序列分析鉴定新等位基因HLA-B^＊1316

目的分析鉴定HLA-B位点的1个新等位基因。方法应用DNA序列分析常规PCR-SSO基因分型时发现的疑似HLA新等位基因,确认与同源性最高的HLA等位基因序列的差异。结果发现1个HLA-B位点分型结果异常的样本,其核苷酸序列与已知所有HLA-B位点等位基因序列不一致,与同源性最高的等位基因B*1302的差异,是在第3外显子区域中的第184位碱基发生了T→A的替换,导致第62位密码子由GTG→GAG,其编码的氨基酸由缬氨酸→谷氨酸。结论确认了HLA-B位点的1个新等位基因,已被WHO HLA因子命名委员会正式命名为HLA-B*1316。

新等位基因HLA-DRB1*1462的核苷酸序列分析

本研究验证一个新的HLA等位基因DRB1*1462的核苷酸序列。应用PCR-SSO和PCR-SSP基因分型技术对HLA分型,对怀疑是HLA新等位基因进行DNA测序。结果发现,该序列与已知的所有HLA-DRB1等位基因序列不一致,与HLA-DRB1*140101的序列差异仅表现在第2外显子区域中256位碱基发生了G->A的替换,导致相应的氨基酸由丙氨酸变为苏氨酸。结论:该基因是HLA-DRB1位点的一个新等位基因,已经被WHOHLA命名委员会于2006年1月30日正式命名为HLA-DRB1*1462。

HLA新等位基因HLA—A＊2451的认定

目的发现和认定1个HLA新等位基因。方法应用PCR-SSO基因分型技术筛选可能的HLA新等位基因,PCR产物测序和基因克隆DNA测序,通过软件分析基因序列及与最同源HLA等位基因序列的差异。结果检出1样本,其HLA-A位点显示出多种不一致的结果,其中包括与已知所有HLA-A等位基因谱型不一致的新谱型,其HLA-A位点第3外显子序列与所有已知HLA-A等位基因序列不一致。软件分析表明该基因序列与同源性最高等位基因A*2415的差异只是在外显子3区域中的363位碱基发生了G→A1个碱基替代,并导致相应的121密码子由ATG(M)→ATA(I)。结论该等位基因为HLA-A位点的1个新等位基因,已被WHOHLA因子命名委员会正式命名为HLA-A*2451。

幼年型与成年型强直性脊柱炎HLA*B等位基因高分辨分型研究

目的 通过对幼年型强直性脊柱炎(JAS)和成年型强直性脊柱炎(AAS)患者HLA*B等位基因进行高分辨测序分型,了解HLA-B基因多态性与JAS是否有相关性。方法 收集2019年8月—2021年12月就诊于本院的符合JAS和AAS患者各50例,采用PCR-SBT法对HLA*B位点特异性扩增,再使用ABI 3100毛细管测序仪对外显子1正向测序,外显子2、3、4、5同时进行正反向测序,采用uTYPETMHLA测序分析软件处理测序结果。结果 JAS组中男41例,女9例,AAS组中男43例,女7例,两组男女性别比例差异无统计学意义(P=0.585);JAS组发病年龄(12.5±2.9)岁,显著低于AAS组的(29.7±6.8)岁(P<0.001)。JAS组检出HLA-B*27纯合子5例占10.0%,AAS组检出HLA-B*27纯合子4例占8.0%,JAS组中45例杂合子中B*27:04、B*27:05、B*27:15、B*27:86分别为34例、6例、3例、2例,AAS组46例杂合子中B*27:04、B*27:02分别为45例、1例;HLA-B*27阳性的JAS和AAS各检出15例HLA-B*40,高分辨分型中以B*40:01:02为主要亚型。结论 HLA-B*27纯合子与等位基因HLA-B*40对JAS的早发病并无直接相关性。HLA-B*27:04是JAS和AAS主要基因亚型,HLA-B*27:05:02:01、HLA-B*27:15,在JAS中多于AAS组,携带该等位基因的患者倾向于早发。

