基于X连锁凋亡抑制蛋白/第二种线粒体衍生半胱天冬酶激活剂通路探讨尼莫地平对脑梗死大鼠神经功能的影响

目的基于X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)/第二种线粒体衍生半胱天冬酶激活剂(Smac)通路探讨尼莫地平对脑梗死大鼠神经功能的影响。方法以线栓法闭塞大鼠大脑中动脉诱导建立大鼠脑梗死模型,随机分为模型组、尼莫地平组(10 mg/kg)、AT-406组(XIAP抑制剂,7 mg/kg)、联合组(尼莫地平联合AT-406),每组12只,另取12只大鼠设定为假手术组,分别给药干预后,以Zea Longa分级法对各组大鼠神经功能缺损进行评分;以Morris水迷宫实验评测各组大鼠学习记忆功能通过比较其跨越原平台次数;以TTC染色检测各组大鼠脑梗死状况;以TUNEL染色评测各组大鼠海马神经元凋亡状况;以试剂盒检测各组大鼠血清促炎因子环氧化酶-2(COX-2)与白细胞介素-18(IL-18)含量;以蛋白免疫印迹法检测各组大鼠脑组织凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]与XIAP/Smac通路相关蛋白(XIAP、Smac)表达状况。结果与假手术组相比,模型组大鼠跨越原平台次数、脑组织Bcl-2与XIAP表达水平显著降低(P<0.05),神经功能缺损评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡比率、血清COX-2与IL-18含量、脑组织Bax与Smac表达水平显著升高(P<0.05)。与模型组、联合组分别相比,尼莫地平组大鼠跨越原平台次数、脑组织Bcl-2与XIAP表达水平均升高(P<0.05),神经功能缺损评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡比率、血清COX-2与IL-18含量、脑组织Bax与Smac表达水平均降低(P<0.05)。与模型组、联合组分别相比,AT-406组大鼠脑组织跨越原平台次数、脑组织Bcl-2与XIAP表达水平均降低(P<0.05),神经功能缺损评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡比率、血清COX-2与IL-18含量、脑组织Bax与Smac表达水平均升高(P<0.05)。结论尼莫地平可通过上调XIAP表达,下调Smac表达,进而抑制炎症,减轻脑梗死大鼠海马神经元凋亡,提升大鼠学习记忆能力,改善其神经功能。

热休克预处理抑制过氧化氢所致C2C12肌原细胞释放天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物及细胞凋亡

为探讨热休克预处理对过氧化氢所致C2C12肌原细胞凋亡和第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物从线粒体释放的影响 ,采用 0 .5mmol L过氧化氢作用于C2C12肌原细胞。Hoechst332 5 8荧光染色 ,观察细胞形态学改变并计算凋亡百分率 ,抽提DNA作琼脂糖电泳 ,以确定细胞凋亡情况。采用天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶活性定量检测试剂盒及蛋白质印迹观察天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 3,天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 9的活化情况。采用免疫荧光及细胞成分分离后蛋白质印迹检测第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物从线粒体的释放。结果发现 ,过氧化氢处理 1～ 2h ,第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物逐渐从线粒体释放入胞浆 ;处理 4h天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 3,天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 9活性升高 ,12h达高峰 ;处理 2 4h细胞明显出现凋亡 ,凋亡百分率明显升高。热休克预处理可诱导C2C12肌原细胞中热休克蛋白 90 ,热休克蛋白 70及αB 晶状体蛋白的表达增高 ;抑制第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物释放、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 3,天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 9的活化及细胞凋亡的发生。结果提示 ,线粒体信号通路在?

第二线粒体衍生的半胱天冬酶激活剂在宫颈鳞癌中的表达及其临床意义

目的检测第二线粒体衍生的半胱天冬酶激活剂(Smac)蛋白在宫颈鳞癌组织中的表达,探讨其与临床病理因素及预后的关系。方法采用免疫组化方法检测Smac蛋白在175例宫颈鳞癌组织和49例正常宫颈组织中的表达情况。结果Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期宫颈鳞癌患者的5年生存率分别为68.9%、56.4%和36.5%。Smac蛋白主要定位于癌细胞浆,在正常宫颈组织中不表达。在175例宫颈鳞癌组织中87例表达阳性。临床分期Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期宫颈癌的阳性率分别为70.2%、47.2%和35.7%,其差异均具有统计学意义(P<0.01)。Smac蛋白在有淋巴结转移和无淋巴结转移的表达分别为23.8%和57.9%,二者比较差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 Smac蛋白在宫颈鳞癌组织中表达下调,预示肿瘤有较高的侵袭性和患者预后不良。

