEL阳性细胞及Smac/DIABLO和XIAP蛋白的上述变化。以上结果提示,癫痫发作可诱导Smac/DIABLO蛋白从?

线粒体自噬核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体轴在衰老相关心血管疾病中的研究进展

人口老龄化已成为全世界面临的严峻课题,衰老是心血管疾病最主要的危险因素导致衰老相关心血管疾病发病率明显增加。越来越多的证据表明,随着年龄增长,自噬和线粒体自噬能力下降[1]。核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体是一种多蛋白复合物,其活化可激活下游半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1),进而促使白细胞介素(IL)-1β和IL-18分泌与成熟,可引发炎性细胞死亡。近年来研究发现,诱导自噬和线粒体自噬减轻NLRP3炎症小体激活引起的炎性反应在衰老相关事件中发挥重要作用[2]。

线粒体自噬与核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎性体在阿尔茨海默病中的关系研究进展

1 线粒体自噬和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性体与阿尔茨海默病(AD) AD是一种年龄相关的神经退行性疾病,其病理特征主要包括淀粉样斑块和神经原纤维缠结的积累、广泛的神经元脱失、突触功能障碍、神经炎症、线粒体功能障碍等[1-2].β淀粉样蛋白(Aβ)纤维原和磷酸化的tau蛋白缠结是AD的特征性标志,并且随着疾病的进展在大脑皮质中不断延伸[3].线粒体自噬能够选择性地水解清除受损的线粒体,当此种清除途径受损时,将会加重AD的病程进展[2].

凋亡诱导因子是线粒体内介导核凋亡的最主要蛋白质之一

凋亡诱导因子 (apoptosis inducingfactor ,AIF)基因定位于X染色体上 ,其编码产物是一种可直接介导细胞核凋亡的效应分子 .鼠AIF前体蛋白在胞浆中合成后 ,通过其N端的线粒体定位信号 (MLS)有效地穿入线粒体膜间隙 ,然后在 10 2位甘氨酸处水解掉MLS ,其余部分再与黄素腺嘌呤二核苷酸 (FAD)结合 ,并重新折叠成为具有促凋亡潜能的成熟AIF分子 ,分子质量为 5 7ku .当凋亡信号刺激时 ,AIF分子从线粒体释放到胞浆 ,然后转位到细胞核内 ,引起染色体核周边凝集和DNA呈大片段断裂 (～ 5 0kb) .该作用不受广谱caspases抑制剂z VAD .fmk的抑制 ,也不受Bcl 2过量表达的影响 .基因剔除实验表明 ,AIF蛋白的促凋亡活性是胚胎小鼠形态发生过程中类胚体成腔所必需的 ,而且是AIF独立作用的结果 ,可以不依赖caspase 3的活性 .因此AIF介导的细胞凋亡可能代表了独立于caspase通路之外的另一条更原始、更保守的凋亡途径 .

去亚甲基小檗碱对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞线粒体caspase依赖性凋亡的影响

目的探讨去亚甲基小檗碱(DMB)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的SH-SY5Y细胞线粒体caspase依赖性凋亡通路的影响。方法培养SH-SY5Y细胞,将其分为对照组、MPP+组、小檗碱(BBR,DMB的前体)+MPP+组、司莱吉兰(selegiline,与DMB同为单胺氧化酶B抑制剂)+MPP+组、DMB+MPP+组。应用免疫印迹法检测各组bcl-2/bax比值以及cleaved caspase-3蛋白的表达。结果与对照组相比,MPP+组bcl-2/bax比值明显降低(F=42.58,q=17.89,P<0.001),DMB、BBR、selegiline处理均可以抑制MPP+诱导的bcl-2/bax比值降低(q=6.71~10.63,P<0.001),且selegiline处理效果强于BBR和DMB(q=3.93、3.59,P<0.05)。与对照组相比,MPP+组cleaved caspase-3蛋白表达明显上调(F=111.60,q=29.44,P<0.001),DMB、BBR、selegiline处理可以降低MPP+诱导的cleaved caspase-3蛋白表达上调(q=10.74~13.53,P<0.001),且3种药物处理效果差异无显著性。结论对于MPP+诱导的SH-SY5Y细胞,DMB可以升高bcl-2/bax比值,降低cleaved caspase-3蛋白的表达。