中华(内蒙古)骨髓库蒙古族人群HLA-A、B、DRB1等位基因多态性分析

目的了解中华(内蒙古)骨髓库蒙古族人群HLA-A、B、DRB1位点基因多态性的特点。方法采用PCR-反向序列特异性寡核苷酸探针(PCR-RSSOP)杂交方法对蒙古族志愿者的HLA-A、B、DRB1位点上的等位基因作中低分辨基因分型,计算HLA-A、B、DRB1的基因频率,获取该库蒙古族HLA-Ⅰ、Ⅱ类等位基因多态性分布的初布资料。结果该库蒙古族志愿者HLA-A位点共检出16种等位基因,基因频率较高的是A*02,A*24和A*11,分别为0.5521,0.2703,0.2278;而A*25,A*69的频率最低,均为0.0039;HLA-B位点检出28种等位基因,基因频率较高的是B*40,B*15和B*13分别为0.2703,0.2162和0.1931,频率较低的是B*45,B*59均为0.0039;DRB1位点检出13种等位基因,基因频率较高的是DRB1*15,DRB1*7,DRB1*12,分别为0.2780,0.2741,0.2162,而DRB1*10的频率最低为0.0348。结论内蒙古骨髓库族志愿者HLA-DRB1等位基因频率具有内蒙地区蒙古族人群共有的遗传特征,但也有其自身的分布特点。

DNA 序列分析鉴定HLA新等位基因B^＊0740

目的确认一个中国人群中的新HLA等位基因.方法应用单倍型特异性分离(haplotype-specific extraction,HSE)技术和DNA序列分析技术鉴定HLA-B*的新等位基因.结果被检标本HLA-B位点有一个等位基因的核苷酸序列与任何已知的HLA等位基因均不同,与同源性最高的B*0705相比,在exon3区域中的605位碱基由A>T,引起编码178位的氨基酸由赖氨酸(K)变成甲硫氨酸(M).血清学分型表明新等位基因的免疫学表型仍为HLA-B7.家系分析提示,HLA- B*0740基因来源于其母亲.结论该等位基因序列为HLA-B位点的一个新等位基因,于2005年2月由WHO HLA因子命名委员会正式命名为HLA-B*0740.

HLA—DRB1^＊等位基因与肺结核的相关性研究

目的探讨人类白细胞抗原HLA-DRB1*等位基因与肺结核发病相关性,寻找与肺结核发病可能相关的HLA-DR易感基因。方法采用病例-对照的研究方法,用PCR-SSO分型技术对80名肺结核患者和105名健康对照者的HLA-DRB1基因分型,统计分析比较基因频率和相对危险率。结果肺结核病组中的HLA-DRB1*14频率明显高于对照组(10.63%vs3.81%),差异有显著性统计学意义(χ2=6.6955,P<0.05),相对危险率2.91。结论HLA-DRB1*14基因可能与肺结核的易感性相关。

HLA-A新等位基因HLA-A＊2468的核苷酸序列分析

人类白细胞抗原（HLA）系统是目前所知最为复杂的人类遗传多态性系统，其复合体定位于6号染色体的短臂上，包括多个基因座位，每一个座位上有多个等位基因，目前发现的HLA等位基因已超过2799个^[1]。随着HLA分型技术的不断发展以及HLA研究的深入，新的等位基因被陆续发现^[2]。

HLA-DPB1等位基因与四川汉族人哮喘的相关性研究

目的:探讨HLA-DPB1等位基因与哮喘之间是否存在相关性,从基因水平探讨支气管哮喘的发病机制。方法:用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)分析法,检测四川汉族人HLA-DPB1基因多态性。用PCR技术对HLA-DPB1基因第2外显子(exon 2)进行体外扩增;然后用Ban II、Fok I、Dde I、Rsa I、EcoN I、BstU I 6种限制性内切酶对扩增产物进行酶切,电泳分离酶切片段,根据片段格局确定相应基因型别。结果:PCR扩增在327 bp有HLA-DPB1 exon 2目的基因产生。限制性内切酶酶切HLA-DPB1后,共检测到12种等位基因。HLA-DPB1*0201在哮喘患者组的出现频率显著低于对照组(P<0．05,RR=0．115<1)。结论:HLA-DPB1* 0201可能为支气管哮喘的抗性基因。

