电针对完全性脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠脊髓组织中Caspase-9、细胞色素C及凋亡蛋白酶激活因子-1表达的影响

目的观察电针对完全性脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠膀胱功能及脊髓组织中Caspase-9、细胞色素C(Cyt-C)及凋亡蛋白酶激活因子-1(Apaf-1)表达的影响。方法雌性Sprague-Dawley大鼠60只,随机抽取36只,采用改良T_(10)脊髓横断法制作完全性脊髓损伤后神经源性膀胱模型,取24只成功模型分为模型组和电针组各12只,其余未造模大鼠24只随机分为假手术组和空白组各12只。于造模后第19天取次髎、中极、三阴交、大椎行电针,连续7 d后行尿流动力学检测,TUNEL法测定细胞凋亡率,Western blotting测定脊髓组织中Caspase-9、Cyt-C和Apaf-1蛋白的表达情况。结果与空白组和假手术组比较,模型组和电针组膀胱最大容量及膀胱顺应性均明显降低(P<0.01),膀胱基础压力和漏尿点压力增加(P<0.05);脊髓组织TUNEL阳性率显著升高(P<0.001);脊髓组织中Caspase-9、Cyt-C和Apaf-1蛋白表达升高(P<0.05)。与模型组比较,电针组的膀胱最大容量及膀胱顺应性明显增加(P<0.01),膀胱基础压力和漏尿点压力降低(P<0.05);脊髓组织TUNEL阳性率明显降低(P<0.01);脊髓组织中Caspase-9、Cyt-C及Apaf-1蛋白表达量降低(P<0.05)。结论电针次髎、中极、三阴交、大椎可改善完全性脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠膀胱功能,其作用机制可能与脊髓组织中Caspase-9、Cyt-C和Apaf-1的表达下调,凋亡减少有关。

X连锁凋亡抑制蛋白和线粒体第二激活因子在锰诱导大鼠生精细胞凋亡蛋白酶表达中的调节作用

目的:研究氯化锰导致的大鼠生精细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)及凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)表达中X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和线粒体第二激活因子(Smac)的调节机制,探讨锰导致的雄性不育机制。方法:雄性SD大鼠随机分为对照组、低剂量(15 mg/kg MnCl_2)和高剂量(30 mg/kg MnCl_2)组,腹腔注射MnCl_2 4周和6周,免疫组织化学检测生精细胞caspase-9、Apaf-1、XIAP和Smac表达。结果:与对照组相比较,各组生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高,XIAP表达降低。同时间的高剂量组与低剂量组比较,同剂量的6周组与4周组比较,生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高,XIAP表达降低。各组caspase-9与Apaf-1表达呈正相关,XIAP与Smac表达呈负相关。结论:锰可促进生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达,抑制XIAP表达,导致细胞凋亡,产生雄性生殖毒性效应。

抗炎症因子与类风湿性关节炎关系的研究进展

类风湿性关节炎(RA)是一种慢性炎症性疾病,疾病晚期可出现关节畸形和功能障碍,严重危害人类健康。抗炎症因子(AIC)作为一种保护性因子,和促炎症因子(PIC)共同在RA的发病和进展中发挥重要作用。RA中AIC水平降低,PIC水平升高,全身和局部炎症反应加重,关节软骨和软骨下骨破坏加速,促进RA进一步进展的理念已经被广大学者接受,以AIC为靶点的新一代RA生物学治疗方兴未艾。因此深入了解各种AIC在RA发病中的作用具有重要意义。本文从AIC与RA的关系和作用机制入手,对该领域的研究进展进行综述,为RA的临床诊治提供新的思路。

X-连锁凋亡蛋白通路调控及在脑缺血中的表达

X连锁凋亡蛋白(XIAP)是凋亡抑制蛋白家族(IAPs)中抗凋亡作用最强的成员,通过抑制始动或效应半胱天冬酶(Caspases)活性发挥抗凋亡作用。但受到第二个线粒体源性Caspase激活剂/低等电点的IAP直接结合蛋白(Smac/DIA-BLO)、XIAP相关因子1(XAF1)和需求高温的丝胺酸蛋白酶A2(HtrA2)等相关因子的负性调控。脑缺血后XIAP通路基因表达增高,参与了脑缺血后细胞凋亡的动态发展。

