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基于新型高保真Taq酶的多重等位基因特异性PCR方法的建立与应用
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作者 沈泽嘉 徐逸梦 +3 位作者 时景景 周宇荀 李凯 肖君华 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期103-109,115,共8页
在8号染色体存在部分替换片段的小鼠上挑选3个SNP位点进行初步方案检验,包括高保真Taq酶的特异性测试以及引物浓度对分型结果的影响,并评价该方法的灵敏度;之后应用该技术检测野生1号染色体替换系小鼠上的9个SNP的不同样本。对Taq酶的... 在8号染色体存在部分替换片段的小鼠上挑选3个SNP位点进行初步方案检验,包括高保真Taq酶的特异性测试以及引物浓度对分型结果的影响,并评价该方法的灵敏度;之后应用该技术检测野生1号染色体替换系小鼠上的9个SNP的不同样本。对Taq酶的特异性研究表明:引物在未引入突变的前提下检测结果与测序结果保持一致;引物稀释实验说明浓度最低为0.003~0.006μmol/L,灵敏度的检测结果表示最低浓度检测限可达0.07 ng/μL以下。最后检测得到5种标准样本的基因型,其代表9个SNP的组合。成功验证并建立该新型高特异性Taq酶应用于多重等位基因特异性PCR实验的总体流程。提供一套具备高特异性、能够针对多个SNP位点进行检测的低成本方案,对多重等位基因特异性PCR技术的开发同样具有参考价值。 展开更多
关键词 等位基因异性pcr 多重pcr 高保真Taq酶 基因分型 染色体替换系小鼠
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基于等位基因特异性PCR技术检测Sw-5b基因
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作者 刘文明 华明艳 +3 位作者 宋兰芳 崔少杰 孙海波 金凤媚 《天津农业科学》 CAS 2023年第4期1-7,共7页
番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)是世界范围内危害最大的病毒病之一。为了加快番茄抗TSWV育种进程,利用等位基因特异性PCR(Allele-Specific PCR,AS-PCR)技术建立了与TSWV抗性基因Sw-5b连锁的标记。结果表明:在63℃退火温... 番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)是世界范围内危害最大的病毒病之一。为了加快番茄抗TSWV育种进程,利用等位基因特异性PCR(Allele-Specific PCR,AS-PCR)技术建立了与TSWV抗性基因Sw-5b连锁的标记。结果表明:在63℃退火温度下,引入A-C错配的特异性引物rg3-F可以检测出抗性基因型。没有引入错配的特异性引物sg1-F,在60℃退火温度下可以检测出感病基因型。在验证试验中,利用引物Sw5b-f1/r1进行PCR扩增并测序,结果表明利用rg3-F和sg1-F进行AS-PCR,能够有效区分番茄的不同基因型。本研究建立的AS-PCR方法为育种工作者在番茄抗TSWV育种中筛选Sw-5b抗性基因提供了有力的工具。 展开更多
关键词 等位基因异性pcr SNP 番茄 TSWV
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鸡白痢沙门菌等位基因特异性PCR检测方法的建立 被引量:19
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作者 耿士忠 潘志明 +3 位作者 蒋春红 张辉 李求春 焦新安 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期113-116,共4页