HLA新等位基因A*3018的序列分析和确认

为了识别和确认中国汉族人群中的HLA新等位基因,使用PCR-SSP、FLOW-SSO以及PCR-SBT等HLA分型技术,发现样本A位点的杂合结果A*240201,300101在外显子2有3个位置与数据库不相符。用组特异性引物分别扩增A*24及A*30基因,对外显子2、3、4进行双向测序,发现1个与A*300101序列相近的新等位基因。分析该等位基因与A*300101序列的差异。用EB病毒感染外周血B淋巴细胞,建立该等位基因的无限增殖化B淋巴细胞系。结果表明:该基因与A*300101相比在外显子2有3个碱基的改变,碱基121A→C、123T→C导致密码子17AGT->CGC,17S(丝氨酸)→R(精氨酸);碱基126A→G导致密码子18GGA→GGG,18G(甘氨酸)→G(甘氨酸),该氨基酸是同义突变。成功建立了该等位基因的无限增殖化B淋巴细胞系,该基因序列已提交GenBank,编号为DQ872509。结论:该等位基因为新的HLA-A等位基因,已于2006年8月被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为HLA-A*3018(上报编号HWS10004039)。

山东沿海地区碘营养状况和HLA等位基因DRB1*0301、DQB1*0602对自身免疫性甲状腺疾病发病的影响

目的 将山东沿海地区碘营养状况和HLA DRB1 0 3 0 1、DQB1 0 60 2等位基因等因素结合起来分析 ,观察它们对自身免疫性甲状腺疾病 (AITDs)发病的影响。方法 应用多聚酶链反应 序列特异性引物 (PCR SSP)技术 ,对已确诊的Graves病 (GD) 90例 ,桥本甲状腺炎 (HT) 43例和正常对照 90例 ,扩增其HLA等位基因DRB1 0 3 0 1、DQB1 0 60 2的目的DNA片段。同时采用国家标准化方法砷铈催化分光光度法测定不同人群尿碘浓度。结果 山东沿海地区GD和HT患者尿碘中位数显著高于对照组 (P <0 .0 5 )。GD和HT组尿碘浓度高于 3 0 0 μg/L者分布频率均显著高于对照组 (P <0 .0 5 )。DRB1 0 3 0 1( -)GD、HT患者尿碘中位数显著高于DRB1 0 3 0 1( -)的对照组 (P<0 .0 5 ) ;DQB1 0 60 2 ( +)GD、HT患者尿碘中位数显著高于DQB1 0 60 2 ( +)的对照组 (P <0 .0 5 )。多因素logistic回归分析发现尿碘浓度对数、DRB1 0 3 0 1与GD、HT的发病呈正相关 ,DQB1 0 60 2与GD、HT的发病呈负相关。结论 该地区GD、HT患者的碘摄入量偏高 ;碘和HLA等位基因DRB1 0 3 0 1、DQB1 0 60 2共同影响GD。

高致敏肾移植患者的HLA等位基因选择性配型的临床意义

目的探讨HLA的选择性配型在高致敏的肾移植患者中的意义。方法采用ELISA法检测12例肾移植患者术前的群体反应性抗体（panel reactive antibody,PRA）并分析其特异性。供、受者的HLA分型方法为PCR-SSP（PCR-sequence specific primers）技术。结果 12例肾移植患者的PRA含量为15.17%~38.70%。组织配型有2例患者HLA匹配5个位点（16.67%,2/12）,6例患者匹配4个位点（50%,6/12）,4例患者匹配3个位点（33.33%,4/12）。临床肾移植术后,经常规免疫抑制治疗,10例患者的血肌酐降到110μmol/L以下,2例患者发生急性排斥,经冲击治疗逆转。结论高度致敏肾移植患者选择性HLA配型可以降低由PRA所致的高风险。