血清剥夺诱导大鼠骨髓间充质干细胞凋亡及其对Smac基因转录的影响

目的观察体外血清剥夺诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)凋亡及BMSCs凋亡过程中Smac基因表达变化,进一步探索BMSCs凋亡机制。方法用密度梯度离心和差异贴壁相结合法分离BMSCs,体外培养、扩增。流式细胞术对培养的BMSCs进行免疫表型鉴定。BMSCs体外血清剥夺培养0h(正常对照组)、24h、48h,用AnnexinⅤ-FITC和碘化丙啶(PI)双标记行流式细胞术凋亡检测。通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)生成cDNA,以荧光定量PCR检测分析Smac mRNA的丰度。结果体外培养第5代BMSCs流式细胞术免疫表型鉴定结果符合BMSCs特点。与0h比较,血清剥夺24、48h后,BMSCs发生显著凋亡,各组比较有统计学差异(F=170.96P<0.01),且24h点早期凋亡百分率达到(32.99±2.52)%。同时荧光定量PCR检测显示24h点Smac mRNA表达与正常对照组相比显著升高(t=2.814P<0.05)。结论血清剥夺能诱导BMSCs凋亡,被诱导凋亡的BMSCs中Smac基因转录增加。

乳腺浸润性导管癌组织中Caspase-3、XIAP、Smac的表达及意义

目的观察乳腺浸润性导管癌组织中含半光氨酸的天冬氨酸酶3(Caspase-3)、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)及第二个线粒体衍生的半胱氨酸蛋白酶激动剂(Smac)的表达变化,探讨乳腺浸润性导管癌的可能发病机制。方法选取71例乳腺浸润性导管癌患者,进行高、中、低病理组织分级,采用免疫组化SP法检测癌组织中的Caspase-3、XIAP、Smac表达。结果 Caspase-3、XIAP、Smac在高分化组织中的阳性表达率分别为76.2%(16/21)、42.9%(9/21)、85.7%(18/21),在中分化组织中的阳性表达率分别为69.7%(23/33)、45.5%(15/33)、84.8%(28/33),在低分化组织中的阳性表达率分别为35.3%(6/17)、82.4%(14/17)、47.1%(8/17),高、中分化癌组织中Caspase-3、Smac阳性表达程度明显高于、XIAP明显低于低分化癌组织(P<0.05)。Caspase-3与XIAP表达呈负相关(rs=-0.81,P<0.05),Caspase-3与Smac表达呈正相关(rs=0.79,P<0.05),XIAP与Smac表达呈负相关(rs=-0.69,P<0.05)。结论乳腺浸润性导管癌组织中Caspase-3、Smac蛋白低表达甚至缺失,XIAP蛋白过表达,三者可能在促进乳腺浸润性导管癌的发生发展中起重要作用。

口腔鳞癌组织中PDCD5、Smac的表达及与患者临床病理参数的关系

目的观察口腔鳞癌组织中程序性细胞死亡蛋白5(PDCD5)、第二线粒体源性激活半胱天冬酶(Smac)的表达变化,并探讨其与患者临床病理参数的关系。方法口腔鳞癌患者55例,取其癌组织及癌旁组织(距癌组织2 cm)55例份。应用免疫组化SP法检测患者口腔鳞癌组织、癌旁组织PDCD5、Smac蛋白表达,分析PDCD5、Smac蛋白表达与口腔鳞癌患者临床病理参数的关系。结果口腔鳞癌组织中PDCD5、Smac蛋白表达阳性率低于癌旁组织(P均<0.05)。口腔鳞癌组织中PDCD5、Smac蛋白表达阳性率与肿瘤的TNM分期以及淋巴结转移有关(P均<0.05),与肿瘤的分化程度无关(P均>0.05);PDCD5与Smac蛋白表达呈正相关(r_s=0.542,P<0.05)。结论口腔鳞癌组织中PDCD5、Smac蛋白表达降低,其二者低表达协同参与口腔鳞癌的发生发展。