根据鸡白痢沙门菌与鸡伤寒沙门菌的rfbS基因在第237和第598位碱基的不同,设计和合成了等位基因特异性PCR引物,建立了快速检测鸡白痢沙门菌的PCR方法,并应用该方法对鸡白痢沙门菌临床分离样品进行了PCR鉴定。结果显示,该PCR方法能够特异... 根据鸡白痢沙门菌与鸡伤寒沙门菌的rfbS基因在第237和第598位碱基的不同,设计和合成了等位基因特异性PCR引物,建立了快速检测鸡白痢沙门菌的PCR方法,并应用该方法对鸡白痢沙门菌临床分离样品进行了PCR鉴定。结果显示,该PCR方法能够特异性地鉴定鸡白痢沙门菌,检测灵敏度达100 pgDNA。对35个经常规方法鉴定的鸡白痢沙门菌分离株应用等位基因特异性PCR方法进行鉴定,鉴定出33株鸡白痢沙门菌,符合率为94.3%。表明,建立的等位基因特异性PCR方法能够准确而快速地鉴定鸡白痢沙门菌。 展开更多
关键词 鸡白痢沙门菌 等位基因异性pcr rfbS基因
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基于等位基因特异性PCR原理建立的SNP分型新方法 被引量:19
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作者 王瑞恒 刘利民 +3 位作者 赵金玲 孙学科 孙琳琳 周刚 《法医学杂志》 CAS CSCD 2008年第3期189-193,共5页
目的建立一种新方法,对多个单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)位点进行分型。方法基于等位基因特异性PCR原理,采用荧光标记复合扩增和毛细管电泳技术,根据PCR片段长度差异进行分型。选择SNP位点共11个,每个SNP位点设计... 目的建立一种新方法,对多个单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)位点进行分型。方法基于等位基因特异性PCR原理,采用荧光标记复合扩增和毛细管电泳技术,根据PCR片段长度差异进行分型。选择SNP位点共11个,每个SNP位点设计两条长度不同、3’末端分别与SNP两个等位基因碱基配对的上游引物,同时为了增加特异性,在两条等位基因上游引物的3’末端第3或第4位碱基人为引入错配。在距离上游引物100~300bp范围内的合适位置,设计下游共用引物,并进行荧光标记。所有位点经过复合扩增后,PCR产物经ABIPrismTM310型遗传分析仪电泳分离,确定每个SNP的基因型。结果每个SNP位点纯合子为单一产物峰,杂合子则为长度不同的两个产物峰。不同的SNP位点扩增产物长度不同,根据产物长度和产物峰的数量进行SNP分型,一次完成11个SNP位点分型,其结果与直接测序完全一致。结论荧光标记复合扩增片段长度差异等位基因特异性PCR法是一种简单快速而有效的SNP分型新方法。 展开更多
关键词 医生物学 单核苷酸多态性 等位基因异性pcr 复合扩增
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片段长度差异等位基因特异性PCR—一种改良的SNP分型新方法 被引量:18
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作者 黄代新 杨庆恩 赵贵森 《法医学杂志》 CAS CSCD 2005年第1期11-14,共4页
目的建立一种基于等位基因特异性PCR原理的改良SNP分型新方法:片段长度差异等位基因特异性PCR,并考察特异性引物的3'端第3位、第4位碱基错配对特异性延伸的影响。方法以SNP位点rs759117和rs760887为例,设计两条长度不同、3'末... 目的建立一种基于等位基因特异性PCR原理的改良SNP分型新方法:片段长度差异等位基因特异性PCR,并考察特异性引物的3'端第3位、第4位碱基错配对特异性延伸的影响。方法以SNP位点rs759117和rs760887为例,设计两条长度不同、3'末端分别与SNP两个等位基因碱基配对的上游引物,同时在两个等位基因特异性引物3'端第3或第4位碱基引入错配以增加特异性,下游为公用引物。PCR产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染显带后确定样本的基因型。结果不同SNP纯合子为长度不同的单一谱带,杂合子则为两条带,其结果与直接测序完全一致。两条特异性上游引物3'端第3或第4位碱基引入错配后非特异性延伸显著减少,且对PCR反应条件的严格性要求明显降低。结论片段长度差异等位基因特异性PCR是一种简单快速而有效的SNP分型新方法;两条特异性引物3'端第3。 展开更多
