一步等位基因特异扩增法检测中国人N-乙酰化酶基因型

目的建立简化的一步等位基因特异扩增法(ASA),研究中国人N-乙酰化酶(NAT2)多态性等位基因的分布。方法用一步法直接检测215名中国健康人NAT2 *5,*6,*7等位基因。结果一步法测定结果与两步法一致。215名健康中国人NAT2 *5,*6,*7 3种突变型等位基因的基因频率分别为3.3％,24.6％和10.0％。基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。野生型纯合子、杂合子和突变型纯合子分别为85,96和34人,分别占39.5％,44.7％和15.8％。结论一步法测定NAT2基因准确、方便,为临床个体化合理用药提供理论基础。

等位基因特异扩增法研究中国人CYP2D6中速代谢的相关基因

目的 建立CYP2D6 10B的等位基因特异扩增法 (ASA PCR) ,以探讨中国人CYP2D6中速代谢的基因分型。方法 采用两步扩增法得到CYP2D6 10B等位基因特异片段 ,分析健康中国汉族人CYP2D6 10B等位基因 ,并探讨基因分型结果与右美沙芬表型分型结果的相关性。结果 35名表型为极快代谢受试者 (VEMs)中 ,CYP2D6 10B以杂合子 (wt/m)为主占 5 7% ;2 9名中速代谢受试者 (IMs)以突变型纯合子 (m/m)为主占 6 9% ;慢代谢受试者 (PM)基因型为m/m。CYP2D6 10Bm/m组的MR明显大于wt/m组和野生型组 (wt/wt)。结论 ASA PCR法有快速、准确的优点 。

等位基因特异扩增法检测移植患者多药耐药基因多态性

目的:建立等位基因特异扩增法(Allele-Specific Amplification,ASA-PCR)研究移植患者多药耐药基因(multi-drug re- sistance gene,MDR1)多态性。方法:用ASA-PCR对177位肝、肾移植患者的MDR1第26外显子C3435T、第21外显子G2677T/A位点和第12外显子C1236T位点进行基因分型。结果:ASA-PCR测定结果与聚合酶链式反应-限制性片断长度多态性方法(Polymerase chain reaction-Restriction Fragment Analysis,PCR-RFLP)的测定结果一致。177例移植患者DNA标本中,C3435T:CC型69例(39.0%),CT型92例(52.0%),TT型16例(9.0%);G2677T/A:GG型39例(22.0%),GT型48例(27.1%),TT型32例(18.1%),GA型30例(16.9%),AT型24例(13.6%),AA型4例(2.3%);C1236T:CC型23例(13.0%),CT型88例(49.7%),TT型66例(37.3%)。结论:采用ASA-PCR检测移植患者MDR1多态性准确、方便,可为临床个体化用药提供理论依据。

突变阻断扩增法检测中国人CYP2D6*10、*14等位基因

目的根据突变阻断扩增原理,建立用于检测中国人CYP2D6*10及*14等位基因的方法。方法采用单管四引物法检测CYP2D6*10等位基因,建立等位基因特异扩增法检测CYP2D6*14等位基因,检测295名健康中国汉族人CYP2D6*10等位基因。结果CYP2D6*10及*14等位基因基因频率分别为55.8%和1.8%,295位受试者中包括1位*14/*14、6位*1/*14、3位*10/*14,基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡(χ2=2.15,df=5,P>0.82)。结论本室建立的CYP2D6*10、*14等位基因分析法具有方便快捷、结果准确可靠的特点。

微小按蚊A、C的PCR和同工酶鉴别比较研究

目的比较PCR和同工酶两种鉴别微小按蚊A、C亲缘种的方法。方法将现场采集后经形态初步鉴定为微小按蚊的样本,经PCR产物酶切片段长度多态性分析(PCR-RFLP)与乌头按蚊和杰普尔按蚊区分,等位基因特异扩增法(PCR-ASA)进一步鉴别微小按蚊A和C。再将用此方法鉴别后的微小按蚊羽化24h内单只虫体样本,采用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳,加以辨别区分。结果经测序验证,PCR方法可以简单明确地将微小按蚊A、C加以鉴别。几种用于鉴别的同工酶中,只有酯酶(EST)同工酶对微小按蚊A、C具鉴别意义。结论对于微小按蚊A、C的鉴别,PCR方法明显优于同工酶方法。

中国健康人群葡萄糖醛酸转移酶1A3基因多态性的测定与分析

目的建立葡萄糖醛酸转移酶1A3(UDP-glucuronosyltransferase,UGT1A3)一号外显子上-31T/C、-133C/T及-140T/C 3个位点基因型的检测方法,考察这3个位点的基因多态性在中国健康人群中的发生频率。方法 采用两步等位基因特异扩增法[two-step allele specific amplification(ASA)],设计葡萄糖醛酸转移酶1A3一号外显子的引物扩增基因组DNA,在此基础上针对每一个位点设立两个分别含有野生型或突变型引物的平行反应管,各包含一条3'端最后一位碱基分别与野生型或突变型配对的上游引物及一条相同的下游引物来扩增目的基因,采用1%琼脂糖凝胶电泳考察不同引物的扩增情况,以区分位点基因型,并抽样进行直接焦磷酸测序以验证方法的准确性。结果 123例(男89例,女34例)无亲缘关系的健康受试者中-31位点等位基因T和C的频率分别为0.776和0.224,-133位点等位基因C和T的频率分别为0.935和0.065,-140位点等位基因T和C的频率分别为0.915和0.085。UGT1A3*1/*1、UGT1A3*1/*2、UGT1A3*2/*2、UGT1A3*1/*4及UGT1A3*4/*4携带者分别有59名、17名、1名、12名及1名。结论 中国健康人群中葡萄糖醛酸转移酶1A3一号外显子-31、-133及-140位点存在遗传多态性;本试验建立的基因型测定与分析方法特异、准确,可满足UGT1A3遗传多态性研究的需要。