磷酸酶张力蛋白同源物基因/磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路在肝纤维化发生及治疗中的作用研究进展

肝纤维化是最常见的肝脏病理变化,是慢性肝损伤发展为肝硬化或肝癌的重要过渡阶段,有效控制肝纤维化是防治晚期肝病的主要途径。第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因/磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PTEN/PI3K/AKT)信号通路能够有效调控肝纤维化进程,是肝纤维化发生的重要分子机制,也是防治肝纤维化的重要调控靶点。本文对PTEN/PI3K/AKT信号通路在肝纤维化中的作用机制及以该通路为靶点的抗肝纤维化药物研究进行综述。

微小RNA-29a通过10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物/磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路调控乳腺癌细胞增殖迁移的机制

目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-29a通过第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因/磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PTEN/PI3K/Akt)信号通路调控乳腺癌细胞增殖迁移的机制。方法 应用Lipofectamine^TM3000将miR-29a inhibitor、miR-29a NC转染到MCF-7乳腺癌细胞,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-29a表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,Transwell法检测细胞迁移能力,Western blot检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、细胞周期蛋白(Cyclin) D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、PTEN、PI3K、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达。结果 miR-29a inhibitor组(0.53±0.05)miR-29a表达量较miR-29a NC组(2.74±0.27)上调(P<0.05)。miR-29a inhibitor组(0.35±0.02)细胞活力较miR-29a NC组(0.58±0.05)降低(P<0.05)。miR-29a inhibitor组细胞早期凋亡率(15.38±1.54)%、晚期凋亡率(23.69±2.37)%较miR-29a NC组[(2.53±0.23)%、(3.17±0.31)%]提高(P<0.05)。miR-29a inhibitor组细胞周期G1期较miR-29a NC组延长(P<0.05)。miR-29a inhibitor组(42.87±4.88)细胞迁移数目较miR-29a NC组(136.49±10.37)降低(P<0.05)。miR-29a inhibitor组中bcl-2、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、PI3K、p-Akt表达量较miR-29a NC组下调(P<0.05),PTEN表达量较miR-29a NC组上调(P<0.05)。结论 下调miR-29a表达能通过抑制PTEN/PI3K/Akt信号通路抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖与迁移。

微小RNA-486-5p通过调控缺氧诱导因子-1α/人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因/磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶A信号通路影响结肠癌的发生发展

目的探讨微小RNA-486-5p(miR-486-5p)通过调控缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶A(Akt)信号通路影响结肠癌的发生发展。方法脂质体Lipofectamine™3000将miR-486-5p模拟物NC(对照),miR-486-5p模拟物转入SW480结肠癌细胞中,细胞购自上海细胞库。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-486-5p表达,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,Transwell实验检测细胞侵袭,蛋白质印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2基因(bcl-2)、bcl-2相关蛋白X(bax)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、p27、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、HIF-1α、PTEN、PI3K及磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达。组间比较采用t检验进行分析。结果miR-486-5p模拟物组细胞miR-486-5p表达量(1.87±0.09比1.00±0.10,t=5.589,P<0.05)、细胞早期凋亡率[(15.48±0.97)%比(1.47±0.09)%,t=4.327,P<0.05],细胞晚期凋亡率[(27.46±1.54)%比(3.24±0.13)%,t=5.652,P<0.05],细胞周期G1期[(60.32±4.43)%比(24.08±1.96)%,t=4.578,P<0.05]、bax(0.96±0.08比0.18±0.01,t=5.373,P<0.05)、p27(0.86±0.06比0.32±0.01,t=5.762,P<0.05)及PTEN(1.64±0.09比0.46±0.02,t=4.874,P<0.05)蛋白表达量高于对照组,miR-486-5p模拟物组细胞活力(0.33±0.01比0.54±0.03,t=4.582,P<0.05)、细胞侵袭数目[(37.59±2.64)个比(179.93±6.96)个,t=4.147,P<0.05],bcl-2(0.21±0.01比1.04±0.09,t=5.287,P<0.05)、Cyclin D1(0.14±0.00比0.85±0.07,t=4.642,P<0.05)、MMP-9(0.28±0.02比0.84±0.06,t=4.643,P<0.05)、HIF-1α(0.45±0.03比1.53±0.09,t=5.562,P<0.05)、PI3K(0.38±0.01比1.78±0.10,t=5.468,P<0.05)及p-Akt(0.38±0.02比1.10±0.08,t=4.129,P<0.05)蛋白表达量低于对照组。结论上调miR-486-5p表达量可诱导结肠癌细胞SW480凋亡、抑制细胞侵袭、使细胞周期发生阻滞,可能与抑制HIF-1α/PTEN/PI3K/Akt信号通路有关。