关键词 单核苷酸多态性 片段长度差异等位基因异性pcr 碱基错配 医物证检验学
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等位基因特异性PCR检测CYP3A5和MDR-1基因多态性方法的建立及临床应用 被引量:2
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作者 吴洁 侯佳展 +4 位作者 程倩 李佳垚 李丹丹 尹逸丛 苏薇 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2017年第11期844-848,共5页
目的用等位基因特异性PCR(ARMS-PCR)检测细胞色素P450酶CYP3A5(A6986G)和多药耐药基因MDR-1(C3435T)基因多态性,探讨其与肾移植受者他克莫司(Tac)血药浓度和剂量比的相关性。方法根据CYP3A5(A6986G)和MDR-1(C3435T)基因多态性位点分别设... 目的用等位基因特异性PCR(ARMS-PCR)检测细胞色素P450酶CYP3A5(A6986G)和多药耐药基因MDR-1(C3435T)基因多态性,探讨其与肾移植受者他克莫司(Tac)血药浓度和剂量比的相关性。方法根据CYP3A5(A6986G)和MDR-1(C3435T)基因多态性位点分别设计ARMS-PCR引物,分析72例肾移植受者外周血基因组DNA中该2个基因位点的多态性,同时以DNA测序法为金标准进行验证。化学发光微粒子免疫分析法测定肾移植受者血Tac浓度,并比较术后1个月时不同基因型受者之间血Tac浓度、Tac剂量/Tac用量的差异。结果建立的ARMS-PCR法与DNA测序法检测符合率为100%。72例肾移植受者中,CYP3A5*1/*1、*1/*3和*3/*3基因型的发生频率分别为18.1%、31.9%和50.0%,MDR-1 C/C、C/T和T/T基因型的发生频率分别为27.8%、58.3%和13.9%。此外,不同CYP3A5基因型肾移植受者的血Tac浓度(P=0.014)和Tac浓度/Tac用量(P=0.019)均存在明显差异,进一步两两比较发现,CYP3A5*3/*3基因型受者血Tac浓度/Tac用量明显高于*1/*1和*1/*3基因型(P均<0.05)。结论成功建立检测CYP3A5和MDR-1基因多态性的ARMS-PCR法,肾移植受者CYP3A5*3基因多态性与Tac的药代动力学明显相关。 展开更多
关键词 等位基因异性pcr 细胞色素P450酶CYP3A5 多药耐药基因MDR-1 基因多态性
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人工修饰双等位基因特异性引物结合SYBR Green Ⅰ荧光PCR法检测GSTP1基因多态性 被引量:1
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作者 李曙波 廖长秀 +1 位作者 罗莹 贺珊 《广东医学》 CAS 北大核心 2017年第13期1998-2001,2004,共5页
目的建立人工修饰双等位基因特异性引物结合SYBR Green Ⅰ荧光PCR法检测GSTP1第105个密码子基因多态性的方法,并利用该法研究GSTP1第105个密码子在广西百色市人群遗传特征,为进一步研究GSTP1基因多态性与疾病的发生易感性研究奠定基础... 目的建立人工修饰双等位基因特异性引物结合SYBR Green Ⅰ荧光PCR法检测GSTP1第105个密码子基因多态性的方法,并利用该法研究GSTP1第105个密码子在广西百色市人群遗传特征,为进一步研究GSTP1基因多态性与疾病的发生易感性研究奠定基础。方法采用人工修饰双等位基因特异性引物结合SYBR Green Ⅰ荧光PCR法技术对211例广西百色市健康成人进行GSTP1 Ile105Val基因分型,并分析是否存在性别差异及与国内外其他人群分布频率差异。结果人工修饰双等位基因特异性引物结合SYBR Green Ⅰ荧光PCR法GSTP1基因型检测结果与PCR产物测序结果一致,用此法检测出广西百色市女性和男性人群GSTP1 Ile105Val均以A等位基因为主,分别为79.7%和84.5%;AA野生纯合子型、AG杂合子型和GG突变纯合型在女性人群中分别为62.2%、35.1%和2.7%,男性人群则为71.0%、27.0%和2.0%。