磷酸酶张力蛋白同源物基因/磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路在肝纤维化发生及治疗中的作用研究进展

肝纤维化是最常见的肝脏病理变化,是慢性肝损伤发展为肝硬化或肝癌的重要过渡阶段,有效控制肝纤维化是防治晚期肝病的主要途径。第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因/磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PTEN/PI3K/AKT)信号通路能够有效调控肝纤维化进程,是肝纤维化发生的重要分子机制,也是防治肝纤维化的重要调控靶点。本文对PTEN/PI3K/AKT信号通路在肝纤维化中的作用机制及以该通路为靶点的抗肝纤维化药物研究进行综述。

微小RNA-486-5p通过调控缺氧诱导因子-1α/人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因/磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶A信号通路影响结肠癌的发生发展

目的探讨微小RNA-486-5p(miR-486-5p)通过调控缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶A(Akt)信号通路影响结肠癌的发生发展。方法脂质体Lipofectamine™3000将miR-486-5p模拟物NC(对照),miR-486-5p模拟物转入SW480结肠癌细胞中,细胞购自上海细胞库。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-486-5p表达,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,Transwell实验检测细胞侵袭,蛋白质印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2基因(bcl-2)、bcl-2相关蛋白X(bax)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、p27、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、HIF-1α、PTEN、PI3K及磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达。组间比较采用t检验进行分析。结果miR-486-5p模拟物组细胞miR-486-5p表达量(1.87±0.09比1.00±0.10,t=5.589,P<0.05)、细胞早期凋亡率[(15.48±0.97)%比(1.47±0.09)%,t=4.327,P<0.05],细胞晚期凋亡率[(27.46±1.54)%比(3.24±0.13)%,t=5.652,P<0.05],细胞周期G1期[(60.32±4.43)%比(24.08±1.96)%,t=4.578,P<0.05]、bax(0.96±0.08比0.18±0.01,t=5.373,P<0.05)、p27(0.86±0.06比0.32±0.01,t=5.762,P<0.05)及PTEN(1.64±0.09比0.46±0.02,t=4.874,P<0.05)蛋白表达量高于对照组,miR-486-5p模拟物组细胞活力(0.33±0.01比0.54±0.03,t=4.582,P<0.05)、细胞侵袭数目[(37.59±2.64)个比(179.93±6.96)个,t=4.147,P<0.05],bcl-2(0.21±0.01比1.04±0.09,t=5.287,P<0.05)、Cyclin D1(0.14±0.00比0.85±0.07,t=4.642,P<0.05)、MMP-9(0.28±0.02比0.84±0.06,t=4.643,P<0.05)、HIF-1α(0.45±0.03比1.53±0.09,t=5.562,P<0.05)、PI3K(0.38±0.01比1.78±0.10,t=5.468,P<0.05)及p-Akt(0.38±0.02比1.10±0.08,t=4.129,P<0.05)蛋白表达量低于对照组。结论上调miR-486-5p表达量可诱导结肠癌细胞SW480凋亡、抑制细胞侵袭、使细胞周期发生阻滞,可能与抑制HIF-1α/PTEN/PI3K/Akt信号通路有关。

微小RNA-29a通过10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物/磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路调控乳腺癌细胞增殖迁移的机制

目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-29a通过第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因/磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PTEN/PI3K/Akt)信号通路调控乳腺癌细胞增殖迁移的机制。方法 应用Lipofectamine^TM3000将miR-29a inhibitor、miR-29a NC转染到MCF-7乳腺癌细胞,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-29a表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,Transwell法检测细胞迁移能力,Western blot检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、细胞周期蛋白(Cyclin) D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、PTEN、PI3K、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达。结果 miR-29a inhibitor组(0.53±0.05)miR-29a表达量较miR-29a NC组(2.74±0.27)上调(P<0.05)。miR-29a inhibitor组(0.35±0.02)细胞活力较miR-29a NC组(0.58±0.05)降低(P<0.05)。miR-29a inhibitor组细胞早期凋亡率(15.38±1.54)%、晚期凋亡率(23.69±2.37)%较miR-29a NC组[(2.53±0.23)%、(3.17±0.31)%]提高(P<0.05)。miR-29a inhibitor组细胞周期G1期较miR-29a NC组延长(P<0.05)。miR-29a inhibitor组(42.87±4.88)细胞迁移数目较miR-29a NC组(136.49±10.37)降低(P<0.05)。miR-29a inhibitor组中bcl-2、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、PI3K、p-Akt表达量较miR-29a NC组下调(P<0.05),PTEN表达量较miR-29a NC组上调(P<0.05)。结论 下调miR-29a表达能通过抑制PTEN/PI3K/Akt信号通路抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖与迁移。

