凋亡抑制蛋白1和促凋亡蛋白第2个线粒体衍生的胱天蛋白酶激活剂在急性淋巴细胞白血病患儿中的表达

目的通过检测细胞性凋亡抑制蛋白1(c-IAP1)和促凋亡蛋白第2个线粒体衍生的胱天蛋白酶激活剂(Smac)在儿童ALL中的表达,分析和探讨二者的关系及临床意义。方法采用病例对照研究,研究对象为48例ALL患儿。其中初治组23例,缓解组21例,复发组4例;对照组为12例骨髓象正常的非恶性血液病患儿。应用SP免疫组织化学方法分别检测各组患儿骨髓中c-IAP1、Smac蛋白表达情况。采用SPSS 12.0软件进行统计分析。结果 c-IAP1蛋白在初治组骨髓中阳性表达率为60.9%,缓解组阳性表达率为28.6%,复发组阳性表达率为75.0%,对照组阳性表达率为16.7%。Smac蛋白在初治组骨髓中阳性表达率为56.5%,缓解组阳性表达率为19.0%,复发组阳性表达率为75.0%,对照组阳性表达率为16.7%。c-IAP1、Smac蛋白在初治组ALL患儿骨髓中表达水平均分别高于缓解组(P<0.008)和对照组(P<0.008);初治组和复发组两因子比较,差异均无统计学意义(Pa>0.05);复发组中c-IAP1、Smac表达水平均高于对照组(Pa<0.008)。结论 c-IAP1、Smac可能参与了儿童ALL的发生与发展。

三重靶向介导的Smac过表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡和周期进程的影响

目的:利用基因重组技术获得三重靶向性Smac过表达的条件复制型腺病毒,探讨其对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡和周期的影响。方法:利用重组技术构建Smac过表达载体pShuttle-Egr1-Smac-HREhTERT-E1A-E1Bp-E1B55K,与骨架载体pAdEasy在BJ5183(AdEasy-1+)菌中进行重组,获得Smac过表达的条件复制型腺病毒CRAd.pE-Smac,感染MDA-MB-231细胞后,利用化学试剂氯化钴模拟肿瘤细胞乏氧状态,设立对照组、CARd.pE-Smac组、乏氧组和CARd.pE-Smac+乏氧组,并根据是否进行4Gy照射,每组分为未照射组和照射组,共8个实验组。利用Western blotting法检测各组细胞Smac蛋白的表达,利用流式细胞术检测细胞凋亡率和不同周期进程细胞百分率。结果:Western blotting法检测,经条件复制型腺病毒CRAd.pESmac感染、乏氧和照射后,Smac蛋白表达水平增加,CARd.pE-Smac+乏氧+4Gy组Smac蛋白表达水平最高。流式细胞术检测,与对照组比较,CARd.pE-Smac组、乏氧组和CARd.pE-Smac+乏氧组细胞凋亡率均明显升高(P<0.05或P<0.01);与相应未照射组比较,4Gy照射后CARd.pE-Smac+4Gy组、乏氧+4Gy组和CARd.pE-Smac+乏氧+4Gy组细胞凋亡率均明显升高(P<0.05或P<0.01),CARd.pE-Smac+乏氧+4Gy组升高最为明显,且S期和G2/M期细胞百分率明显增加(P<0.05或P<0.01),与诱导凋亡的结果有相似的趋势。结论:在条件复制型腺病毒CRAd.pE-Smac感染MDA-MB-231细胞、并经乏氧和辐射处理后,实现了三重靶向介导的Smac过表达,其具有促进肿瘤细胞凋亡和诱导G2/M期细胞阻滞的作用。

富氢液对大鼠全脑缺血-再灌注损伤后XIAP和Smac的影响

目的探讨富氢液对大鼠全脑缺血-再灌注损伤后X连锁凋亡蛋白抑制剂(XIAP)和第2个线粒体源胱天蛋白酶激活剂(Smac)的影响。方法成年雄性SD大鼠30只,随机均分为三组:假手术组(S组)、缺血-再灌注组(IR组)和富氢液组(H组)。采用经食管起搏诱发室颤建立大鼠全脑缺血模型。H组于再灌注即刻和6h时腹腔注射富氢液5ml/kg,IR组同时腹腔注射等容量生理盐水。再灌注24h行神经功能缺损评分(NDS评分)后处死,应用HE染色,光镜下观察海马CA1区病理学改变,计数海马CA1区锥体细胞,Western blot法检测脑组织中caspase-9,XIAP和Smac的蛋白表达,免疫组化法检测海马CA1区caspase-3的表达。结果与S组比较,IR组NDS评分明显降低,海马CA1区正常锥体细胞数明显减少(P<0.05),再灌注24hXIAP表达减少,Smac和caspase-9表达明显增加(P<0.05);与IR组比较,H组大鼠神经功能损伤明显减轻,海马CA1区正常锥体细胞数明显增加(P<0.05),再灌注24hXIAP表达增加,Smac和caspase-9表达明显减少(P<0.05)。结论富氢液能有效减轻大鼠全脑缺血-再灌注损伤,其机制可能是促进XIAP和抑制Smac表达,提高XIAP/Smac比值,从而发挥脑保护的作用。