经统计学分析,广西GSTP1Ile105Val等位基因和基因型分布频率无性别差异,与辽宁、回族、印度、俄罗斯族等人群相应位点基因型分布频率无差异,但与国内维族、朝鲜族、蒙古族、高加索女性相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论人工修饰双等位基因特异性引物结合SYBR Green Ⅰ荧光PCR法是一种快捷、准确的基因多态性检测方法。广西人群GSTP1基因Ile105Val呈多态性分布,基因型分布频率无性别差异,与其他部分种族存在差异。 展开更多
关键词 GSTP1 Ile105Val 基因多态性 SYBR Green Ⅰ荧光pcr 人工修饰双等位基因异性引物
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等位基因特异性PCR检测脂联素基因SNP位点方法的建立 被引量:1
8
作者 胡春萍 苏何玲 +5 位作者 莫之婧 陈莉 朱华 刘青波 李康智 刘永明 《华夏医学》 CAS 2011年第4期403-406,共4页
目的:建立等位基因特异性PCR检测脂联素基因与2型糖尿病相关SNP位点的方法。方法:针对脂联素基因G531A,G545C,G11963T,T12194G和T13320C5个SNP位点设计野生型和突变型特异性引物,第一轮PCR的上游引物或下游引物与等位基因特异性引物进... 目的:建立等位基因特异性PCR检测脂联素基因与2型糖尿病相关SNP位点的方法。方法:针对脂联素基因G531A,G545C,G11963T,T12194G和T13320C5个SNP位点设计野生型和突变型特异性引物,第一轮PCR的上游引物或下游引物与等位基因特异性引物进行半巢式PCR。在同一SNP位点如果野生型引物出现扩增产物而突变型引物未出现扩增产物,则判定该位点为野生型,反之,为突变型;如两引物均出现扩增产物则为杂合子。DNA测序证实等位基因特异性PCR检测结果。结果:该等位基因特异性PCR检测方法对研究样本均有扩增,且每个SNP位点均检出相应的野生型、突变型和混合型个体。测序结果与等位基因特异性PCR检测结果吻合。结论:建立的等位基因特异性PCR检测脂联素基因SNP的方法灵敏可靠,可快速检测与2型糖尿病相关的5个SNP位点。 展开更多
关键词 等位基因异性pcr 脂联素 SNP 2型糖尿病
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应用等位基因特异性PCR和多重差别PCR检测肺癌患者CYP1A1和GSTM1的遗传多态性 被引量:13
9
作者 陈森清 许林 +2 位作者 马国建 吴建中 薛开先 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 1999年第3期119-122,共4页
本文对等位基因特异性PCR(Alelespecific,AS)和多重差别(Multiplexdiferential,MD)PCR技术进行了优化,并用此法联合检测了105例江苏地区健康人群及68例肺癌患者CYP1... 本文对等位基因特异性PCR(Alelespecific,AS)和多重差别(Multiplexdiferential,MD)PCR技术进行了优化,并用此法联合检测了105例江苏地区健康人群及68例肺癌患者CYP1A1、GSTM1的等位基因型。结果表明:ASPCR及MDPCR采用的设立双参照扩增体系,可一次同时检测CYP1A1和GSTM1的等位基因型。在肺癌患者组中,CYP1A1的突变型Val/Val的频率12/68(17.6%)约为健康组9/105(8.57%)的205倍,而GSTM1纯合缺失的频率,肺癌组为39/68(573%),与健康对照组42/105(40%)相比,亦有显著增加(P<0.05)。 展开更多
关键词 等位基因异性 肺癌 CYP1A1 GSTM1 MD-pcr pcr
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等位基因特异性引物PCR技术及其应用研究 被引量:25
10