第10号染色体缺失的磷酸酶与张力蛋白的同源基因通过调控乳腺癌扩增性抗原1和磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路抑制胆管癌细胞QBC939的增殖能力

目的探讨第10号染色体缺失的磷酸酶与张力蛋白的同源基因（PTEN）对人胆管癌细胞QBC939增殖能力的抑制作用及其机制。方法利用4 μg PTEN质粒或小干扰RNA（siRNA）转染人胆管癌细胞株QBC939，转染72 h后，采用噻唑蓝（MTT）实验和Western blot检测上调或下调PTEN表达对QBC939细胞增殖能力、乳腺癌扩增性抗原1（AIB1）和磷酸肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路中重要的分子标志物表达的影响。结果人胆管癌细胞株QBC939经PTEN质粒转染72 h后，其吸光度（A）值（0.216±0.013）较对照组（0.243±0.002）降低（P＝0.026），表明增殖能力减弱，同时AIB1蛋白和PI3K/Akt信号通路中的磷酸化Akt（p-Akt）蛋白表达也明显减少。用siRNA下调PTEN表达，其A值（0.403±0.011）较对照组（0.490±0.033）降低（P＝0.013），表明增殖能力减弱，同时上调AIB1蛋白和p-Akt蛋白表达。

唾液腺腺样囊性癌组织中抑癌基因PTEN和蛋白激酶B的表达及其临床意义

目的:探讨唾液腺腺样囊性癌(SACC)组织中抑癌基因PTEN和蛋白激酶B(PKB)的表达及临床意义。方法:采用免疫组织化学方法(SP法)检测63例SACC组织中PTEN和PKB的表达,采用SPSS11.5软件进行χ2检验。结果:在带有癌旁非癌组织的38例中,唾液腺腺样囊性癌组织中PTEN表达阳性21例(55.26%),在癌旁非癌组织中PTEN表达阳性32例(84.21%),两者差异有显著性(P<0.05);唾液腺腺样囊性癌组织中PKB表达阳性31例(81.58%),在癌旁非癌组织中PKB表达阳性20例(52.63%),两者差异有显著性(P<0.01)。在临床诊断有转移的25例和无转移的38例病例中,PTEN表达阳性分别为9例(36%)和26例(68.42%),两者的差异有显著性(P<0.05);PKB表达阳性分别为24例(96%)和27例(71.05%),两者的差异有显著性(P<0.05)。而PTEN和PKB的表达在年龄、性别和病理分型上均无显著性差异。PTEN和PKB的表达呈负相关关系(P<0.01)。结论:SACC组织中PTEN的低表达和PKB的高表达与SACC的发生发展有一定关系,而且对SACC的转移也有一定影响。

肿瘤抑制基因第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源等位基因在神经元回路形成与维持中的作用

肿瘤抑制基因第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源等位基因(PTEN)在多种类型细胞中通过抑制磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)信号通路在细胞增殖、移行和凋亡调控中发挥重要作用。大量体内、体外实验表明,PTEN/PI3K信号下调与神经元形态改变存在直接关系,并与许多神经精神疾病的发病机制相关。现就PTEN在大脑发育和神经元回路形成与维持中的作用进行综述。

微小RNA-214靶向调控PTEN对成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化、矿化的影响及机制研究