联合检测Smac及Caspase9在预测直肠癌术前放化疗敏感性的临床价值

目的:本研究旨在探讨第二线粒体源的半胱天冬酶激活物(second mitochondria-derived activator of Caspase,Smac)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(cysteinyl asparate specific proteinase9,Caspase9)蛋白表达水平与直肠癌术前放化疗后病理反应程度的关系,单独评价及两者联合后评价其表达水平对预测直肠癌术前放化疗敏感性的价值.方法:收集昆明医科大学第一附属医院肿瘤放疗科2008-07/2013-06接受术前放化疗并行手术的直肠腺癌患者43例,免疫组织化学方法检测放化疗前活检标本及手术后切除标本中Smac及Caspase9蛋白的表达水平,分析其放化疗前、后表达水平的变化,以及活检组织中Smac及Caspase9蛋白表达水平与术后病理反应程度的关系.结果:直肠癌术前放化疗后病理反应良好,有效率达72.1%,其中,病理完全缓解率达30.2%.放化疗前、后直肠癌组织中Smac及Caspase9蛋白表达均有差异,放化疗后Smac及Caspase9蛋白的染色得分均下降(P<0.001).放化疗前Caspase9表达阳性的患者(染色得分1-8分)放化疗有效的比例显著增加,差异有统计学意义(P<0.05).当Smac及Caspase9均为阳性时,放化疗有效的比例显著提高(P=0.0002).生存分析显示,放化疗反应结果与患者总生存相关,放化疗有效组的生存时间较放化疗无效组明显延长(P=0.0193).结论:放化疗前活检组织中Caspase9的阳性表达是直肠癌患者对放化疗敏感的标志,联合检测放化疗前Smac及Caspase9的表达可更好地预测直肠癌细胞对放化疗的敏感性.在诸多因素中,直肠癌患者对放化疗的有效性是决定患者预后的重要因素,联合检测活检组织中Smac及Caspase9的表达有可能筛选出对放化疗敏感的患者,从而使其获得更好的预后.

不同基因分型乳腺癌中Caspase-3、XIAP、Smac表达情况及与临床病理参数的关系

目的探讨天冬氨酸酶3(Caspase-3)、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、第二个线粒体衍生半胱氨酸蛋白酶激动剂(Smac)在不同基因分型乳腺癌中表达情况,及其与乳腺癌临床病理参数的相关性。方法选取行手术切除治疗的73例乳腺癌患者为研究对象,其中Luminal A型30例,Luminal B型12例,HER-2过表达型9例,BLBC型22例,同期取20例癌旁正常乳腺组织作为对照组,采用免疫组织化学(SP)方法检测乳腺组织中Caspase-3、XIAP、Smac蛋白表达情况,分析三者在不同基因分型乳腺癌中表达水平及其与乳腺癌病理参数的相关性。结果乳腺癌组织中Caspase-3蛋白阳性表达率为39.73%(29/73),明显低于癌旁正常乳腺组织Caspase-3蛋白阳性表达率90.00%(18/20),差异有统计学意义(P <0.05)。乳腺癌组织中XIAP蛋白阳性表达率为86.30%(63/73),明显高于癌旁正常乳腺组织XIAP蛋白阳性表达率40.00%(8/20)(P <0.05)。乳腺癌组织中Smac蛋白阳性表达率为31.51%(23/73),明显低于癌旁正常乳腺组织Smac蛋白阳性表达率95.00%(19/20)(P <0.05)。Caspase-3、XIAP、Smac蛋白表达在Luminal A型、HER-2过表达型、BLBC型之间两两比较,差异均有统计学意义(P <0.05)。Caspase-3、XIAP、Smac蛋白表达与乳腺癌患者年龄、肿瘤大小、绝经情况无关(P> 0.05),与TNM分期、分化程度、淋巴结转移有关(P <0.05)。Spearman相关性分析结果显示,乳腺癌组织中Caspase-3与XIAP蛋白表达呈明显负相关(γ=-0.796,P <0.01),与Smac蛋白表达呈明显正相关(γ=0.803,P <0.01),XIAP与Smac蛋白表达呈明显负相关(γ=-0.712,P <0.01)。结论 Caspase-3、Smac蛋白在乳腺癌组织中明显低表达,XIAP蛋白呈明显高表达,三者与乳腺癌基因分型、发生发展密切相关。