作者 马厚勋 牛永红 +1 位作者 李章勇 谢正祥 《生物技术》 CAS CSCD 2005年第1期15-18,共4页
目的 :研究建立等位基因特异性引物PCR技术体系 ,并将其应用于基因单核苷酸多态性研究工作。方法 :通过美国国家生物信息中心 (NCBI)的genBank获取基因序列及其相应位点的SNP信息。利用Primer5 .0软件设计引物 ,并经NCBI的Blast2 .0软... 目的 :研究建立等位基因特异性引物PCR技术体系 ,并将其应用于基因单核苷酸多态性研究工作。方法 :通过美国国家生物信息中心 (NCBI)的genBank获取基因序列及其相应位点的SNP信息。利用Primer5 .0软件设计引物 ,并经NCBI的Blast2 .0软件检验其特异性。结果 :建立了单一等位基因特异性引物PCR(SASP -PCR)与嵌套式等位基因特异性引物PCR(NASP—PCR)两种技术 ,并应用于 β2 肾上腺素受体及内皮源性一氧化氮合酶基因单核苷酸多态性的研究 ,证实该技术的稳定性和优越性。结论 :等位基因特异性引物PCR技术是一种更为简便、特异性较高、费用少的、便于推广的SNP检测方法 。 展开更多
关键词 等位基因 单核苷酸多态性 异性引物 pcr技术 SNP SASP Β2肾上腺素受体 位点 推广 群体
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等位基因差异特异性PCR检测HBVDNA的前C区1896突变位点及其临床意义 被引量:5
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作者 李文清 陈玉丽 +1 位作者 王承党 林经安 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2002年第1期23-24,共2页
为了探讨HBV前C区 1896突变位点检测的临床意义,采用3-末瑞等位基因差异特异性PCR方法对95例乙型肝炎病毒感染者的HBVDNA1 896位点进行基因型(野生株/突变株)的检测,结果显示:总突变率为64.2%,总... 为了探讨HBV前C区 1896突变位点检测的临床意义,采用3-末瑞等位基因差异特异性PCR方法对95例乙型肝炎病毒感染者的HBVDNA1 896位点进行基因型(野生株/突变株)的检测,结果显示:总突变率为64.2%,总野生率为55.8%,纯野生型和纯突变型的检出率分别为28.4%和27.4%;不同临床类型的乙肝病毒感染者均可出现突变,其野生型、突变型和混合感染型的检出率之间的比较无显著性差异(P>0.05),急性乙肝与慢性乙肝、携带者、肝硬化和肝癌的总突变率存在差异(P<0.05);血清不同HBe系统均可发生突变.抗- HBe阳性组的突变率显著高于HBeAg阳性和HBe系统阴性组(P<0.05),提示:机体感染了HBV后.变异主要是发生在慢性持续性感染过程中.突变株逐渐替代了野生株并成为优势株.使宿主得以持续感染HBV。 展开更多
关键词 等位基因差异异性pcr 1896突变位点 基因 HBVDNA 慢性持续感染
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应用实时荧光PCR法建立献血者血小板特异性抗原HPA-1~6/10/15/21基因分型资料库 被引量:2
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作者 袁文声 陈前英 +3 位作者 林惠燕 方育如 郑晓兰 邝永晴 《中国输血杂志》 CAS 2023年第3期204-208,共5页
目的研究中山地区单采血小板献血者人类血小板特异性抗原HPA-1~6/10/15/21共9对抗原基因多态性区域分布特点,建立中山地区血小板献血者HPA基因分型资料库。方法用实时荧光定量PCR-TaqMan探针法对中山地区192名单采血小板献血者进行HPA-1... 目的研究中山地区单采血小板献血者人类血小板特异性抗原HPA-1~6/10/15/21共9对抗原基因多态性区域分布特点,建立中山地区血小板献血者HPA基因分型资料库。方法用实时荧光定量PCR-TaqMan探针法对中山地区192名单采血小板献血者进行HPA-1~6/10/15/21基因分型,计算基因型频率、基因频率。