目的:探讨微小RNA-214(miR-214)靶向调控第10号染色体丢失性磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)对成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化、矿化的影响及机制。方法:将成骨细胞MC3T3-E1分为miR-124 mimic组(转染miR-124 mimic)、miR-124 NC组(转染miR-124 NC)、pcDNA3.1-PTEN组(转染pcDNA3.1-PTEN)、miR-124 mimic+pcDNA3.1-PTEN组(转染miR-124 mimic+pcDNA3.1-PTEN)。采用在线生信预测miR-124和PTEN靶向结合位点,通过双荧光素酶报告基因进行验证。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞miR-124和PTEN mRNA表达。采用CCK-8法检测细胞增殖。采用碱性磷酸酶活性测定检测细胞分化能力。采用茜素红染色和骨钙素水平测定检测细胞的矿化。采用Werstern blot检测PTEN、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、骨桥蛋白(OPN)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)水平。结果:与miR-124 NC组比较,miR-124 mimic组野生型PTEN的荧光素酶活性降低(均P<0.05)。与miR-124 NC组比较,miR-124 mimic组miR-124及p-PI3K、p-AKT蛋白表达升高,PTEN mRNA和蛋白、细胞增殖率、碱性磷酸酶活性、ColⅠ和OPN蛋白、细胞矿化率和骨钙素水平降低,而pcDNA3.1-PTEN组则相反(均P<0.05)。与miR-124 mimic组比较,miR-124 mimic+pcDNA3.1-PTEN组p-PI3K、p-AKT蛋白表达降低,PTEN mRNA和蛋白、细胞增殖率、碱性磷酸酶活性、ColⅠ和OPN蛋白、细胞矿化率和骨钙素水平升高(均P<0.05)。结论:miR-214通过靶向下调PTEN蛋白表达激活PI3K/AKT信号通路,从而调控成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化。

miR-489-3p靶向PTEN/PI3K/Akt信号通路对膀胱癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的探讨微小RNA(miR)-489-3p靶向第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对膀胱癌(BC)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法2021年1-7月于河北北方学院附属第一医院进行细胞实验,利用火山图从癌症基因组图谱(TCGA-BLCA)数据库筛选BC差异表达miRNA。以110例BC患者的癌组织及其癌旁组织和购买的人膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1及人BC细胞系5637、J82、T24为研究对象,采用实时荧光定量PCR测定miR-489-3p和PTEN mRNA的表达。根据miR-489-3p的相对表达量均值将BC患者分为低表达组(≤0.36)70例和高表达组(>0.36)40例,并分析miR-489-3p表达在BC患者不同临床病理特征中的变化。双荧光素酶实验验证miR-489-3p和PTEN的靶向关系。选择miR-489-3p表达最低的T24细胞进行转染实验,T24细胞随机分组为对照组、miR-NC(阴性对照)组、miR-489-3p mimics(模拟物)组、miR-489-3p mimics+pcDNA组、miR-489-3p mimics+pc-PTEN组。MTT和克隆形成实验、Transwell实验、流式细胞术分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡;Western-blot检测PTEN、PI3K、Akt蛋白表达。结果通过火山图筛选出BC组织中显著下调的miR-489-3p。BC癌组织中miR-489-3p表达低于癌旁组织,PTEN mRNA表达高于癌旁组织(t=186.168,510.107,P均<0.001);BC细胞系miR-489-3p表达低于SV-HUC-1细胞,PTEN mRNA表达高于SV-HUC-1细胞(F=883.826,807.220,P均<0.001)。miR-489-3p低表达组患者TNM分期T_(3~4)、有淋巴结转移、肿瘤低分化比例高于高表达组(P<0.05)。双荧光素酶实验显示,miR-489-3p靶向负调控PTEN表达。miR-489-3p mimics组凋亡率及PI3K、Akt蛋白表达水平高于miR-NC组,PTEN蛋白表达水平、OD值(24 h、48 h、72 h)、克隆数目和细胞侵袭数低于miR-NC组(P均<0.01);miR-489-3p mimics+pc-PTEN组凋亡率及PI3K、Akt蛋白表达水平低于miR-489-3p mimics组,PTEN蛋白表达水平、OD值(24 h、48 h、72 h)、克隆数目和细胞侵袭数高于miR-489-3p mimics组(P<0.01)。结论miR-489-3p可能通过靶向下调PTEN表达,激活PI3K/Akt信号通路,进而抑制BC细胞增殖、侵袭,促进凋亡。