蓝光照射致人视网膜色素上皮细胞线粒体凋亡的途径及机制

背景 研究已证实蓝光照射可导致视网膜色素上皮细胞（RPE）凋亡,但其机制目前尚不完全清楚. 目的 探讨线粒体凋亡通路是否参与蓝光照射诱导体外培养的人RPE细胞凋亡过程.方法 分离新鲜的供体视网膜,对人RPE细胞进行原代培养和传代,用角蛋白单克隆抗体行细胞鉴定.将体外培养的人RPE细胞分为无光照组、单纯光照组、光照＋硝苯地平组、光照＋钙磷酸结合蛋白C（calphostin C）组、光照＋佛波酯（PMA）组.光照组细胞用（2 000±500） lx的蓝光照射人RPE细胞6h,然后继续培养24 h后终止.采用Western blot法比较两个组间RPE细胞中凋亡相关调控因子bax、bcl-2、bcl-xl的相对表达,以评价蓝光照射对RPE细胞凋亡的影响.光照＋硝苯地平组、光照＋calphostin C组、光照＋PMA组细胞在蓝光照射前1h分别在培养基中加入相应药物,然后以（2 000±500） lx的蓝光照射人RPE细胞6h,并继续培养24 h,采用Westernblot法检测5个组细胞中caspase-9蛋白表达量的变化,观察钙通道和蛋白激酶C（PKC）通路对RPE细胞线粒体的影响.结果 培养的细胞生长良好,细胞质内充满色素颗粒,呈铺路石样排列,对角蛋白呈阳性反应.无光照组和单纯光照组均可见bax、bcl-2及bcl-xl蛋白条带,相对分子质量分别为23 000、26 000和30 000.与无光照组比较,单纯光照组bax、bcl-2和bcl-xl蛋白表达相对值（A）下降,差异均有统计学意义（t=-4.409,P=0.012;t=7.575,P=0.002;t=6.068,P=0.004）.与无光照组比较,单纯光照组、光照＋calphostin C组、光照＋PMA组细胞中caspase-9蛋白表达均升高,差异均有统计学意义（P=0.005、0.002、0.000）,而光照＋硝苯地平组与无光照组比较差异无统计学意义（P=0.191）.与单纯光照组比较,光照＋PMA组caspase-9蛋白表达升高,差异有统计学意义（P=0.005）;而光照＋硝苯地平组及光照＋calphostin C组caspase-9蛋白表达差异均无统计学意义（P=0.057、0.643）. 结论 蓝光致体外培养的人RPE细胞凋亡,同时细胞中caspase-9表达增强,凋亡抑制基因bcl-2及bcl-xl表达下降,凋亡促进基因bax蛋白表达增强.线粒体凋亡通路参与蓝光照射致RPE细胞凋亡的过程;PKC通路可能参与了蓝光导致的人RPE细胞凋亡.

线粒体通透性转换孔介导的胀亡和凋亡对七氟醚后处理保护大鼠心肌缺血再灌注的作用

目的探讨线粒体通透性转换孔介导的胀亡和凋亡在七氟醚后处理保护大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用和七氟醚后处理心肌保护的机制。方法选择雄性SD大鼠105只,随机分为5组,每组21只:假手术组、缺血再灌注组、七氟醚后处理组、苍术苷+七氟醚后处理组(联合组)和苍术苷组。连续监测并记录大鼠血流动力学变化;于再灌注2h末取心肌组织,测定心肌梗死范围;电镜观察心肌线粒体超微结构;采用Western blot法检测前胀亡受体、细胞色素C和活化的Caspase-3表达水平;采用分光光度法测定心肌烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)含量。结果与假手术组比较,其余4组大鼠再灌注1h和2h时平均动脉压和心率-收缩压乘积明显降低,心肌梗死范围扩大,心肌细胞损伤增加,前胀亡受体、细胞色素C和Caspase-3表达上调,NAD+含量明显降低(P<0.05)。与缺血再灌注组比较,七氟醚后处理组心肌梗死范围缩小,心肌细胞损伤减少,前胀亡受体、细胞色素C和Caspase-3表达下调,NAD+含量明显升高(P<0.05)。结论七氟醚后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。