尖锐湿疣患者皮损组织中Smac、BIRC5的表达及意义

目的 探讨尖锐湿疣(CA)组织中第二个线粒体衍生半胱天冬氨酸蛋白酶激活剂(Smac)和凋亡抑制因子5(BIRC5)的表达及其临床意义。方法 选取100例CA患者作为研究对象并设置为研究组,另选择同时期103例非皮肤病行手术切除后留取切缘处正常皮肤组织的患者为对照组;采用免疫组织化学法检测组织中Smac、BIRC5的表达情况;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织中Smac mRNA、BIRC5 mRNA表达水平;采用Spearman相关性分析Smac、BIRC5的相关性;使用ROC曲线分析Smac、BIRC5对CA的诊断价值;多因素logistic回归分析影响CA发生的危险因素。结果 研究组CA组织中BIRC5阳性率、相对表达量高于对照组,Smac阳性率、相对表达量低于对照组(P<0.05);CA组织中Smac、BIRC5表达与病程、HPV感染类型、复发次数密切相关(P<0.05);CA组织中Smac、BIRC5表达呈负相关(P<0.05);ROC曲线分析结果表明,与Smac、BIRC5单独相比,两者联合诊断CA发生的AUC更高(z=3.886、3.564,P均=0.000);多因素logistic回归分析显示,Smac阴性表达、BIRC5阳性表达是影响CA发生的危险因素(P<0.05)。结论 Smac、BIRC5在CA组织中表达异常,检测两者水平对CA的早期防治具有重要意义。

Caspase-9与Apaf-1在锰中毒大鼠生精细胞表达及XIAP与Smac的调控作用

目的研究氯化锰导致的大鼠生精细胞caspase-9及Apaf-1表达中XIAP和Smac的调节机制,探讨锰导致的雄性不育机制。方法雄性SD大鼠随机分为对照组,低剂量(15 mg/kg Mn Cl2)和高剂量(30 mg/kg Mn Cl2)组,腹腔注射MnCl24周和6周,免疫组织化学检测生精细胞caspase-9、Apaf-1、XIAP和Smac表达。结果各组生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高,XIAP表达降低;同时间的高剂量组与低剂量组比较,同剂量的6周组与4周组比较,生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高,XIAP表达降低;各组caspase-9与Apaf-1表达正相关,XIAP与Smac表达成负相关。结论锰可促进生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达,抑制XIAP表达,导致细胞凋亡,产生雄性生殖毒性效应。

辛伐他汀通过上调Smac表达诱导高糖培养下肾小球系膜细胞的凋亡

目的探讨辛伐他汀诱导高糖培养下肾小球系膜细胞凋亡是否与上调第二线粒体源半胱天冬氨酸蛋白酶激活物(Smac)表达有关。方法用不同浓度辛伐他汀刺激高糖培养下的系膜细胞,采用Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡形态,碘化丙啶染色(PI)、流式细胞术(FCM)定性及定量检测细胞凋亡率,免疫荧光法观察Smac蛋白表达。结果高糖+辛伐他汀组与高糖组相比,12、24、48 h细胞凋亡荧光强度、细胞凋亡率、免疫荧光示Smac蛋白表达均明显增加(P<0.05),且均呈时间、浓度依赖性;各组相应时间段内Smac荧光强度与细胞凋亡荧光强度间呈正相关(r=0.9353,P<0.05)。结论高糖环境下辛伐他汀能通过上调Smac蛋白表达抑制系膜细胞增殖、诱导系膜细胞凋亡;其作用呈浓度和时间依赖性。

子宫内膜癌组织中Smac、Bcl-2、Survivin和Bax表达的临床意义

目的 通过免疫组织化学SP法检测子宫内膜癌细胞中Smac、Bcl-2、Survivin和Bax的表达情况,寻找子宫内膜癌新的有效的检测分子,为子宫内膜癌的早期发现和诊断、监测复发和转移、判断疗效和预后提供指标。方法 选取2011年2月~2013年9月来我院接受手术治疗的子宫内膜癌患者80例,同时选取52例正常子宫内膜组织和39例子宫内膜不典型增生组织。结果 Smac、Bcl-2、Survivin和Bax在三种组织中阳性表达差异显著（P〈0.05）。Smac与Bcl-2、Survivin在子宫内膜癌组织中阳性表达均呈负相关（rBcl-2=-0.398、rSurvivin=-0.335,P〈0.05）,而与Bax呈正相关（rBax=0.458,P〈0.05）;而Bcl-2与Survivin阳性表达呈正相关（rSurvivin=0.581,P〈0.05）,而与Bax呈负相关（rBax=-0.477,P〈0.05）;Bax与Survivin阳性表达呈负相关（r=-0.511,P〈0.05）。结论 对疑似子宫内膜癌患者进行Smac、Bcl-2、Survivin和Bax表达的检测以进行进一步确诊,提高临床确诊率,为今后的临床治疗方案提供新的治疗靶点和思路。