miR-130a通过调控PTEN对缺血性脑卒中神经功能的影响

目的探究miR-130a通过调控磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)对缺血性脑卒中大鼠神经功能恢复的机制。方法60只雄性SD大鼠随机分为对照组(假手术处理,n=20)、模型组(手术建立缺血性脑卒中模型,n=20)和模拟转染组(手术建立缺血性脑卒中模型后,将miR-130a模拟转染注射到大鼠的侧脑室,n=20),通过神经损伤严重程度评分量表(mNSS)评估手术后第1、10和25天时的神经缺陷程度;用RT-PCR分析用miR-130a和PTEN表达;荧光素酶法测定野生型-PTEN和突变型-PTEN表达的荧光素酶活性,酶联免疫吸附实验检测各组大鼠脑组织白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;TUNEL染色检测脑组织神经元凋亡水平,蛋白印迹法分析磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(p-GSK3β)及磷酸化原癌基因丝苏氨酸蛋白激酶(p-c-Raf)表达。结果miR-130a模型组大鼠的mNSS评分,miR-130a的表达减轻神经细胞的功能损伤;与对照组比较,模型组的miR-130a mRNA、p-AKT、p-GSK3β及p-c-Raf表达降低,TUNEL阳性细胞数量和PTEN mRNA表达升高(P<0.05);与模型组和对照组比较,模拟转染组miR-130a mRNAp-AKT、p-GSK3β及p-c-Raf表达升高,TUNEL阳性细胞数量和PTEN mRNA表达降低(P<0.05);与对照组比较,模型组IL-10含量降低、IL-6和TNF-α含量升高(P<0.05);与模型组比较,模拟转染组IL-10含量升高、IL-6和TNF-α含量降低(P<0.05);与模拟对照组比较,仅miR-130a模拟组抑制了野生型-PTEN的相对荧光素酶活性(P<0.05)。结论m iR-130a可能通过影响PI3K/AKT轴和PTEN减轻缺血性卒中引起的神经功能缺损。

PTEN、PI3K和miR-21在胃癌中的表达及相关性研究

目的探讨第10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和miR-21在胃癌中的表达及相互关系。方法收集77例胃癌患者手术切除的胃癌组织及胃黏膜组织标本,应用荧光定量RT-PCR及Western blotting技术检测miR-21、PTEN和PI3K蛋白的表达水平,并分析miR-21与PTEN/PI3K信号通路之间的关系,以及与临床病理参数之间的相关性。结果胃癌组织中miR-21及PI3K蛋白的表达水平均明显高于胃黏膜组织(P<0.05),PTEN蛋白的表达水平则明显降低(P<0.05);胃癌组织中PTEN蛋白的表达与肿瘤浸润深度、分化、TNM分期、淋巴转移有关(P<0.05),PI3K蛋白的表达与肿瘤淋巴转移和TNM分期有关(P<0.05);胃癌组织中PTEN蛋白的相对表达水平与miR-21和PI3K蛋白表达呈负相关(r=-0.428,P<0.05;r=-0.517,P<0.05)。结论 miR-21可能通过抑制PTEN,激活P13K信号通路参与胃癌的发生发展。

微小RNA-1269a靶向调控PTEN对肝癌细胞迁移、侵袭和PI3K/Akt信号通路的影响

目的探讨微小RNA-1269a(miR-1269a)对肝癌细胞侵袭、迁移和磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的影响及可能机制。方法采用Ualcan数据库分析肝癌组织中miR-1269a的水平;采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测人正常肝细胞HL-7702和人肝癌细胞(Huh-7、HCCLM6、Hep3B和SMMC-7721)的miR-1269a水平。将SMMC-7721细胞分为4组:空白对照组、阴性对照组、抑制物(Inhibitor)组(转染miR-1269a inhibitor)和Inhibitor+LY294002组(转染miR-1269a inhibitor+PI3K抑制剂LY294002),MTT法、划痕实验和Transwell小室实验检测细胞增殖活力、划痕愈合率和穿膜细胞数,Western blotting检测PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、Akt1和磷酸化Akt1(p-Akt1)水平,在线预测miR-1269a与靶基因第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白(PTEN)的潜在结合序列并经荧光素酶报告基因实验验证两者的靶向关系。结果369例原发性肝癌组织的miR-1269a水平高于49例正常肝组织(P<0.05)。肝癌细胞的miR-1269a水平均高于HL-7702细胞(P<0.05)。与空白对照组和阴性对照组相比,Inhibitor组的增殖活力减弱且p-PI3K和p-Akt1水平降低(P<0.05);空白对照组、阴性对照组、Inhibitor组和Inhibitor+LY294002组的划痕愈合率依次为(70.235±3.484)%、(75.269±6.245)%、(44.376±3.174)%和(21.812±0.968)%,穿膜细胞数依次为(192.453±10.324)、(201.288±5.873)、(129.197±8.485)和(47.839±9.037)个,Inhibitor组的划痕愈合率和穿膜细胞数均少于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。空白对照组和阴性对照组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05),而Inhibitor+LY294002组的上述指标均低于Inhibitor组(P<0.05)。PTEN野生型载体和miR-1269a模拟物共转染细胞的荧光素酶活性较PTEN突变型载体和miR-1269a模拟物共转染细胞降低(P<0.05)。结论miR-1269a在肝癌组织和细胞中高表达,且可能通过靶向PTEN来激活PI3K/Akt信号通路来促进肝癌细胞的迁移和侵袭,miR-1269a可能通过调控PI3K/Akt/PTEN轴来发挥促癌作用。