肿瘤抑制基因第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源等位基因在神经元回路形成与维持中的作用

肿瘤抑制基因第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源等位基因(PTEN)在多种类型细胞中通过抑制磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)信号通路在细胞增殖、移行和凋亡调控中发挥重要作用。大量体内、体外实验表明,PTEN/PI3K信号下调与神经元形态改变存在直接关系,并与许多神经精神疾病的发病机制相关。现就PTEN在大脑发育和神经元回路形成与维持中的作用进行综述。

姜黄素对结直肠癌小鼠肿瘤生长的抑制作用及其PTEN/PI3K/Akt信号通路机制

目的:探讨姜黄素对结直肠癌小鼠肿瘤生长及第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白的同源基因/磷酯酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PTEN/PI3K/Akt)信号通路的影响,阐明姜黄素对结直肠癌的可能作用机制。方法:60只小鼠随机分为模型组、低剂量姜黄素组、中剂量姜黄素组和高剂量姜黄素组,每组15只。接种结直肠癌LOVO细胞建立小鼠结直肠癌模型,低、中和高剂量姜黄素组分别给予25、50和100 mg·kg^-1姜黄素灌胃,共4周。末次灌胃后24 h,检测各组小鼠肿瘤体积、肿瘤质量和抑瘤率,免疫组织化学染色检测各组小鼠肿瘤组织中增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达,并计算细胞增殖指数(PI),HE染色观察各组小鼠肿瘤组织病理形态表现,Western blotting法检测各组小鼠肿瘤组织中人髓细胞增生原癌基因c-Myc、半胱氨酸蛋白酶3(caspase3)、PTEN、Akt和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达水平。结果:各组小鼠肿瘤体积、肿瘤质量、抑瘤率、肿瘤组织PI值及肿瘤组织中c-Myc、caspase3、PTEN和p-Akt蛋白表达水平比较差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,各剂量姜黄素组小鼠肿瘤体积和肿瘤质量均明显降低(P<0.05),抑瘤率增加(P<0.05),肿瘤组织PI值降低(P<0.05),肿瘤组织中c-Myc和p-Akt蛋白表达水平降低(P<0.05),caspase3和PTEN蛋白表达水平升高(P<0.05)。免疫组织化学染色,与模型组比较,各剂量姜黄素组小鼠肿瘤组织中PCNA阳性细胞数明显减少。HE染色,模型组小鼠肿瘤组织中细胞排列紊乱,核质比例增加,核染色深;与模型组比较,各剂量姜黄素组小鼠肿瘤组织中细胞排列相对整齐,核质比例下降,核染色浅。姜黄素对结直肠癌肿瘤体积、肿瘤质量、抑瘤率、肿瘤组织PI值及肿瘤组织中c-Myc、caspase3、PTEN和p-Akt蛋白表达的影响呈剂量依赖性,不同剂量姜黄素组间上述各指标比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:姜黄素可抑制结直肠癌小鼠肿瘤生长,其机制可能与姜黄素抑制PTEN/PI3K/Akt信号通路有关。