中国北方汉族泛发型白癜风与HLA-DRB1等位基因的相关性

目的:探讨HLA-DRB1等位基因与中国北方汉族泛发型白癜风的相关性。方法:采用聚合酶链反应-序列特异引物(PCR-SSP)技术检测34例北方汉族泛发型白癜风患者的HLA-DRB1等位基因。结果:与262例正常对照组相比较,泛发型白癜风患者HLA-DRB1*0701/02、DRB1*1201/02基因频率显著增高(Pc<0.0001),HLA-DRB1*0901、DRB1*11基因频率降低(但经校正后Pc>0.05);有明确家族史的患者HLA-DRB1*1201/02基因频率显著增高(Pc<0.0001);无家族史者HLA-DRB1*0701/02基因频率显著升高(Pc<0.0001),DRB1*1201/02基因频率显著增高(经校正后Pc>0.05),DRB1*0901基因频率降低(经校正后Pc>0.05)。结论:中国北方汉族人群,HLA-DRB1*0701/02、DRB1*1201/02等位基因可能与泛发型白癜风的发病有关,而DRB1*0901、DRB1*11等位基因可能是防止其发病的“保护因子”,为进一步揭示泛发型白癜风的易感基因及免疫遗传发病机制提供线索。

HLA-B新等位基因B*3936的确认和测序分析

本研究确认HLA新等位基因HLA-B*3936并分析其序列。先证者为脐血造血干细胞捐献者,样本DNA抽提采用PEL-FREEZ抽提试剂盒,利用单链特异性引物PCR方法扩增先证者HLA-B基因的第2-4外显子,对PCR产物直接进行第2、3、4外显子双向测序分析。结果显示:先证者样本中存在2个HLA-B等位基因,其中1个等位基因为HLA-B*4002,另1个经Blast验证确定为新的等位基因,新的等位基因序列已递交GenBank(DQ242650,DQ242651,DQ242652)。与最接近的B*3901等位基因比较,新的等位基因在第3外显子上有4个核苷酸的差异,其中第527位T→A、第538位C→T、第539位T→G、第544位A→G,这引起氨基酸第152位缬氨酸(Val)→谷氨酸(Glu)、第156位异亮氨酸(Ile)→色氨酸(Trp)、第158位苏氨酸(Thr)→丙氨酸(Ala)。实验结果提示该等位基因为新的HLA-B等位基因,已被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为HLA-B*3936。

维吾尔族、汉族慢性胃炎患者中HLA-DRB1*12等位基因与幽门螺杆菌感染的关系

目的:探讨慢性胃炎患者HLA-DRB1*12等位基因与幽门螺杆菌(Hp)感染的关系。方法:采用Hp分离培养技术检测36例汉族、33例维吾尔族慢性胃炎患者的Hp感染情况,并采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法检测HLA-DRB1*12等位基因多态性。结果:汉族、维吾尔族慢性胃炎患者Hp阳性率分别为56%、79%,维吾尔族明显高于汉族(P<0.05);维吾尔族与汉族慢性胃炎患者Hp(-)者的HLA-DRB1*12等位基因检出率高于Hp(+)者,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:维吾尔族慢性胃炎患者Hp阳性率可能高于汉族,维吾尔族与汉族慢性胃炎患者中HLA-DRB1*12等位基因可能与Hp感染无关。

HLA—B^＊27高分辨等位基因在1606例疑似强直性脊柱炎患者中的表达

目的:探讨HLA-B*27高分辨等位基因分析对强直性脊柱炎(AS)诊断和鉴别诊断的临床应用价值。方法:采用PCR-SSP和PCR-SBT技术对2004年1月-2008年3月本院收治的广东地区1606例骨和关节疾病(OAP)患者(其中确诊AS患者1022例)进行了HLA-B*27低分辨和HLA-B*27高分辨的基因频率调查和分析。结果:OAP患者中B*27高分辨基因频率(70.50%,141/200)高于B*27低分辨基因频率(41.82%,588/1406)(P<0.001);1022例AS患者中高分辨的B*27基因频率(84.21%,121/133)也高于B*27低分辨基因频率(44.77%,398/889)(P<0.001)。HLA-B*27阳性患者表达出的HLA-B*27等位基因为B*2704占88.44%(459/519),B*2705占9.83%(51/519),B*2702占1.73%(9/519)。结论:高分辨技术能够准确检测HLA-B*27阳性患者,AS患者在不同地区或人群所表现出的HLA-B*27易感基因不同;应用高分辨技术进行HLA-B*27等位基因分型,将有益于提高AS早期诊断和鉴别诊断,发挥对AS预后预测和治疗选择的临床应用价值。