miR-383-3p靶向PTEN/PI3K/Akt/mTOR信号通路对冠心病大鼠内皮细胞凋亡的影响

目的:探究微小RNA-383-3p(miR-383-3p)靶向调节人第10号染色体缺失的磷酸酶/磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(PTEN/PI3K/AKT/mTOR)信号通路对冠心病(CHD)大鼠内皮细胞凋亡的影响。方法:将SD大鼠分为control组、CHD组、mimic NC组、miR-383-3p mimic组、miR-383-3p mimic+pcDNA3.1组、miR-383-3p mimic+pcDNA3.1-PTEN组,每组15只;除control组外其余组大鼠通过高脂饲料喂养及垂体后叶素注射构建CHD模型,造模前24h,将慢病毒液或质粒载体注射到相应组大鼠中;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测冠状动脉miR-383-3p表达;全自动生化分析仪测定大鼠血脂水平;酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清内皮素-1(ET-1)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管内皮生长因子(VEGF)、一氧化氮(NO)水平;HE染色及TUNEL法观察冠状动脉组织病理变化及内皮细胞凋亡情况;双荧光素酶报告基因实验验证miR-383-3p与PTEN靶向关系;Western blot检测冠状动脉组织Bcl-2、Bax及PTEN/PI3K/Akt/mTOR通路蛋白表达。结果:与control组相比,CHD组大鼠miR-383-3p、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、VEGF、NO、Bcl-2、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR水平显著减少,三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总胆固醇(TC)、ET-1、AngⅡ水平、冠状动脉组织病理损伤程度、内皮细胞凋亡指数(AI)、Bax、PTEN表达显著升高(P<0.05);与CHD组相比,miR-383-3p mimic组miR-383-3p、HDL-C、VEGF、NO、Bcl-2、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR水平显著增加,TG、LDL-C、TC、ET-1、AngⅡ水平、冠状动脉组织病理损伤程度、内皮细胞AI、Bax、PTEN表达显著减少(P<0.05);过表达PTEN可逆转miR-383-3p高表达对CHD大鼠内皮细胞凋亡及功能损伤的改善作用;PTEN是miR-383-3p的靶向基因。结论:miR-383-3p可通过靶向抑制PTEN表达来激活PI3K/Akt/mTOR信号通路,与抑制CHD大鼠内皮细胞凋亡密切相关。

榆栀止血颗粒含药血清对异位子宫内膜间质细胞PTEN/PI3K/AKT信号通路的影响

目的:探讨榆栀止血颗粒含药血清对异位子宫内膜间质细胞(ESCs)中第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白(PTEN)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路的影响。方法:制备榆栀止血颗粒含药血清,体外培养人异位ESCs细胞,分为对照组(空白血清)、低剂量组(榆栀止血颗粒低剂量血清)、中剂量组(榆栀止血颗粒中剂量血清)和高剂量组(榆栀止血颗粒高剂量血清)。CCK-8法检测细胞增殖情况;Transwell法检测细胞侵袭情况;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测细胞中PTEN mRNA表达情况;蛋白印迹(WB)法检测细胞中PTEN、p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT蛋白表达情况。结果:与对照组相比,低、中、高剂量组异位ESCs细胞OD值、侵袭细胞数、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达水平显著降低(P<0.05),细胞中PTEN mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05);随着榆栀止血颗粒含药血清剂量升高,异位ESCs细胞OD值、侵袭细胞数、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达水平逐步递减(P<0.05),细胞中PTEN mRNA及蛋白表达水平逐步递增(P<0.05)。结论:榆栀止血颗粒含药血清可抑制异位ESCs细胞增殖与侵袭,上调PTEN表达并抑制PI3K/AKT信号通路。