miR-489-3p靶向PTEN/PI3K/Akt信号通路对膀胱癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的探讨微小RNA(miR)-489-3p靶向第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对膀胱癌(BC)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法2021年1-7月于河北北方学院附属第一医院进行细胞实验,利用火山图从癌症基因组图谱(TCGA-BLCA)数据库筛选BC差异表达miRNA。以110例BC患者的癌组织及其癌旁组织和购买的人膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1及人BC细胞系5637、J82、T24为研究对象,采用实时荧光定量PCR测定miR-489-3p和PTEN mRNA的表达。根据miR-489-3p的相对表达量均值将BC患者分为低表达组(≤0.36)70例和高表达组(>0.36)40例,并分析miR-489-3p表达在BC患者不同临床病理特征中的变化。双荧光素酶实验验证miR-489-3p和PTEN的靶向关系。选择miR-489-3p表达最低的T24细胞进行转染实验,T24细胞随机分组为对照组、miR-NC(阴性对照)组、miR-489-3p mimics(模拟物)组、miR-489-3p mimics+pcDNA组、miR-489-3p mimics+pc-PTEN组。MTT和克隆形成实验、Transwell实验、流式细胞术分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡;Western-blot检测PTEN、PI3K、Akt蛋白表达。结果通过火山图筛选出BC组织中显著下调的miR-489-3p。BC癌组织中miR-489-3p表达低于癌旁组织,PTEN mRNA表达高于癌旁组织(t=186.168,510.107,P均<0.001);BC细胞系miR-489-3p表达低于SV-HUC-1细胞,PTEN mRNA表达高于SV-HUC-1细胞(F=883.826,807.220,P均<0.001)。miR-489-3p低表达组患者TNM分期T_(3~4)、有淋巴结转移、肿瘤低分化比例高于高表达组(P<0.05)。双荧光素酶实验显示,miR-489-3p靶向负调控PTEN表达。miR-489-3p mimics组凋亡率及PI3K、Akt蛋白表达水平高于miR-NC组,PTEN蛋白表达水平、OD值(24 h、48 h、72 h)、克隆数目和细胞侵袭数低于miR-NC组(P均<0.01);miR-489-3p mimics+pc-PTEN组凋亡率及PI3K、Akt蛋白表达水平低于miR-489-3p mimics组,PTEN蛋白表达水平、OD值(24 h、48 h、72 h)、克隆数目和细胞侵袭数高于miR-489-3p mimics组(P<0.01)。结论miR-489-3p可能通过靶向下调PTEN表达,激活PI3K/Akt信号通路,进而抑制BC细胞增殖、侵袭,促进凋亡。

PTEN/PI3K信号通路在大鼠心肌肥厚中的表达

目的：观察PTEN/PI3K信号通路在大鼠心肌组织中的表达,探讨该通路在心肌肥厚发生、发展中的作用.方法：皮下注射异丙肾上腺素（ISO）建立大鼠心肌肥厚模型,测定大鼠体质量、心质量、心肌细胞横径和横截面积;采用免疫组织化学方法检测大鼠心肌组织中肥大标志因子β-肌球蛋白（β-MHC）及PTEN/PI3K信号通路上PTEN、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、蛋白激酶B（PKB）、死亡相关因子（BAD）蛋白表达;利用计算机图像处理系统对各种蛋白进行定量分析.结果：模型组大鼠全心质量/体质量、左室质量/体质量、心肌细胞横径、心肌细胞截面积较对照组明显增加.模型组大鼠的心肌组织与对照组相比,β-MHC、PI3K与PKB表达水平均升高,PTEN和BAD表达水平明显降低.结论：PTEN在心肌肥厚中表达明显降低,起负性调节作用;PI3K/PKB信号通路激活,可能是导致心肌肥厚的机制之一,BAD可望成为生物学治疗靶点.