结果HPA-1~6/10/15/21中,HPA-4、10系统呈单特异性,只检测出aa基因型,未检出等位基因HPA-b;HPA-1、2、5、6、21基因型以aa占绝大多数;HPA-3、15具有较高的杂合度,基因型HPA-3aa、HPA-3ab、HPA-3bb频率分别是0.3073、0.4948、0.1979;基因型HPA-15aa、HPA-15ab、HPA-15bb频率分别是0.2708、0.5052、0.2240。结论中山地区血小板献血者HPA-1~6/10/15/21基因与其他地区的同类资料相比显示出地域差异性,建立HPA基因分型资料库有助于解决血小板不配合输注产生同种免疫的问题。 展开更多
关键词 实时荧光pcr 血小板异性抗原 基因频率
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用等位基因特异性PCR筛查海南省黎族人β-地中海贫血IVSII654(C→T)突变 被引量:5
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作者 周代锋 蔡望伟 +2 位作者 王政 陈倩 王小英 《海南医学院学报》 CAS 2003年第3期141-143,共3页
目的:研究海南省黎族人群β-地中海贫血IVSII654(C→T)突变的发病率。方法:应用等位基因特异性聚合酶链反应(PCR)技术筛查海南省白沙、昌江、陵水、琼中、保亭等县黎族人群中β-地中海贫血IVSII654(C→T)突变。结果:共筛查了788例黎族人... 目的:研究海南省黎族人群β-地中海贫血IVSII654(C→T)突变的发病率。方法:应用等位基因特异性聚合酶链反应(PCR)技术筛查海南省白沙、昌江、陵水、琼中、保亭等县黎族人群中β-地中海贫血IVSII654(C→T)突变。结果:共筛查了788例黎族人DNA标本,未发现β-地中海贫血IVSII654(C→T)突变。结论:IVSII654(C→T)突变不是海南省黎族人群中主要的β-地中海贫血的基因类型。 展开更多
关键词 等位基因 异性pcr筛查 海南 黎族人 Β-地中海贫血 IVSⅡ654(C→T)突变 发病率
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等位基因特异性PCR检测人线粒体DNA11778突变位点及其临床意义 被引量:3
14
作者 林经安 童绎 +2 位作者 陈君敏 陈贻凯 林玲 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期276-276,共1页
关键词 人线粒体DNA 第11778位点 视神经萎缩 LHON 基因突变 等位基因异性pcr
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利用等位基因特异性PCR检测水稻可溶性淀粉合酶基因的单核苷酸多态性 被引量:3
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作者 彭小松 朱昌兰 +5 位作者 林华 欧阳林娟 贺晓鹏 陈小荣 傅军如 贺浩华 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1080-1085,共6页
单核苷酸多态性(SNP)广泛分布于水稻基因组中,SNP分型已成为水稻遗传作图、关联分析、资源鉴定和分子标记辅助选择等研究的重要技术。本文选择水稻可溶性淀粉合酶基因SSIIIa的12个SNP位点,研究了利用等位基因特异性PCR法检测SNP的可行... 单核苷酸多态性(SNP)广泛分布于水稻基因组中,SNP分型已成为水稻遗传作图、关联分析、资源鉴定和分子标记辅助选择等研究的重要技术。本文选择水稻可溶性淀粉合酶基因SSIIIa的12个SNP位点,研究了利用等位基因特异性PCR法检测SNP的可行性。按照等位基因特异性PCR原理设计引物3'末端碱基,并根据每个SNP位点引物3'端的错配类型,在上游引物3'末端第3位引入不同的错配碱基,结果均获得了很好的扩增特异性,PCR检测结果与测序结果吻合。表明,等位基因特异性PCR是一种简便、快捷、可靠和低成本的SNP分型方法,可有效应用于水稻可溶性淀粉合酶基因的种质资源鉴定和分子标记辅助选择育种等相关研究。 展开更多