姜黄素对结直肠癌小鼠肿瘤生长的抑制作用及其PTEN/PI3K/Akt信号通路机制

目的:探讨姜黄素对结直肠癌小鼠肿瘤生长及第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白的同源基因/磷酯酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PTEN/PI3K/Akt)信号通路的影响,阐明姜黄素对结直肠癌的可能作用机制。方法:60只小鼠随机分为模型组、低剂量姜黄素组、中剂量姜黄素组和高剂量姜黄素组,每组15只。接种结直肠癌LOVO细胞建立小鼠结直肠癌模型,低、中和高剂量姜黄素组分别给予25、50和100 mg·kg^-1姜黄素灌胃,共4周。末次灌胃后24 h,检测各组小鼠肿瘤体积、肿瘤质量和抑瘤率,免疫组织化学染色检测各组小鼠肿瘤组织中增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达,并计算细胞增殖指数(PI),HE染色观察各组小鼠肿瘤组织病理形态表现,Western blotting法检测各组小鼠肿瘤组织中人髓细胞增生原癌基因c-Myc、半胱氨酸蛋白酶3(caspase3)、PTEN、Akt和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达水平。结果:各组小鼠肿瘤体积、肿瘤质量、抑瘤率、肿瘤组织PI值及肿瘤组织中c-Myc、caspase3、PTEN和p-Akt蛋白表达水平比较差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,各剂量姜黄素组小鼠肿瘤体积和肿瘤质量均明显降低(P<0.05),抑瘤率增加(P<0.05),肿瘤组织PI值降低(P<0.05),肿瘤组织中c-Myc和p-Akt蛋白表达水平降低(P<0.05),caspase3和PTEN蛋白表达水平升高(P<0.05)。免疫组织化学染色,与模型组比较,各剂量姜黄素组小鼠肿瘤组织中PCNA阳性细胞数明显减少。HE染色,模型组小鼠肿瘤组织中细胞排列紊乱,核质比例增加,核染色深;与模型组比较,各剂量姜黄素组小鼠肿瘤组织中细胞排列相对整齐,核质比例下降,核染色浅。姜黄素对结直肠癌肿瘤体积、肿瘤质量、抑瘤率、肿瘤组织PI值及肿瘤组织中c-Myc、caspase3、PTEN和p-Akt蛋白表达的影响呈剂量依赖性,不同剂量姜黄素组间上述各指标比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:姜黄素可抑制结直肠癌小鼠肿瘤生长,其机制可能与姜黄素抑制PTEN/PI3K/Akt信号通路有关。

PI3K/Akt相关基因多态性与胃癌含铂化疗方案疗效的关系分析

目的探讨PI3K/Akt信号通路中第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(PTEN)和磷脂酰肌醇激酶-3催化亚单位α(PIK3CA)的单核苷酸多态性(SNPs)与晚期胃癌含铂化疗方案疗效的关系。方法采用Haploview软件从国际人类基因组单体型图计划(Hap Map)公布的北京汉族人群基因型数据库中筛选出PTEN基因的4个标签SNPs(rs532678、rs926091、rs11202609、rs17431184)及PIK3CA基因的3个标签SNPs(rs2459693、rs3729679、rs12494623)。收集2012年1月至2015年12月158例晚期胃癌患者外周血标本并采用Sequenom Mass Array质谱阵列技术对待检样本的以上7个SNPs进行基因分型;采用RECIST 1.1版标准评价以上患者接受含铂化疗方案2个周期的近期疗效,以CR+PR为敏感组、SD+PD为不敏感组,分析化疗敏感情况与以上SNPs位点基因型、等位基因的关系。结果 158例晚期胃癌患者PTEN及PIK3CA基因7个SNPs的基因型及等位基因分布均符合Hardy-Weinberg平衡。158例患者经2个周期化疗后共有化疗敏感者83例(CR 3例、PR 80例)和不敏感者75例(SD 42例、PD 33例)。PIK3CA rs3729679、rs12494623 SNPs与晚期胃癌含铂化疗方案的敏感性有关,其中携带突变等位基因者(rs3729679 G,rs12494623 T)的化疗敏感率较低,且化疗不敏感的风险显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);其余PIK3CA SNPs和PTEN SNPs位点基因分布与化疗敏感率及不敏感风险均无关(P>0.05)。结论 PIK3CA rs3729679、rs12494623 SNPs与晚期胃癌含铂方案化疗敏感性有关,且携带rs3729679 G或rs12494623T等位基因者的化疗不敏感风险较高,对于预测晚期胃癌含铂化疗方案的疗效有一定价值。