微小RNA-1269a靶向调控PTEN对肝癌细胞迁移、侵袭和PI3K/Akt信号通路的影响

目的探讨微小RNA-1269a(miR-1269a)对肝癌细胞侵袭、迁移和磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的影响及可能机制。方法采用Ualcan数据库分析肝癌组织中miR-1269a的水平;采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测人正常肝细胞HL-7702和人肝癌细胞(Huh-7、HCCLM6、Hep3B和SMMC-7721)的miR-1269a水平。将SMMC-7721细胞分为4组:空白对照组、阴性对照组、抑制物(Inhibitor)组(转染miR-1269a inhibitor)和Inhibitor+LY294002组(转染miR-1269a inhibitor+PI3K抑制剂LY294002),MTT法、划痕实验和Transwell小室实验检测细胞增殖活力、划痕愈合率和穿膜细胞数,Western blotting检测PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、Akt1和磷酸化Akt1(p-Akt1)水平,在线预测miR-1269a与靶基因第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白(PTEN)的潜在结合序列并经荧光素酶报告基因实验验证两者的靶向关系。结果369例原发性肝癌组织的miR-1269a水平高于49例正常肝组织(P<0.05)。肝癌细胞的miR-1269a水平均高于HL-7702细胞(P<0.05)。与空白对照组和阴性对照组相比,Inhibitor组的增殖活力减弱且p-PI3K和p-Akt1水平降低(P<0.05);空白对照组、阴性对照组、Inhibitor组和Inhibitor+LY294002组的划痕愈合率依次为(70.235±3.484)%、(75.269±6.245)%、(44.376±3.174)%和(21.812±0.968)%,穿膜细胞数依次为(192.453±10.324)、(201.288±5.873)、(129.197±8.485)和(47.839±9.037)个,Inhibitor组的划痕愈合率和穿膜细胞数均少于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。空白对照组和阴性对照组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05),而Inhibitor+LY294002组的上述指标均低于Inhibitor组(P<0.05)。PTEN野生型载体和miR-1269a模拟物共转染细胞的荧光素酶活性较PTEN突变型载体和miR-1269a模拟物共转染细胞降低(P<0.05)。结论miR-1269a在肝癌组织和细胞中高表达,且可能通过靶向PTEN来激活PI3K/Akt信号通路来促进肝癌细胞的迁移和侵袭,miR-1269a可能通过调控PI3K/Akt/PTEN轴来发挥促癌作用。

雷公藤内酯醇对类风湿性关节炎模型大鼠血管新生和PTEN/PI3K/AKT通路的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇对类风湿性关节炎大鼠血管新生和第10号染色体缺失的磷酸酯酶及张力蛋白同源物基因/磷酸肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PTEN/PI3K/AKT)通路的影响,阐明雷公藤内酯醇治疗类风湿性关节炎的可能机制。方法:将80只大鼠随机分为对照组、模型组、阳性药物组和治疗组,每组20只。采用Ⅱ型胶原(ColⅡ)诱导建立风湿性关节炎大鼠模型。阳性药物组大鼠给予双氯芬酸钠缓释片治疗,治疗组大鼠给予雷公藤内酯醇治疗。治疗后,检测各组大鼠体质量和足爪厚度,评估关节炎指数积分。HE染色检测各组大鼠关节滑膜组织病理形态表现,免疫组织化学染色测定关节滑膜组织中微血管密度(MVD)和血管内皮生长因子(VEGF)表达水平,ELISA法检测各组大鼠血清VEGF水平,Western blotting法检测各组大鼠滑膜组织中PTEN、PI3K、AKT和磷酸化-AKT(p-AKT)蛋白水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠体质量降低(P<0.05),足爪厚度升高(P<0.05),滑膜组织中MVD和VEGF表达水平升高(P<0.05),滑膜组织中PTEN蛋白表达水平降低(P<0.05),PI3K、AKT和p-AKT蛋白表达水平升高(P<0.05)。与模型组比较,阳性药物组和治疗组大鼠体质量升高(P<0.05),足爪厚度降低(P<0.05),滑膜组织中MVD和VEGF表达水平降低(P<0.05),滑膜组织中PTEN蛋白表达水平升高(P<0.05),PI3K、AKT和p-AKT蛋白表达水平降低(P<0.05)。与阳性药物组比较,治疗组大鼠滑膜组织中MVD和VEGF表达水平降低(P<0.05),滑膜组织中PTEN蛋白表达水平升高(P<0.05),PI3K、AKT和p-AKT蛋白表达水平降低(P<0.05)。类风湿性关节炎大鼠足爪厚度和关节炎指数与VEGF(r=0.564,r=0.492)及p-AKT(r=0.561,r=0.468)表达水平呈正相关关系(P<0.05),与PTEN(r=-0.437,r=-0.521)呈负相关关系(P<0.05);MVD与VEGF(r=0.587)、PI3K(r=0.567)、p-AKT(r=0.601)表达水平呈正相关关系(P<0.05),与PTEN水平(r=-0.502)呈负相关关系(P<0.05)。结论:雷公藤内酯醇可抑制类风湿性关节炎大鼠血管新生和PTEN/PI3K/AKT通路激活,从而发挥对类风湿性关节炎的治疗作用。