青蒿琥酯诱导人早幼粒白血病细胞HL60凋亡的线粒体机制

目的 :探讨青蒿琥酯 (artesunate ,Art)诱导人急性早幼粒白血病细胞HL6 0凋亡的线粒体机制。方法 :用Art处理HL6 0细胞 ,通过MTT比色法检测细胞增殖抑制的效果 ;透射电镜、DNA凝胶电泳技术观察细胞的凋亡 ;流式细胞术 (flowcytometry ,FCM)进行细胞周期分析和线粒体膜电位 (mitochon drialmembranepotential ,MMP)水平的检测 ;比色法检测半胱 天冬氨酸蛋白酶 3(cysteinecontainingas partate,Caspase 3)活性。结果 :Art呈浓度和时间依赖性的抑制HL6 0细胞的增殖 (P <0 .0 5 )。Art诱导后HL6 0细胞出现典型的凋亡形态学变化和生化改变 ,G2 +M期细胞比例增高 ,S期减少 ,凋亡率上升 (P <0 .0 5 ) ,线粒体膜电位降低 (P <0 .0 5 ) ,Caspase 3活性增强 (P <0 .0 5 )。结论 :Art可能通过线粒体 半胱 天冬氨酸蛋白酶 3特定途径诱导HL6 0细胞凋亡。

丙泊酚通过抑制线粒体途径的细胞凋亡保护心肌缺血再灌注损伤(英文)

目的观察丙泊酚对离体大鼠心肌缺血再灌注(I-R)损伤的影响,并从线粒体过氧化损伤方面探讨其可能的作用机制。方法应用Langendorff离体心脏灌流系统,全心停灌25 min,再灌注30 min建立心肌I-R损伤模型。记录各项心功能指标;测定心肌线粒体呼吸链的完整性、膜肿胀度和丙二醛(MDA)含量;流式细胞术检测心肌细胞凋亡率及Bcl-2和Bax蛋白的表达,免疫组化法测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3,-9和-8的表达。结果与I-R组相比,缺血前10 min开始,并于再灌注期间持续灌流丙泊酚30和60μmol·L^(-1)能明显改善I- R后的心功能;心肌线粒体呼吸链损伤有所恢复,膜肿胀度减轻,MDA生成明显减少,心肌细胞凋亡率明显降低,Bcl-2表达增加,Bax表达减少,caspase-3和caspase-9阳性细胞数明显减少。结论丙泊酚减轻I-R所致的心肌线粒体过氧化损伤,抑制线粒体途径的细胞凋亡。

线粒体依赖的凋亡通路与缺血性脑卒中

在脑血管病研究进展中，缺血性脑卒中后神经元损伤的病理、生理机制是研究最为活跃的领域之一。缺血性脑卒中后神经元损伤的机制十分复杂，而凋亡在其中起着举足轻重的作用。线粒体作为细胞内能量产生和代谢的中心，与脑缺血后神经元损伤有着密切联系。近年来，关于线粒体参与脑缺血时细胞凋亡的信号转导通路的研究不断深化，为进一步对缺血性脑卒中后神经元损伤机制的探索指出了新的方向，从而使以线粒体作为靶点的脑缺血保护问题成为可能。

依托泊苷通过线粒体信号通路释放细胞色素C诱导Jurkat白血病细胞凋亡(英文)