子痫前期患者胎盘组织及外周血中Smac、Survivin和PTEN的表达及其相关性

目的 探究子痫前期胎盘组织及外周血中第二线粒体源半胱天冬酶激活物（Smac）、存活素（Survivin）及抑癌基因（PTEN）的表达及其相关性. 方法 对本院收治的35例正常妊娠产妇（对照组）、31例子痫前期轻度产妇（轻度组）、32例子痫前期重度产妇（重度组）的胎盘组织及外周血中Smac、Survivin、PTEN mRNA、蛋白表达水平进行测定并比较. 结果 轻度组、重度组胎盘组织及外周血中的Survivin、PTEN mRNA、蛋白表达水平均显著低于对照组,重度组显著低于轻度组;轻度组、重度组胎盘组织及外周血中的Smac mRNA、蛋白表达水平显著高于对照组,重度组显著高于轻度组;子痫前期的胎盘组织及外周血中Smac与Survivin（r=-0.410,P＜0.001）、PTEN（r=-0.418,P＜0.001）蛋白表达水平均呈负相关. 结论 子痫前期的胎盘组织及外周血中Smac高表达、Survivin与PTEN低表达,三者可能呈相互协同的关系。

非小细胞肺癌XIAP和Smac的表达与临床病理特征及预后的关系

目的:探讨XIAP(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)和Smac(second mitochondria-derived activator of cas-pase,Smac)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达与临床病理特征及预后的关系。方法:采用免疫组织化学法检测70例非小细胞肺癌组织及70例对应癌旁肺组织中XIAP、Smac的表达。结果:XIAP在70例NSCLC组织中有59例阳性表达,其中高表达16例;对应70例癌旁肺组织中有52例表达,其中高表达5例,两组XIAP表达强度比较差异有统计学意义(Z=-4.049,P<0.001);Smac在70例肺癌组织中有63例阳性表达,其中高(强阳性)表达32例;对应70例癌旁肺组织有53例表达,其中高(强阳性)表达5例,两组Smac表达强度比较差异有统计学意义(Z=-5.484,P<0.001)。NSCLC组织中XIAP、Smac的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小、组织类型、分化程度、吸烟与否等无明显关系(P>0.05);但二者的表达均与临床分期、淋巴结转移与否有关系(P<0.05)。通过Kaplan-Meier法分析得出,XIAP和Smac在NSCLC中的表达与患者的预后均无明显关系(P>0.05)。结论:1)XIAP和Smac在非小细胞肺癌组织及其对应癌旁肺组织中均有表达,但存在表达量的差异。2)XIAP和Smac在非小细胞肺癌中的表达与患者的预后均无显著关系。

缺氧缺血性脑病新生儿头颅CT与血清NSE及外周血细胞Smac mRNA的关系

目的探讨缺氧缺血性脑损伤新生儿血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)和外周血单核细胞第二线粒体源的半胱天冬酶激活物(Smac)的mRNA的变化。方法65例新生儿在出生后24h采集血标本,2h内分离血清,用电发光化学法检测NSE浓度。沉淀的血细胞用Trizol一步法提取RNA,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测分析其中Smac mRNA的水平。1周左右行头颅CT检查。结果影像学检查阳性组(26例)和阴性组(39例)血清NSE浓度分别为(32.73±10.20)μg/L和(14.23±7.14)μg/L,(P<0.01),以β-肌动蛋白为内参照的Smac mRNA相对水平分别为(0.43±0.12)和(0.19±0.08),(P<0.01)。血清NSE浓度与5-minApgar评分呈负相关(r=-0.849,P<0.01),与Smac mRNA相对量呈高度正相关(r=0.975,P<0.01)。结论外周血血清NSE和Smac mRNA水平可作为临床早期评价新生儿脑损伤严重程度的客观指标。