甲状腺髓样癌中PTEN/PI3K/AKT通路的变化及临床病理意义

目的研究甲状腺髓样癌中第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源蛋白(PTEN)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路的变化及临床病理意义。方法采用回顾性研究,选择2016年1月至2020年6月期间在中国人民解放军南部战区总医院接受手术切除的121例甲状腺髓样癌患者,收集甲状腺髓样癌组织及癌旁组织,检测PTEN的阳性表达率、mRNA表达水平及p-PI3K、p-AKT的蛋白表达水平,随访患者的无病生存情况。结果甲状腺髓样癌组织中PTEN的阳性率、mRNA表达水平为31.40%、0.72±0.14,均低于癌旁组织(65.29%、1.00±0.19),p-PI3K、p-AKT的表达水平分别为1.03±0.19、1.09±0.18,均高于癌旁组织(0.73±0.17、0.52±0.10),差异均有统计学意义(P<0.05)。甲状腺髓样癌中PTEN的mRNA表达水平与p-PI3K、p-AKT的表达水平呈负相关(r=-0.386、-0.427,P<0.05)。PTEN阳性表达的甲状腺髓样癌中p-PI3K、p-AKT的表达水平分别为0.64±0.13、0.41±0.08,低于PTEN阴性表达的甲状腺髓样癌(0.77±0.19、0.57±0.12),差异均有统计学意义(P<0.05)。TTNMⅢ~Ⅳ期甲状腺髓样癌中PTEN的阳性率、mRNA表达水平为23.53%、0.67±0.13,均低于Ⅰ~Ⅱ期甲状腺髓样癌(41.51%、0.79±0.16),差异均有统计学意义(P<0.05)。甲状腺髓样癌中PTEN阴性表达患者的累积无病生存率低于PTEN阳性表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论甲状腺髓样癌中PTEN表达降低与下游PI3K/AKT通路激活、TNM分期进展、预后不良有关。

miR-21通过PTEN/PI3K/AKT信号通路调控胶质瘤细胞的增殖

探讨miR-21对胶质瘤细胞U87中人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因/磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PTEN/PI3K/AKT)信号通路相关影响作用研究。脂质体Lipofectamine^(TM)2000将miR-21 inhibitor和miR-21 NC转入U87细胞中,48 h后,RT-PCR检测miR-21表达,MTT法检测细胞活力,Annexin V/PI流式双染检测细胞凋亡情况,Western blotting检测PTEN/PI3K/AKT激活情况及程序性细胞死亡因子4(PDCD4),Bax及Bcl-2的表达。与miR-21 NC组比较,miR-21 inhibitor组miR-21表达量显著降低,U87细胞活力下降,细胞凋亡率提高,PI3K、Bcl-2及p-AKT表达量下调,PTEN、PDCD4及Bax表达量上调,差异均具有统计学意义(p<0.01)。miR-21inhibitor能显著的抑制U87细胞的增殖,与PTEN/PI3K/AKT信号通路有关。

微小RNA-214靶向调控PTEN对成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化、矿化的影响及机制研究

目的:探讨微小RNA-214(miR-214)靶向调控第10号染色体丢失性磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)对成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化、矿化的影响及机制。方法:将成骨细胞MC3T3-E1分为miR-124 mimic组(转染miR-124 mimic)、miR-124 NC组(转染miR-124 NC)、pcDNA3.1-PTEN组(转染pcDNA3.1-PTEN)、miR-124 mimic+pcDNA3.1-PTEN组(转染miR-124 mimic+pcDNA3.1-PTEN)。采用在线生信预测miR-124和PTEN靶向结合位点,通过双荧光素酶报告基因进行验证。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞miR-124和PTEN mRNA表达。采用CCK-8法检测细胞增殖。采用碱性磷酸酶活性测定检测细胞分化能力。采用茜素红染色和骨钙素水平测定检测细胞的矿化。采用Werstern blot检测PTEN、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、骨桥蛋白(OPN)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)水平。结果:与miR-124 NC组比较,miR-124 mimic组野生型PTEN的荧光素酶活性降低(均P<0.05)。与miR-124 NC组比较,miR-124 mimic组miR-124及p-PI3K、p-AKT蛋白表达升高,PTEN mRNA和蛋白、细胞增殖率、碱性磷酸酶活性、ColⅠ和OPN蛋白、细胞矿化率和骨钙素水平降低,而pcDNA3.1-PTEN组则相反(均P<0.05)。与miR-124 mimic组比较,miR-124 mimic+pcDNA3.1-PTEN组p-PI3K、p-AKT蛋白表达降低,PTEN mRNA和蛋白、细胞增殖率、碱性磷酸酶活性、ColⅠ和OPN蛋白、细胞矿化率和骨钙素水平升高(均P<0.05)。结论:miR-214通过靶向下调PTEN蛋白表达激活PI3K/AKT信号通路,从而调控成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化。