目的:研究在人类Jurkat白血病细胞株中依托泊苷诱导凋亡的分子机制,揭示由依托泊苷启动的凋亡信号通路。方法:分别用annexin V-FITC和碘化丙啶(PI)染色,通过流式细胞仪测定annexin V阳性和出现亚二倍体DNA的凋亡细胞。以3,3 -dihexyloxyacarbocyanine iodide [DiOC6(3)]为染色剂,采用流式细胞术检测细胞线粒体膜电位的变化。采用离心技术分离细胞的胞浆与线粒体。细胞色素c从线粒体转入胞浆,caspase-3的激活,多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)的切割等蛋白质的表达由免疫印迹技术(Western blotting)检测。结果:依托泊苷诱导Jurkat白血病细胞凋亡,细胞凋亡与依托泊苷的作用时间呈线性关系。广谱的caspase抑制剂zVAD.fmk可抑制依托泊苷诱导的DNA片段化和磷脂酰丝氨酸外翻。依托泊苷引起的线粒体膜电位下降早于DNA片段化和磷脂酰丝氨酸外翻,形成明显对照的是zVAD.fmk不能阻断依托泊苷诱导的线粒体膜电位的下降。依托泊苷介导细胞色素c从线粒体释放到胞浆,激活caspase-3,caspase-3的底物PARP被切割。结论:依托泊苷诱导Jurkat白血病细胞株凋亡的机制是降低线粒体膜电位和释放细胞色素c到细胞浆启动线粒体信号转导通路,最终激活caspase而导致细胞凋亡。

Caspase-9途径在丁酸钠诱导结肠癌细胞株HT-29凋亡中的作用

目的:探讨caspase-9途径在丁酸钠(NaBt)诱导人结肠癌细胞株HT-29凋亡中的作用。方法:HT-29细胞体外培养至对数生长期,分别及联合给予5.0mmol/L丁酸钠、20μmol/L z-VAD-fmk、z-DEVD-fmk、z-IETD-fmk、z-LEHD-fmk处理24h,并设空白对照。以Annexin V-FITC法联合PI染色,流式细胞术检测细胞凋亡,JC-1染色检测线粒体膜电位变化,caspase活性检测试剂盒检测caspase-3、caspase-8、caspase-9的活性。结果:(1)丁酸钠诱导的HT-29细胞凋亡[(35.40±0.70)%]可被z-VAD-fmk抑制[(1.33±0.59)%],亦可被z-DEVD-fmk抑制[(1.40±0.52)%],并可被z-LEHD-fmk抑制[(1.27±0.91)%],均P<0.01;但是z-IETD-fmk不能够抑制该作用[(32.10±2.33)%],P>0.05;(2)丁酸钠干预HT-29细胞后,线粒体膜电位降低(5.53±0.91),z-VAD-fmk、z-DEVD-fmk、及z-LEHD-fmk能够阻断这种作用(9.80±1.15,10.23±0.50,10.33±1.02),P<0.05;而z-IETD-fmk未显示对该作用的改变(5.93±1.31),P>0.05;(3)丁酸钠干预HT-29细胞后,caspase-3、caspase-9的活性增高2-3倍,caspase-8的活性无显著变化,P>0.05。结论:丁酸钠主要是通过线粒体途径,激活caspase-9,启动细胞凋亡环节,从而激发下游的效应caspases,诱导HT-29细胞凋亡。

异土木香内酯对人膀胱癌细胞株T24增殖、凋亡的影响及其机制

目的观察异土木香内酯对人膀胱癌细胞株T24增殖、凋亡的影响,并探讨其可能作用机制。方法①取对数生长期T24细胞,分为1、2、3、4、5、6组,1~5组(实验组)分别加入5、10、20、40、80μmol/L的异土木香内酯,6组加入正常培养液(对照),分别于培养24、48、72 h时采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力。②T24细胞分成A、B、C、D、E组,A组加入不含异土木香内酯的培养液培养,B、E组先加入5 nmol/L的N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理培养2 h,C、D、E组分别加入10、20、20μmol/L的异土木香内酯,培养24 h时采用流式细胞仪测算各组细胞凋亡率,DCFH-DA试剂盒检测细胞内活性氧簇(ROS),JC-1线粒体膜电位试剂盒检测细胞线粒体膜电位。③取T24细胞分为4组,每组6个复孔,其中3组分别加入10、20、40μmol/L异土木香内酯,另外一组加入不含异土木香内酯的培养液处理(对照组),培养24 h时Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bax、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、细胞色素C(Cytochrome C)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)。结果①与1组比较,2、3、4、5组细胞增殖抑制率升高(P均<0.05);与2组比较,3、4、5组细胞增殖抑制率升高(P均<0.05);与3组比较,4、5组细胞增殖抑制率升高(P均<0.05)。②与A组比较,C、D组细胞凋亡率、ROS含量升高(P均<0.05);与C组比较,D组细胞凋亡率、ROS含量升高(P均<0.05);与D组比较,E组细胞凋亡率、ROS含量降低(P均<0.05)。与A组比较,C组细胞线粒体膜电位降低(P均<0.05);与C组比较,D组细胞线粒体膜电位降低(P均<0.05);与D组比较,E组细胞线粒体膜电位升高(P均<0.05)。③与对照组比较,各浓度药物组中Bax、Cytochrome C及Caspase-3相对表达量升高,Bcl-2相对表达量降低(P均<0.05);随浓度升高,药物组Bax、Cytochrome C及Caspase-3相对表达量升高,Bcl-2相对表达量降低(P均<0.05)。结论异土木香内酯可抑制T24细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与异土木香内酯导致ROS含量升高、线粒体膜电位下降、调节相关凋亡蛋白的表达有关。