子宫内膜癌组织中Smac、Bcl-2、Survivin和Bax表达的临床意义

目的 通过免疫组织化学SP法检测子宫内膜癌细胞中Smac、Bcl-2、Survivin和Bax的表达情况,寻找子宫内膜癌新的有效的检测分子,为子宫内膜癌的早期发现和诊断、监测复发和转移、判断疗效和预后提供指标。方法 选取2011年2月~2013年9月来我院接受手术治疗的子宫内膜癌患者80例,同时选取52例正常子宫内膜组织和39例子宫内膜不典型增生组织。结果 Smac、Bcl-2、Survivin和Bax在三种组织中阳性表达差异显著（P〈0.05）。Smac与Bcl-2、Survivin在子宫内膜癌组织中阳性表达均呈负相关（rBcl-2=-0.398、rSurvivin=-0.335,P〈0.05）,而与Bax呈正相关（rBax=0.458,P〈0.05）;而Bcl-2与Survivin阳性表达呈正相关（rSurvivin=0.581,P〈0.05）,而与Bax呈负相关（rBax=-0.477,P〈0.05）;Bax与Survivin阳性表达呈负相关（r=-0.511,P〈0.05）。结论 对疑似子宫内膜癌患者进行Smac、Bcl-2、Survivin和Bax表达的检测以进行进一步确诊,提高临床确诊率,为今后的临床治疗方案提供新的治疗靶点和思路。

老年下肢动脉硬化闭塞症介入术后感染PD-1和sCD14与Smac水平

目的探究老年下肢动脉硬化闭塞症(ASO)介入术后感染患者外周血程序性死亡受体1(PD-1)、可溶性CD14(sCD14)、第二线粒体源性半胱天冬酶激活剂(Smac)水平.方法选取2017年9月-2020年9月于海南医学院第一附属医院介入血管外科进行介入手术的老年ASO术后感染患者64例设为研究组,另选同期收治的ASO术后未并发感染老年患者60例设为对照组;按照抗感染治疗效果,将感染患者分为有效组(n=46)和无效组(n=18),分析导致术后感染的病原菌及危险因素,检测各组患者外周血PD-1、sCD14和Smac水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析外周血PD-1、sCD14和Smac水平对抗感染疗效的评估价值.结果感染患者创口分泌物中共培养分离病原菌98株,其中革兰阳性菌75株占76.53%,以金黄色葡萄球菌为主,革兰阴性菌23株占23.47%,以大肠埃希菌为主;糖尿病史、留置导尿管、预防性使用抗菌药物、住院时间是老年ASO介入术后感染的危险因素(P<0.05);与对照组相比,研究组患者外周血PD-1和sCD14水平升高,Smac水平降低(P<0.05);与无效组相比,有效组患者外周血PD-1和sCD14水平下降,Smac水平升高(P<0.05);ROC曲线结果显示,当PD-1≤2.82%、sCD14≤62.58 ng/ml、Smac>0.41μg/ml时预测抗感染疗效的效能最佳(P<0.05).结论革兰阳性菌是老年ASO介入术后感染的主要致病菌,老年ASO介入术后感染与糖尿病史、留置导尿管、预防性使用抗菌药物、住院时间有关.老年ASO患者外周血中PD-1、sCD14水平升高,Smac水平降低,经抗感染治疗后,PD-1、sCD14水平下降,Smac水平升高,监测外周血PD-1、sCD14和Smac水平可有效评估临床抗感染治疗效果.

辛伐他汀通过上调Smac表达诱导高糖培养下肾小球系膜细胞的凋亡

目的探讨辛伐他汀诱导高糖培养下肾小球系膜细胞凋亡是否与上调第二线粒体源半胱天冬氨酸蛋白酶激活物(Smac)表达有关。方法用不同浓度辛伐他汀刺激高糖培养下的系膜细胞,采用Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡形态,碘化丙啶染色(PI)、流式细胞术(FCM)定性及定量检测细胞凋亡率,免疫荧光法观察Smac蛋白表达。结果高糖+辛伐他汀组与高糖组相比,12、24、48 h细胞凋亡荧光强度、细胞凋亡率、免疫荧光示Smac蛋白表达均明显增加(P<0.05),且均呈时间、浓度依赖性;各组相应时间段内Smac荧光强度与细胞凋亡荧光强度间呈正相关(r=0.9353,P<0.05)。结论高糖环境下辛伐他汀能通过上调Smac蛋白表达抑制系膜细胞增殖、诱导系膜细胞凋亡;其作用呈浓度和时间依赖性。