miR-130a通过调控PTEN对缺血性脑卒中神经功能的影响

目的探究miR-130a通过调控磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)对缺血性脑卒中大鼠神经功能恢复的机制。方法60只雄性SD大鼠随机分为对照组(假手术处理,n=20)、模型组(手术建立缺血性脑卒中模型,n=20)和模拟转染组(手术建立缺血性脑卒中模型后,将miR-130a模拟转染注射到大鼠的侧脑室,n=20),通过神经损伤严重程度评分量表(mNSS)评估手术后第1、10和25天时的神经缺陷程度;用RT-PCR分析用miR-130a和PTEN表达;荧光素酶法测定野生型-PTEN和突变型-PTEN表达的荧光素酶活性,酶联免疫吸附实验检测各组大鼠脑组织白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;TUNEL染色检测脑组织神经元凋亡水平,蛋白印迹法分析磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(p-GSK3β)及磷酸化原癌基因丝苏氨酸蛋白激酶(p-c-Raf)表达。结果miR-130a模型组大鼠的mNSS评分,miR-130a的表达减轻神经细胞的功能损伤;与对照组比较,模型组的miR-130a mRNA、p-AKT、p-GSK3β及p-c-Raf表达降低,TUNEL阳性细胞数量和PTEN mRNA表达升高(P<0.05);与模型组和对照组比较,模拟转染组miR-130a mRNAp-AKT、p-GSK3β及p-c-Raf表达升高,TUNEL阳性细胞数量和PTEN mRNA表达降低(P<0.05);与对照组比较,模型组IL-10含量降低、IL-6和TNF-α含量升高(P<0.05);与模型组比较,模拟转染组IL-10含量升高、IL-6和TNF-α含量降低(P<0.05);与模拟对照组比较,仅miR-130a模拟组抑制了野生型-PTEN的相对荧光素酶活性(P<0.05)。结论m iR-130a可能通过影响PI3K/AKT轴和PTEN减轻缺血性卒中引起的神经功能缺损。

巴戟天多糖调控精索静脉曲张大鼠睾丸修复的作用机制研究

目的:探讨巴戟天多糖(MOP)对精索静脉曲张型(VC)大鼠睾丸的保护作用。方法:使用左肾静脉缩窄法制备VC模型,将60只大鼠按简单随机法分为空白对照组、模型组、VC组、VC+100 mg/kg巴戟天多糖组、VC+200 mg/kg巴戟天多糖组、VC+300 mg/kg巴戟天多糖组。通过GeneCards数据库筛选VC睾丸修复相关基因;酶联免疫吸附试验法检测促性腺激素释放激素(GnRH)、睾酮(T)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)水平;检测左侧睾丸相关指标及活性氧(ROS)含量;TUNEL检测细胞凋亡;蛋白质免疫印迹检测磷酸酯酶与人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因蛋白(PTEN)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)蛋白表达。结果:相较于模型组,VC组睾丸间质面积、细胞凋亡率、ROS、GnRH、LH、FSH及PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达显著升高,睾丸与附睾系数、曲精小管直径、附睾精子数、T及PTEN蛋白表达显著降低(P<0.05);相较于VC组,VC+100 mg/kg组睾丸间质面积、细胞凋亡率、ROS、FSH及PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达显著降低,睾丸与附睾系数、曲精小管直径、附睾精子数、T及PTEN蛋白表达显著升高(P<0.05);相较于VC组,VC+200 mg/kg组、VC+300 mg/kg组上述指标结果均相反(P<0.05)。结论:MOP可能通过调控PTEN/PI3K/AKT通路来修复VC大鼠睾丸。