关键词 水稻 可溶性淀粉合酶基因 等位基因异性pcr(AS-pcr) 单核苷酸多态性(SNP)
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特异性等位基因PCR技术在昆虫抗药性研究中的应用 被引量:3
16
作者 孙宏迪 曹晓梅 杨振洲 《中华卫生杀虫药械》 CAS 2011年第2期141-144,共4页
特异性等位基因PCR(PCR amplification of specific alleles,PASA)是一种快速检测DNA单个碱基突变的方法,也叫做等位基因特异扩增(allele-specific amplification,ASA)、等位基因特异性PCR(allele-specific PCR,ASPCR)和放大受阻... 特异性等位基因PCR(PCR amplification of specific alleles,PASA)是一种快速检测DNA单个碱基突变的方法,也叫做等位基因特异扩增(allele-specific amplification,ASA)、等位基因特异性PCR(allele-specific PCR,ASPCR)和放大受阻突变体系(amplification refractory mutation system,ARMS)。 展开更多
关键词 等位基因异性 pcr技术 抗药性 应用 昆虫 碱基突变 快速检测 DNA
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等位基因特异性引物和TaqMan-MGB探针双抑制野生等位基因扩增的实时荧光定量PCR检测JAK2V617F突变率 被引量:2
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作者 梁国威 邵冬华 +1 位作者 何美琳 曹清芸 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1486-1491,共6页
本研究建立在外周血基因组DNA中定量检测JAK2V617F突变率的荧光定量PCR检测方法并探讨其临床应用价值。在实时荧光定量PCR分析系统中,应用等位基因突变引物和等位基因野生TaqMan-MGB探针共同抑制JAK2V617F野生等位基因扩增,从而特异性... 本研究建立在外周血基因组DNA中定量检测JAK2V617F突变率的荧光定量PCR检测方法并探讨其临床应用价值。在实时荧光定量PCR分析系统中,应用等位基因突变引物和等位基因野生TaqMan-MGB探针共同抑制JAK2V617F野生等位基因扩增,从而特异性地扩增JAK2V617F突变等位基因。通过测定不同JAK2V617F突变率标准品及其循环阈值(Ct值),建立JAK2V617F突变率定量测定方法,并对89例表观健康人外周血基因组DNA中JAK2V617F突变率进行检测。结果表明,建立的方法定量检测JAK2V617F突变率的下限为0.1%,检测JAK2V617F突变率的批内、批间平均变异率分别为4.1%和6.1%。对89例表观健康人外周血基因组DNA中JAK2V617F突变率检测显示,其中2例为JAK2V617F阳性,突变率分别为0.64%和0.98%。结论:建立的JAK2V617F突变率定量检测方法具有检测灵敏度高和重复性好的特性,适合骨髓增殖性疾病的诊断及疾病进程和疗效监测。本方法检测原理可用于各种单碱基突变率的检测,具有广泛的应用前景。 展开更多
关键词 JAK2V617F突变 骨髓增殖性疾病 实时荧光定量pcr 等位基因异性引物 TAQMAN-MGB探针 双抑 制扩增 野生等位基因
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等位基因特异性PCR技术在5-脂氧合酶基因多态性检测中的应用 被引量:2
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作者 白春英 史铁伟 +6 位作者 瑞云 于晓明 张朝军 仝丽娟 李秀君 高丽枫 周静 《山东医药》 CAS 2012年第31期28-29,共2页
