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外泌体中微小RNA-19a靶向第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因/蛋白激酶B/p53轴介导乳腺癌耐药性的机制
被引量:
1
1
作者
樊艳
洪文静
+1 位作者
吕娟
郭宇飞
《中华实验外科杂志》
CSCD
北大核心
2017年第5期770-773,共4页
目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-19a通过乳腺癌阿霉素(ADM)耐药癌株MCF-7/A来源的外泌体在化疗药物耐药性传递中的作用及其潜在的分子机制。方法采用超速分级离心法从乳腺癌细胞培养上清中分离提取外泌体,投射电镜及Nanosight对外泌...
目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-19a通过乳腺癌阿霉素(ADM)耐药癌株MCF-7/A来源的外泌体在化疗药物耐药性传递中的作用及其潜在的分子机制。方法采用超速分级离心法从乳腺癌细胞培养上清中分离提取外泌体,投射电镜及Nanosight对外泌体进行观察鉴定。利用重组慢病毒载体构建稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的乳腺癌敏感细胞株GFP-MCF-7/S,通过细胞-细胞及细胞-外泌体共培养实验观察耐药性传递现象。实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)、Western blot及细胞转染技术检测miR-19a及第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因/蛋白激酶B/p53(PTEN/Akt/p53)轴在耐药性发生过程中的作用。结果与MCF-7/S比较,MCF-7/A细胞中miR-19a的表达(1.03±0.16比3.56±0.58,P=0.002)显著增加,miR-19a抑制剂处理后MCF-7/A细胞对化疗药物ADM的敏感性[(41.17±10.65)%比(23.45±8.89)%,P=0.011]显著增加。电镜下观察两种乳腺癌细胞分泌的外泌体均呈圆形或椭圆形,直径为40~100 nm。荧光显微镜下对GFP的观察及细胞计数试剂盒(CCK-8)法对细胞增殖抑制率的检测结果显示ADM对MCF-7/S +MCF-7/A及MCF-7/S+ MCF-7/A exos组细胞的增殖抑制率显著低于MCF-7/S+MCF-7/S[(31.50±6.68)%比(51.20±12.44)%,P=0.006]及MCF-7/S+ MCF-7/S exos[(27.67±6.02)%比(49.65±10.52)%,P=0.000]组细胞,且伴随着细胞miR-19a表达的增加(1.01±0.13比2.67±0.62,P=0.000)。Western blot检测结果显示外泌体中miR-19a能够通过显著抑制PTEN(1.15±0.18比0.67±0.13,P=0.000)及p53(0.99±0.18比0.49±0.11,P=0.005)蛋白的表达,增加Akt的磷酸化水平(1.15±0.18比0.67±0.13,P=0.000)促进受体细胞耐药的发生。结论miR-19a可通过外泌体包裹的形式传递乳腺癌细胞间的耐药性,进而通过对PTEN/Akt/p53轴的调控促进受体细胞耐药的发生。
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关键词
外泌体
微小RNA-19a
乳腺癌
耐药性
第lo号染色体上缺失与张力蛋
白同源的磷酸酯酶基因/蛋白激酶B/p53轴
原文传递
熊果酸对人非小细胞肺癌细胞系A549增殖、迁移、侵袭能力的影响及其机制探讨
被引量:
7
2
作者
李姝叶
毕小菁
王文军
《山东医药》
CAS
2019年第15期15-19,共5页
目的 观察熊果酸(UA)对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系A549增殖、迁移、侵袭能力的影响,并探讨其机制。方法 采用0、5、10、20、30、40、50μmol/L的UA作用于A549细胞,计算UA的IC50值,miRNA芯片检测UA诱导前后差异性表达的miRNA。取对数...