丝裂霉素C与表达Smac/DIABLO的肿瘤靶向腺相关病毒联用对抗恶性黑色素瘤的效果

目的探讨重组腺相关病毒(rAAV)介导促凋亡因子Smac/DIABLO是否能提高恶性黑色素瘤细胞对丝裂霉素(MMC)的敏感性。方法将携有目的基因的rAAV加入到培养液中转染肿瘤细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(EGFP)的表达,RT-PCR检测Smac/DIABLO基因的表达,MTT法测定肿瘤细胞增殖,流式细胞术测定肿瘤细胞的凋亡;动物在体实验测定抗肿瘤效果。结果 rAAV转染96h后几乎所有细胞表达明亮的黄绿色荧光。RT-PCR检测发现转染48h后目的基因Smac/DIABLO稳定表达。MTT检测显示rAAV-hTERT/Smac/DIABLO+MMC对肿瘤细胞的抑制率最高(P<0.05)。流式细胞检测结果显示,rAAV-hTERT/Smac/DIABLO+MMC组肿瘤细胞的凋亡率明显高于生理盐水(HBSS)组、MMC组和rAAV-hTERT/Smac/DIABLO组(P<0.01)。动物实验结果表明,rAAV-hTERT/Smac/DIABLO+MMC有非常强的抑制肿瘤作用,其抗癌效果优于HBSS、MMC、rAAV-hTERT/EGFP和rAAV-hTERT/Smac/DIABL组。结论 rAAV-hTERT/Smac/DIABLO在体内、体外均能提高肿瘤细胞对MMC的敏感性。此作用与Smac/DIABLO的促凋亡作用有关。

电针联合壮医药线点灸对糖尿病胃轻瘫大鼠胃窦组织凋亡相关蛋白表达的影响

目的:观察电针联合壮医药线点灸对糖尿病胃轻瘫(DGP)大鼠胃窦组织凋亡相关蛋白及基因表达的影响,探讨电针联合壮医药线点灸治疗DGP的作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、西药组、电针组、点灸组、联合组,每组12只。采用链脲佐菌素腹腔注射法制备DGP大鼠模型。西药组予0.15 mg/mL枸橼酸莫沙必利混悬液灌胃给药;选取“中脘”“内关”“三阴交”穴,电针组电针20 min(10 Hz/50 Hz, 2 mA),点灸组每穴点灸3壮,联合组为电针联合点灸治疗。均每日1次,连续3周。检测各组大鼠随机血糖、胃排空率及小肠推进率;TUNEL法检测胃窦组织细胞凋亡指数;Western blot、荧光定量PCR法检测胃窦组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白及mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组随机血糖升高(P<0.01),胃排空率、小肠推进率降低(P<0.01),胃窦组织可见大量凋亡细胞,细胞凋亡指数明显升高(P<0.01),Caspase-3、Bax蛋白及mRNA表达升高(P<0.01),Bcl-2蛋白及mRNA表达降低(P<0.01)。与模型组比较,电针组、点灸组、联合组随机血糖降低(P<0.01);4个治疗组胃排空率、小肠推进率均升高(P<0.01),胃窦组织细胞凋亡指数均降低(P<0.01);西药组、联合组Caspase-3、Bax蛋白及mRNA表达降低(P<0.01),Bcl-2蛋白及mRNA表达升高(P<0.01);点灸组Caspase-3蛋白及mRNA、Bax mRNA表达降低(P<0.01,P<0.05),Bcl-2 mRNA表达升高(P<0.01);电针组Caspase-3蛋白、Bax蛋白及mRNA表达降低(P<0.05,P<0.01),Bcl-2 mRNA表达升高(P<0.01)。与联合组比较,电针组随机血糖升高(P<0.01),胃排空率、小肠推进率降低(P<0.05,P<0.01),Caspase-3蛋白、Bax mRNA表达升高(P<0.01),Bcl-2蛋白及mRNA表达降低(P<0.05,P<0.01);点灸组随机血糖升高(P<0.05),胃排空率、小肠推进率降低(P<0.01),细胞凋亡指数升高(P<0.01),Caspase-3蛋白、Bax蛋白及mRNA表达升高(P<0.01,P<0.05),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);西药组随机血糖升高(P<0.01),胃排空率、小肠推进率均降低(P<0.01)。电针组胃排空率、小肠推进率较西药组升高(P<0.05,P<0.01)。点灸组Bcl-2 mRNA表达较电针组升高(P<0.01)。结论:电针联合壮医药线点灸可在一定程度上降低DGP大鼠的血糖,提高胃肠动力,其作用机制可能与调节胃窦组织Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白及mRNA的表达,减少细胞凋亡有关。