PTEN与自闭症谱系障碍的研究进展

自闭症谱系障碍(autism spectrum disorder,ASD)是影响儿童精神健康最主要的一类神经发育障碍疾病,但致病机制尚不明确。人第10号染色体缺失并与张力蛋白同源的磷酸酶(phosphatase and tensin homolog on chromosome ten,PTEN),作为磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)信号通路重要的负调控因子,广泛参与到细胞生长、增殖和凋亡等生长发育的关键过程中。临床研究显示,部分ASD患者携带PTEN基因突变。PTEN基因突变引起PI3K通路过度激活,造成神经元形态和突触可塑性变化,是引起ASD的主要原因。因此,探索PTEN与ASD之间的关系,对揭示ASD发病机制、探索治疗方案具有积极的意义。本文对近年来PTEN突变在ASD患者和动物模型中的致病机制研究进行综述,提示PTEN-PI3K/AKT信号通路可能作为ASD重要的基因筛选位点和药物作用靶点。

PTEN在癌症中的研究进展

第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)是维持正常细胞生存所必需的肿瘤抑制因子,具有磷酸酯酶活性。PTEN通过调节酪氨酸激酶受体(RTK)/磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB又称Akt)通路调控细胞增殖、细胞凋亡、细胞迁移和侵袭等过程,进而抑制肿瘤的发生发展。PTEN蛋白具有区域特异性功能,可在细胞核和细胞质之间转移。PTEN编码的蛋白的活性受到许多非基因机制的调控,如转录调控、转录后调控、翻译后调控等。人类多种癌症中发现,PTEN的失调可导致其抑癌功能减弱,对于癌症研究有重要意义。PTEN作为PI3K/Akt通路的负调控因子,其缺失使PI3K/Akt通路过度活化,促进肿瘤的发生发展。

吡格列酮对高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化的影响及机制研究

目的:探讨吡格列酮(PIO)对高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化(EMT)的影响及可能机制,为防治糖尿病肾病提供理论依据及新靶点。方法:将大鼠肾小管细胞NRK-52E随机分为对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)、PIO干预组(30 mmol/L葡萄糖+5.0μmol/L PIO)、GW9662干预组(30 mmol/L葡萄糖+5.0μmol/L PIO+5.0μmol/L特异性拮抗剂GW9662)。前3组细胞分别在培养6、12、24、48 h时进行动态检测,GW9662干预组细胞在培养48 h时进行检测。采用Realtime PCR法检测细胞中第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(PTEN)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)mRNA的表达水平;采用Western blotting法检测细胞中PTEN、PPARγ、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮钙黏素(E-cadherin)的表达以及磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路的变化。结果:随培养时间的延长,与正常组比较,高糖组细胞中PPARγ、PTEN mRNA及蛋白(除PPARγ6 h外)表达水平均显著降低,α-SMA、p-AKT^(Thr308)蛋白表达水平均显著升高,E-cadherin蛋白表达水平显著降低(P<0.05),且呈时间依赖趋势;与高糖组比较,PIO组细胞中PPARγ(除6 h时的蛋白表达外)、PTEN的mRNA及蛋白表达水平均显著升高,α-SMA、p-AKT^(Thr308)(除6 h外)蛋白表达水平均显著降低,E-cadherin蛋白表达水平显著增高(P<0.05),且呈时间依赖趋势。与高糖组比较,GW9662干预组细胞PTEN、PPARγmRNA及蛋白表达水平,α-SMA、E-cadherin、p-AKT^(Thr308)蛋白表达水平的差异均无统计学意义,PIO的作用效应被PPARγ拮抗剂GW9662阻断。结论:在高糖条件下PIO可能是通过激活PPARγ而实现对PTEN表达的调控,使PI3K/AKT信号通路受到抑制,进而抑制肾小管上皮细胞EMT的发生。