目的 观察熊果酸(UA)对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系A549增殖、迁移、侵袭能力的影响,并探讨其机制。方法 采用0、5、10、20、30、40、50μmol/L的UA作用于A549细胞,计算UA的IC50值,miRNA芯片检测UA诱导前后差异性表达的miRNA。取对数生长期A549细胞并分为4组,A组转染miR-21 inhibitor及加入42μmol/LUA培养,B组转染miR-21mimic及加入42μmol/LUA培养,C组加入42μmol/LUA培养,D组不给予干预,CCK-8法检测细胞增殖率,划痕实验检测细胞24h划痕相对宽度,Transwell实验检测细胞穿膜个数,荧光定量PCR法检测细胞第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋P(PTEN)、磷脂酰肌醇三激酶(PI3K)、丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)mRNA,Western blotting法检测细胞PTEN、PI3K、AKT蛋白。结果 UA对A549细胞的IC50值为42μmol/L;A549细胞中异常表达的miRNA共34种(上调的20条,下调的14条),选择miRNA-21做后续实验。A组细胞增殖率、24h划痕相对宽度、穿膜个数分别为43.33%±8.51%、0.876±0.099、(28.400±7.403)个/HP,B组分别为66.85%±5.10%、0.445±0.032、(81.400±11.415)个/HP,C组分别为53.49%±9.72%、0.629±0.051、(42.000±7.348)个/HP,D组分别为100.00%±12.31%、0.199±0.038、(129.400±5.030)个/HP,C组与其余3组比较,P均<0.05;A组PTEN蛋白、PTENmRNA、API3K蛋白、API3K mRNA、AKT蛋白、AKT mRNA分别为0.78±0.12、2.90±0.06、0.24±0.08、0.29±0.16、0.17±0.07、0.16±0.16,B组分别为0.21±0.12、0.94±0.05、0.82±0.11、1.21±0.04、0.74±0.08、0.87±0.02,C组分别为0.47±0.09、1.53±0.09、0.50±0.05、0.72±0.09、0.48±0.08、0.48±0.12,D组分别为0.20±0.11、0.96±0.13、0.76±0.07、1.09±0.05、0.74±0.07、1.03±0.10,C组与其余3组比较,P均<0.05。结论 UA能抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能是通过下调miRNA-21作用于PTEN/PI3K/AKT通路来实现的。
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关键词
熊果酸
肺癌
微小RNA-21
第10
号
染色体
同源
缺失
性磷酸酶-
张力蛋
磷脂酰肌醇三激酶
丝氨酸/苏氨酸激酶
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职称材料
题名
外泌体中微小RNA-19a靶向第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因/蛋白激酶B/p53轴介导乳腺癌耐药性的机制
被引量:
1
1
作者
樊艳
洪文静
吕娟
郭宇飞
机构
河南省中医院(河南中医药大学第二附属医院)乳腺外科
出处
《中华实验外科杂志》
CSCD
北大核心
2017年第5期770-773,共4页
基金
河南省教育厅科学技术研究重点项目(13A360610)
文摘
目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-19a通过乳腺癌阿霉素(ADM)耐药癌株MCF-7/A来源的外泌体在化疗药物耐药性传递中的作用及其潜在的分子机制。方法采用超速分级离心法从乳腺癌细胞培养上清中分离提取外泌体,投射电镜及Nanosight对外泌体进行观察鉴定。利用重组慢病毒载体构建稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的乳腺癌敏感细胞株GFP-MCF-7/S,通过细胞-细胞及细胞-外泌体共培养实验观察耐药性传递现象。实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)、Western blot及细胞转染技术检测miR-19a及第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因/蛋白激酶B/p53(PTEN/Akt/p53)轴在耐药性发生过程中的作用。结果与MCF-7/S比较,MCF-7/A细胞中miR-19a的表达(1.03±0.16比3.56±0.58,P=0.002)显著增加,miR-19a抑制剂处理后MCF-7/A细胞对化疗药物ADM的敏感性[(41.17±10.65)%比(23.45±8.89)%,P=0.011]显著增加。电镜下观察两种乳腺癌细胞分泌的外泌体均呈圆形或椭圆形,直径为40~100 nm。荧光显微镜下对GFP的观察及细胞计数试剂盒(CCK-8)法对细胞增殖抑制率的检测结果显示ADM对MCF-7/S +MCF-7/A及MCF-7/S+ MCF-7/A exos组细胞的增殖抑制率显著低于MCF-7/S+MCF-7/S[(31.50±6.68)%比(51.20±12.44)%,P=0.006]及MCF-7/S+ MCF-7/S exos[(27.67±6.02)%比(49.65±10.52)%,P=0.000]组细胞,且伴随着细胞miR-19a表达的增加(1.01±0.13比2.67±0.62,P=0.000)。Western blot检测结果显示外泌体中miR-19a能够通过显著抑制PTEN(1.15±0.18比0.67±0.13,P=0.000)及p53(0.99±0.18比0.49±0.11,P=0.005)蛋白的表达,增加Akt的磷酸化水平(1.15±0.18比0.67±0.13,P=0.000)促进受体细胞耐药的发生。结论miR-19a可通过外泌体包裹的形式传递乳腺癌细胞间的耐药性,进而通过对PTEN/Akt/p53轴的调控促进受体细胞耐药的发生。