HLA等位基因A＊02：446的鉴定及家系遗传调查

人类白细胞抗原（humanleukocyteantigen，HLA）是目前所知人类最复杂的基因遗传系统，具有高度的多态性、单倍型遗传及共显性遗传特点。临床实践表明，同种异体移植（除同卵双生子外）的排斥应是成功率的最大障碍。依其遗传特点，同胞兄妹之间可有HLA相合、半相合和不相合3种情况。

HLA等位基因DQA_1^*0501、DQA_1^*0201与自身免疫性甲状腺疾病的相关性

目的 在山东沿海地区自身免疫性甲状腺疾病流行病学调查的基础上 ,应用多聚酶链反应 序列特异性引物 (PCR SSP)技术对HLA等位基因DQA1 0 5 0 1、DQA1 0 2 0 1在GD、HT和正常对照人群中的基因表达频率进行分析 ,以研究山东沿海地区人群HLA DQA1等位基因与GD、HT的相关性。方法 ①对象 :AITD组分为GD组 90例 (男 2 2例 ,女 6 8例 ,平均年龄 33.3± 13.0岁 ) ,HT组 4 3例 (男 3例 ,女 4 0例 ,平均年龄 38.2± 15 .1岁 )。正常对照组 6 0例 (男 2 7例 ,女 33例 ,平均年龄 32 .6±12 .0岁 ) ,均来自山东沿海地区 (青岛、烟台、威海、日照 )甲状腺疾病流行病学调查人群和上述地区在青岛大学医学院附属医院就诊的AITD患者。②方法 :( 1)用酚 氯仿三步法抽提人外周血白细胞基因组DNA ;( 2 )采用Olerup等的PCR SSP法扩增HLA DQA1 0 5 0 1和DQA1 0 2 0 1的目的基因片段 (分别为 186bp、170bp)。在PCR扩增仪经 94℃预变性 4min ,94℃变性4 5s,6 0℃退火 5 0s ,72℃延伸 4 5s ,30个循环后 72℃延伸 5min完成扩增反应。将PCR产物在含溴化乙锭的 2 0g·L-1( 2 .0 % )琼脂糖凝胶上电泳 ,80V ,电泳 30min ,在紫外透射仪下观察DNA阳性条带 ,确定基因型。③统计学处理 :将基因型结果输入计算机 ,应用SSPS统计软件计算各?

南方汉族慢性髓细胞性白血病与HLA-DPB1等位基因的相关性研究

为了探讨慢性髓细胞性白血病 (CML)与人类白细胞抗原 (HLA)DPB1基因的相关性和分析其遗传易感性 ,采用测序分型技术 (SBT)对 86例主要为广东藉的南方汉族CML患者和 82例健康对照者进行HLA DPB1基因分型。结果表明HLA DPB1 130 1和DPB1 2 0 0 11的基因频率在病例组高于对照组。结论

别嘌呤醇所致的严重皮肤不良反应与HLA~* B-5801等位基因相关性的研究进展

目的:综述别嘌呤醇所致的严重皮肤不良反应与HLA~*B-5801等位基因相关性的最新研究进展。方法:检索并整理国内外与本研究目的相关的文献,从别嘌呤醇所致的严重皮肤不良反应和HLA~*B-5801等位基因的相关性在不同地区人群中的研究情况及其发生机制两方面,综述最新研究进展。结果:别嘌呤醇所致的严重皮肤不良反应和HLA~*B-5801等位基因的相关性,在亚洲人群中存在显著相关性,而在欧美人群中这种相关性并不明显。结论:初次使用别嘌呤醇的患者(特别是中国汉族人群)用药前最好进行HLA-B~*5801等位基因检测,对于该等位基因阳性患者,不建议使用别嘌呤醇而应采取别嘌呤醇诱导耐受方案或者药物替代治疗。