间歇低氧对大鼠认知功能的影响及其分子机制的研究

目的探讨间歇低氧对大鼠认知功能的影响及其分子机制。方法选用雄性Wistar大鼠64只,体质量(180±10)g,按随机数字表法分为正常对照组(UC组)和5%间歇低氧组(5%IH组),每组32只;每组按取材时间不同随机分为7、14、21、28 d四个亚组,每个亚组8只。UC组大鼠置于实验箱内持续注入空气,氧浓度为21%;5%IH组大鼠置于实验箱内,循环注入氮气及空气,使氧浓度在5%~21%之间变化,每120 s为1个周期。2组大鼠每日实验8 h,其余16 h常规饲养,分别持续进行7、14、21、28 d。各亚组实验后应用Morris水迷宫检测两组大鼠学习记忆功能。完成Morris水迷宫实验后处死并取出大鼠海马组织,制备切片标本:采用透射电镜观察大鼠海马CA1区神经细胞超微结构的改变;采用免疫组织化学法检测海马CA1区神经细胞凋亡蛋白酶激活因子-1(Apaf-1)、第二个线粒体衍生的caspase激活因子(Smac)蛋白的表达情况;采用Tunel法检测海马CA1区神经细胞凋亡情况,并计算神经细胞凋亡指数。采用Pearson检验,分析UC组不同时间点Apaf-1及Smac蛋白的表达与神经细胞凋亡指数的相关性。结果(1)Morris水迷宫实验:UC组大鼠间歇性低氧7、14、21、28 d逃避潜伏期分别为(20.83±3.25)、(22.17±2.79)、(20.50±4.51)、(21.17±4.17)s,跨越目标象限时间分别为(52.17±4.17)、(52.50±2.74)、(51.50±2.43)、(52.00±4.78)s,各时间点差异均无统计学意义(P值均>0.05);5%IH组间歇性低氧7、14、21、28 d逃避潜伏期分别为(33.17±2.14)、(44.33±3.45)、(52.17±3.87)、(64.33±2.73)s,跨越目标象限时间分别为(44.00±3.03)、(34.50±3.94)、(27.83±3.01)、(20.83±1.94)s,随间歇低氧时间的增加,逃避潜伏期延长,跨越目标象限时间明显缩短,差异均有统计学意义(F=106.335、61.772,P值均<0.01)。两组间比较:5%IH组不同时间点逃避潜伏期时间均大于UC组,跨越目标象限时间均小于UC组,差异均有统计学意义(P值均<0.01)。(2)透射电镜观察神经细胞超微结构:UC组大鼠海马CA1区神经元核较大,核膜结构完整,呈椭圆形或圆形,染色质分布均匀呈细颗粒状,细胞器丰富,形态结构正常;5%IH组从7 d开始出现神经元水肿,细胞核变形,核膜模糊,核仁逐渐消失,细胞器肿胀溶解等,随着时间的延长,改变程度越重。(3)Apaf-1、Smac蛋白的相对表达量:UC组各个时间点海马CAl区神经细胞Apaf-1、Smac蛋白的相对表达量差异均无统计学意义(P值均>0.05);而5%IH组各个时间点Apaf-1、Smac蛋白的相对表达量均随间歇低氧时间的延长而升高,差异均有统计学意义(F=25.328、42.923,P值均<0.01)。两组间比较:5%IH组各个时间点Apaf-1、Smac蛋白的相对表达量均明显高于UC组,差异均有统计学意义(P值均<0.01)。(4)神经细胞凋亡情况:UC组各个时间点海马CAl区神经细胞神经细胞凋亡少,AI差异无统计学意义(P>0.05);5%IH组随间歇低氧时间的延长而升高,AI差异有统计学意义(F=25.799,P<0.01)。两组间比较:各个时间点海马CAl区神经细胞凋亡明显高于UC组,AI差异均有统计学意义(P值均<0.05)。(5)Pearson检验显示:5%IH组各个时间点大鼠海马CA1区Apaf-1、Smac蛋白的表达与凋亡指数均呈正相关(rApaf-1=0.735、0.736、0.685、0.747,rSmac=0.735、0.734、0.679、0.751,P值均<0.05)。结论间歇低氧可导致大鼠认知功能障碍,这可能与其引起大鼠海马CA1区神经细胞超微结构的改变,诱导凋亡相关蛋白Apaf-1、Smac的表达,进而造成神经元凋亡有关。