关键词
外泌体
微小RNA-19a
乳腺癌
耐药性
第lo号染色体上缺失与张力蛋
白同源的磷酸酯酶基因/蛋白激酶B/p53轴
Keywords
Exosome
MicroRNA-19a
Breast cancer
Drug assistant
Phosphatase andtensin homo
lo
gue deleted on chromosometen/protein kinase B/p53 axis
分类号
R737.9 [医药卫生—肿瘤]
原文传递
题名
熊果酸对人非小细胞肺癌细胞系A549增殖、迁移、侵袭能力的影响及其机制探讨
被引量:
7
2
作者
李姝叶
毕小菁
王文军
机构
西南医科大学附属医院
出处
《山东医药》
CAS
2019年第15期15-19,共5页
文摘
目的 观察熊果酸(UA)对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系A549增殖、迁移、侵袭能力的影响,并探讨其机制。方法 采用0、5、10、20、30、40、50μmol/L的UA作用于A549细胞,计算UA的IC50值,miRNA芯片检测UA诱导前后差异性表达的miRNA。取对数生长期A549细胞并分为4组,A组转染miR-21 inhibitor及加入42μmol/LUA培养,B组转染miR-21mimic及加入42μmol/LUA培养,C组加入42μmol/LUA培养,D组不给予干预,CCK-8法检测细胞增殖率,划痕实验检测细胞24h划痕相对宽度,Transwell实验检测细胞穿膜个数,荧光定量PCR法检测细胞第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋P(PTEN)、磷脂酰肌醇三激酶(PI3K)、丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)mRNA,Western blotting法检测细胞PTEN、PI3K、AKT蛋白。结果 UA对A549细胞的IC50值为42μmol/L;A549细胞中异常表达的miRNA共34种(上调的20条,下调的14条),选择miRNA-21做后续实验。A组细胞增殖率、24h划痕相对宽度、穿膜个数分别为43.33%±8.51%、0.876±0.099、(28.400±7.403)个/HP,B组分别为66.85%±5.10%、0.445±0.032、(81.400±11.415)个/HP,C组分别为53.49%±9.72%、0.629±0.051、(42.000±7.348)个/HP,D组分别为100.00%±12.31%、0.199±0.038、(129.400±5.030)个/HP,C组与其余3组比较,P均<0.05;A组PTEN蛋白、PTENmRNA、API3K蛋白、API3K mRNA、AKT蛋白、AKT mRNA分别为0.78±0.12、2.90±0.06、0.24±0.08、0.29±0.16、0.17±0.07、0.16±0.16,B组分别为0.21±0.12、0.94±0.05、0.82±0.11、1.21±0.04、0.74±0.08、0.87±0.02,C组分别为0.47±0.09、1.53±0.09、0.50±0.05、0.72±0.09、0.48±0.08、0.48±0.12,D组分别为0.20±0.11、0.96±0.13、0.76±0.07、1.09±0.05、0.74±0.07、1.03±0.10,C组与其余3组比较,P均<0.05。结论 UA能抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能是通过下调miRNA-21作用于PTEN/PI3K/AKT通路来实现的。
关键词
熊果酸
肺癌
微小RNA-21
第10
号
染色体
同源
缺失
性磷酸酶-
张力蛋
磷脂酰肌醇三激酶
丝氨酸/苏氨酸激酶
Keywords
ursolic acid
lung carcinoma
microRNA-21
phosphatase and tensin homo
lo
gue deleted on chromosome 10
phosphoinositide 3-kinase
serine/threonine kinase
分类号
R734.2 [医药卫生—肿瘤]
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外泌体中微小RNA-19a靶向第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因/蛋白激酶B/p53轴介导乳腺癌耐药性的机制
樊艳
洪文静
吕娟
郭宇飞
《中华实验外科杂志》
CSCD
北大核心
2017
1
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2
熊果酸对人非小细胞肺癌细胞系A549增殖、迁移、侵袭能力的影响及其机制探讨
李姝叶
毕小菁
王文军
《山东医药》
CAS
2019
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