lncRNA-CCAT2对宫颈癌CaSki细胞凋亡的影响及其机制

目的:研究长链非编码RNA(lncRNA)-结肠癌相关转录本2(CCAT2)对宫颈癌细胞凋亡的作用及其机制。方法:将人宫颈癌CaSki细胞分为对照组、CCAT2过表达组、CCAT2干扰组、过表达NC组和干扰NC组。构建CCAT2过表达载体和干扰载体,分别转染CCAT过表达组和CCAT2干扰组宫颈癌CaSki细胞。qRT-PCR法检测各组宫颈癌CaSki细胞中CCAT2 mRNA表达水平,MTT法检测各组宫颈癌CaSki细胞增殖率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,qRT-PCR法检测各组宫颈癌CaSki细胞中第十号染色体缺失的磷酸酶与张力蛋白同源基因(PTEN)mRNA表达水平,Western blotting法检测各组宫颈癌CaSki细胞中PTEN、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平。结果:与对照组比较,CCAT2过表达组宫颈癌CaSki细胞增殖率和细胞中CCAT2 mRNA及Bcl-2、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平明显升高(P<0.05);细胞凋亡率和细胞中Bax蛋白、PTEN mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。与对照组比较,CCAT2干扰组宫颈癌CaSki细胞增殖率和细胞中CCAT2 mRNA及Bcl-2、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平明显降低(P<0.05);细胞凋亡率和细胞中Bax蛋白、PTEN mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与对照组比较,过表达NC组和干扰NC组细胞增殖率、凋亡率和细胞中CCAT2 mRNA及PTEN、Bcl-2、Bax、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:lncRNA-CCAT2可抑制人宫颈癌细胞凋亡,其机制可能与PTEN/PI3K/AKT通路有关联。

基于PTEN/PI3K/AKT通路探讨miR-29a对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响

目的基于第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因/磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PTEN/PI3K/AKT)通路探讨微小RNA-29a(miR-29a)对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响。方法体外培养人卵巢癌细胞A2780细胞,分为对照组(不转染)、siRNA NC组(转染nonsense siRNA)、miR-29a siRNA组(转染miR-29a siRNA)、mimic NC组(转染negative control-miR-29a)和miR-29a mimic组(转染miR-29a mimic)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组A2780细胞中miR-29a、PTEN mRNA表达情况;采用CCK-8法及显微镜检测各组A2780细胞增殖情况;流式细胞仪检测各组A2780细胞凋亡情况;蛋白印迹法(WB)检测各组A2780细胞中PTEN/PI3K/AKT通路相关蛋白表达情况;双荧光素酶报告基因实验验证miR-29a与PTEN的靶向作用关系。结果与对照组、siRNA NC组相比,miR-29a siRNA组A2780细胞中miR-29a表达水平、p-PI3K/PI3K及p-AKT/AKT蛋白表达水平、细胞OD值降低(P<0.05),PTEN mRNA及蛋白表达水平、细胞凋亡率升高(P<0.05);与对照组、mimic NC组相比,miR-29a mimic组A2780细胞中miR-29a水平、p-PI3K/PI3K及p-AKT/AKT蛋白水平、细胞OD值升高(P<0.05),PTEN mRNA及蛋白水平、细胞凋亡率降低(P<0.05)。miR-29a与PTEN基因存在靶向关系。结论miR-29a对卵巢癌A2780细胞具有促进增殖、抑制凋亡的作用,可能是通过靶向下调PTEN表达并激活PI3K/AKT通路发挥作用的。

DJ-1在心肌缺血再灌注损伤中的研究进展

心肌缺血再灌注损伤(MIRI)是心肌梗死后冠状动脉再通治疗的常见并发症,严重影响急性心肌梗死患者心功能恢复,导致患者预后不良,同时也增加了患者主要不良心血管事件的发生率和病死率。帕金森病相关蛋白7(PARK7/DJ-1)作为一种多功能蛋白,参与氧化应激、细胞自噬与凋亡调控、线粒体稳态维持、信号转导等与MIRI密切相关的病理生理过程。人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因/磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号通路及核转录因子红系2相关因子2信号通路均在MIRI中发挥重要作用,而DJ-1作为上述通路的重要启动元件,可直接参与MIRI的发生、发展。MIRI病理机制复杂,进一步研究DJ-1在MIRI中的作用,可能为有效防治MIRI提供新的靶点和潜在研究方向。