目的探讨等位基因特异性PCR技术检测5-脂氧合酶基因六个位点的单核苷酸多态性(SNP)的效果。方法采集36例哮喘患者外周静脉血2 mL,用0.2%氯化钠处理收集白细胞,采用基因组DNA提取试剂盒抽提基因组DNA,采用等位基因特异性PCR(AS-PCR)法直... 目的探讨等位基因特异性PCR技术检测5-脂氧合酶基因六个位点的单核苷酸多态性(SNP)的效果。方法采集36例哮喘患者外周静脉血2 mL,用0.2%氯化钠处理收集白细胞,采用基因组DNA提取试剂盒抽提基因组DNA,采用等位基因特异性PCR(AS-PCR)法直接对已知位点的SNP进行扩增分型。针对野生型和突变型设计3'端的碱基,且倒数第二位的碱基设计故意错配的碱基,用以提高引物的特异性。结果 5-脂氧合酶六个位点的SNP检测结果准确清晰。结论采用本研究设计的引物可以对5-脂氧合酶的六个位点直接扩增分型;与测序法和限制性内切酶酶切法相比,等位基因特异性PCR技术检测5-脂氧合酶六个位点的SNP具有经济、快速、简便、易行等特点。 展开更多
关键词 等位基因异性pcr 5-脂氧合酶 单核苷酸多态性
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等位基因特异性扩增法检测脊髓性肌萎缩运动神经元生存基因缺失 被引量:3
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作者 卢丽萍 麻宏伟 姜俊 《中国当代儿科杂志》 CAS CSCD 2005年第3期228-230,共3页
目的用单链构象多态性(SSCP)、限制性片段长度多态(RFLP)的方法诊断脊髓性肌萎缩(SMA)较普遍,但方法复杂。该文采用等位基因特异性扩增法进行SMA基因诊断,以探讨该方法的实用性和特异性。方法应用等位基因特异性扩增法对40名SMA患者(Ⅰ... 目的用单链构象多态性(SSCP)、限制性片段长度多态(RFLP)的方法诊断脊髓性肌萎缩(SMA)较普遍,但方法复杂。该文采用等位基因特异性扩增法进行SMA基因诊断,以探讨该方法的实用性和特异性。方法应用等位基因特异性扩增法对40名SMA患者(Ⅰ型15例,Ⅱ型17例,Ⅲ型8例)和40名正常对照进行运动神经元生存基因(SMN)基因外显子7的基因缺失研究。所有SMA患者均经RFLP方法证实缺失SMN1基因外显子7。结果等位基因特异性扩增法检测所有SMA患者均存在SMN1基因外显子7缺失,与RFLP的结果一致(诊断符合率为100%)。结论等位基因特异性扩增是既简便又实用的SMA基因诊断方法。 展开更多
关键词 脊髓性肌萎缩 等位基因异性pcr 运动神经元生存基因
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用等位基因特异性PCR进行β-地中海贫血产前基因诊断 被引量:2
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作者 周代锋 蔡望伟 王政 《海南医学院学报》 CAS 2003年第4期210-213,共4页
目的:对两对有重型β-地中海贫血患儿家族史的夫妇进行产前基因诊断。方法:应用等位基因特异性聚合酶链反应(PCR)技术检测两对夫妇及其高风险胎儿的5种β-地中海贫血突变类型:CD41-42(-CTTT)缺失突变、IVSII654(C→T)突变、CD17(A→T)... 目的:对两对有重型β-地中海贫血患儿家族史的夫妇进行产前基因诊断。方法:应用等位基因特异性聚合酶链反应(PCR)技术检测两对夫妇及其高风险胎儿的5种β-地中海贫血突变类型:CD41-42(-CTTT)缺失突变、IVSII654(C→T)突变、CD17(A→T)无义突变、TATA盒nt-28(A→G)突变和CD71-72(+A)移码突变。结果:家系1的父亲为TATA盒nt-28(A→G)/N杂合子,母亲为CD41-42(-CTTT)/N杂合子,胎儿正常;家系2的父亲为CD41-42(-CTTT)/N杂合子,母亲为CD71-72(+A)/N杂合子,胎儿为CD41-42(-CTTT)/CD71-72(+A)双重杂合子;上述2例胎儿出生及引产后的基因分析验证结果与产前基因诊断完全一致。结论:等位基因特异性PCR能准确地对β-地中海贫血高风险胎儿进行产前基因诊断,对预防重型β-地中海贫血患儿的出生具有重要意义。 展开更多
关键词 等位基因异性pcr Β-地中海贫血 产前基因诊断 基因分析
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