重楼皂苷Ⅰ对胃癌SGC-7901细胞线粒体自噬的作用及对LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、Caspase-3表达的影响

目的:探究重楼皂苷Ⅰ对胃癌SGC-7901细胞线粒体自噬的作用及对微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、微管相关蛋白1轻链3-Ⅰ(LC3-Ⅰ)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达的影响。方法:将对数生长期的胃癌SGC-7901细胞分为对照组和重楼皂苷Ⅰ低、中、高剂量组。重楼皂苷Ⅰ低、中、高剂量组分别以1.5、3.0、6.0 mg/mL重楼皂苷Ⅰ培养胃癌细胞,对照组用含10%胎牛血清的1640-RPMI培养基培养胃癌细胞。噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖抑制率;透射电镜观察SGC-7901细胞超微结构的改变;Lyso-Tracker Red染色观察SGC-7901细胞自噬情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blotting法检测胃癌细胞Beclin-1、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白相对表达量。结果:与对照组比较,重楼皂苷Ⅰ低、中、高剂量组24、48、72 h增殖抑制率升高,重楼皂苷Ⅰ低剂量组<重楼皂苷Ⅰ中剂量组<重楼皂苷Ⅰ高剂量组(P<0.05);与对照组比较,重楼皂苷Ⅰ低、中、高剂量组细胞椭圆形的双层膜包绕囊泡状结构增多,自噬小体增多。重楼皂苷Ⅰ低、中、高剂量组细胞溶酶体红色荧光小体增加,酸性自噬溶酶体囊泡过度累积。与对照组比较,重楼皂苷Ⅰ低、中、高剂量组细胞凋亡率及Beclin-1、Caspase-3蛋白相对表达量升高,重楼皂苷Ⅰ低剂量组<重楼皂苷Ⅰ中剂量组<重楼皂苷Ⅰ高剂量组;Bcl-2/Bax、LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ比值降低,重楼皂苷Ⅰ高剂量组<重楼皂苷Ⅰ中剂量组<重楼皂苷Ⅰ低剂量组(P<0.05)。结论:重楼皂苷Ⅰ可通过诱导胃癌SGC-7901细胞线粒体自噬,抑制细胞增殖,促进凋亡。

口腔白斑及口腔鳞癌组织中Livin和Smac蛋白的表达

目的 探讨Livin和Smac蛋白在口腔白斑和口腔鳞癌组织中的表达及临床意义。方法 免疫组化S-P法检测口腔正常黏膜、口腔白斑和口腔鳞癌组织中Livin和Smac蛋白的表达。结果 Livin蛋白在口腔正常黏膜、口腔白斑和口腔鳞癌组织中的阳性表达率分别为9.09%、35.71%和86.84%(χ^2=29.187,P<0.001);Smac蛋白在口腔正常黏膜、口腔白斑和口腔鳞癌组织中的阳性表达率为100.00%、78.57%和42.11%(χ^2=18.359,P<0.001);口腔鳞癌组织中Livin蛋白表达与Smac蛋白表达呈负相关关系(rs=-0.456,P=0.004)。结论 Livin的高表达和Smac的低表达与口腔白斑癌变的发生、发展关系密切,两者联合检测有助于早期评估口腔白斑癌变风险。