PTEN/PI3K信号通路在大鼠心肌肥厚中的表达

目的：观察PTEN/PI3K信号通路在大鼠心肌组织中的表达,探讨该通路在心肌肥厚发生、发展中的作用.方法：皮下注射异丙肾上腺素（ISO）建立大鼠心肌肥厚模型,测定大鼠体质量、心质量、心肌细胞横径和横截面积;采用免疫组织化学方法检测大鼠心肌组织中肥大标志因子β-肌球蛋白（β-MHC）及PTEN/PI3K信号通路上PTEN、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、蛋白激酶B（PKB）、死亡相关因子（BAD）蛋白表达;利用计算机图像处理系统对各种蛋白进行定量分析.结果：模型组大鼠全心质量/体质量、左室质量/体质量、心肌细胞横径、心肌细胞截面积较对照组明显增加.模型组大鼠的心肌组织与对照组相比,β-MHC、PI3K与PKB表达水平均升高,PTEN和BAD表达水平明显降低.结论：PTEN在心肌肥厚中表达明显降低,起负性调节作用;PI3K/PKB信号通路激活,可能是导致心肌肥厚的机制之一,BAD可望成为生物学治疗靶点.

浙贝黄芩汤对急性髓系白血病患者PTEN、PI3K调控作用研究

目的研究浙贝黄芩汤抗急性髓系白血病( acute myeloid leukemia,AML)部分作用机理。方法 21 例 AML 患者随机分为对照组 10 例、治疗组 11,对照组给予单纯化疗方案处理、治疗组予以浙贝黄芩汤联合化疗方案处理,比较治疗组治疗前后中医证侯积分变化,比较治疗组与对照组疗效,应用RT-PCR检测两组患者外周血中与张力蛋白同源的 10 号染色体缺失的磷酸酶基因( Phosphatase and tensin homolog deleted on ten chromosome,PTEN)、磷酸酰肌醇 3 激酶( Phosphatidyli-nosito1-3-Kinase,PI3K)表达。结果治疗组治疗后中医证候积分低于治疗前,差异具有统计学意义( P <0. 01);与对照组比,治疗组临床完全缓解、部分缓解、总有效率差异无统计学意义( P >0. 05),对照组总有效率稍低于治疗组;治疗前,对照组与治疗组 PTEN、PI3K mRNA 表达比较,差异无统计学意义( P >0. 05);治疗后,治疗组 PTEN mRNA 表达显著高于对照组,PI3K mRNA 表达显著低于对照组,差异具有统计学意义( P <0. 05)。结论上调 PTEN 表达和下调 PI3K 的表达可能是浙贝黄芩汤抗急性髓系白血病部分作用机理。

SGLT2抑制剂对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤及PTEN/PI3K/Akt信号通路的影响

目的研究钠-葡萄糖协同转运蛋白(sodium-dependent glucose transporters,SGLT) 2抑制剂达格列净对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠的肾功能、足细胞损伤及10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因(phosphase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)/磷酸酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide 3 kinese/protein kinase B, PI3K/Akt)信号通路的影响。方法 36只SD大鼠被随机分为对照组、模型组和实验组,每组12只;其中模型组和实验组腹腔注射链尿佐菌素进行DN造模,对照组注射等量生理盐水;造模成功后实验组1 mg/(kg·d)达格列净灌胃,对照组和模型组灌胃等量生理盐水,连续灌胃8周。比较各组给药前和给药8周后空腹血糖,计算肾脏指数,测量血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),在光学显微镜下观察肾组织HE染色结果,在电子显微镜下观察足细胞形态,采用Western blot检测肾脏组织中PTEN、磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白相对表达。结果给药前,模型组和实验组空腹血糖差异无统计学意义(P>0.05),但显著高于对照组(P<0.05);8周后空腹血糖、血清Scr、血清BUN、肾脏指数、24 h尿蛋白排泄率:模型组>实验组>对照组,组间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。光学显微镜下HE染色结果:实验组大鼠基质增生增厚、基底膜增厚、系膜扩张,但程度低于模型组高于对照组;电子显微镜下对照组足细胞形态正常,实验组足细胞可见部分足突融合,排列较模型组整齐,模型组可见显著足突融合、排列混乱、嵴断裂。Western blot结果表明p-PI3K、p-Akt蛋白表达:模型组>实验组>对照组,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05),PTEN蛋白表达:模型组<实验组<对照组,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论达格列净能降低DN大鼠的血糖水平,减少尿蛋白,改善肾功能,减轻足细胞损伤,可能与其上调PTEN蛋白、下调p-PI3K/p-Akt表达有关。

PTEN/PI3K在小鼠肝缺血再灌注损伤中的调控作用及机制

目的:研究第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome ten,PTEN)/磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)在肝缺血再灌注损伤中的调控作用及可能的机制.方法:夹闭C57BL/6J小鼠的肝动脉和门静脉以阻断肝脏向头侧肝叶血供90 min,随后取下血管夹恢复血供,建立肝缺血再灌注损伤模型.实验分为四组:正常对照组(sham)、缺血再灌注模型组(IR)、PTEN抑制剂bpv(HOpic)干预组(BPV+IR)、PI3K抑制剂wortmannin干预组(WM+IR).检测小鼠血清ALT水平,行肝组织病理检查,以评估抑制PTEN/PI3K对肝脏IRI的影响.采用Western blot法检测p-AKT、p-GSK3β的表达,分析抑制PTEN/PI3K对其下游关键效应分子AKT/GSK3β磷酸化的调控.采用定量PCR法检测炎性因子IL-12p40、IL-10及TNF-α的基因表达,分析抑制PTEN/PI3K对TLR4介导的炎症反应的影响.结果:血清ALT及肝组织学改变均提示,抑制PTEN使IR诱导的肝损害明显减轻,相反,抑制PI3K则使IRI加剧.随着再灌注的发生,缺血期去磷酸化的AKT/GSK3β逐渐恢复其磷酸化活性.抑制PTEN增强了再灌注触发的AKT/GSK3β磷酸化,而阻断PI3K则使其明显削弱.阻断PTEN抑制了促炎基因IL-12p40、TNF-α的表达,并使IL-12/IL-10比值下调,该结果与抑制PI3K产生的效应完全相反.结论:PTEN/PI3K在肝缺血再灌注损伤中发挥重要的调控作用,PTEN抑制和/或PI3K活化可能通过上调p-AKT/p-GSK3β以及抑制炎症反应明显减轻肝缺血再灌注损伤.

PI3K/Akt通路在肝癌细胞迁移和侵袭中的作用

目的探讨PI3K/Akt信号通路中3-磷酸肌醇-依赖性激酶1(PDK1)、10号染色体上的磷酸酶和张力蛋白同源蛋白(PTEN)、蛋白激酶B(Akt)表达对肝癌细胞迁移和侵袭的作用。方法常规培养肝癌SMMC-7721细胞,将细胞分为对照组、PDK1抑制剂组、Akt激动剂组、PTEN抑制剂组。对照组加入RPMI-1640培养基,PDK1抑制剂组加入PDK1的特异性抑制剂OSU03012,Akt激动剂组加入Akt特异性激动剂SC79,PTEN抑制剂组加入PTEN特异性抑制剂VO-Ohpic。采用细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力,Western blotting法检测PDK1基因相关蛋白PDK1、p-PDK1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及PTEN、Akt蛋白表达。结果与对照组比较,PDK1抑制剂组细胞迁移率减少,Akt激动剂组和PTEN抑制剂组细胞迁移率增加(P<0.05或<0.01)。与对照组比较,PDK1抑制剂组穿膜细胞数减少,Akt激动剂组和PTEN抑制剂组穿膜细胞数增加(P均<0.01)。与对照组比较,PDK1抑制剂组PDK1、p-PDK1表达降低,E-cadherin表达升高,Vimentin表达降低;Akt激动剂组Akt表达升高,PTEN表达降低;PTEN抑制剂组PTEN表达降低,Akt表达升高(P<0.05或<0.01)。结论抑制PI3K/Akt信号通路中PDK1表达可以抑制肝癌细胞迁移和侵袭,促进Akt和抑制PTEN表达可以促进肝癌细胞迁移和侵袭。