四等点控制下RTK图根测量点位精度分析

阐述了地形图测绘中,在四等三角点控制下直接采用RTK进行图根点测量的作业方法,对图根点的测量精度进行了检核,可以满足1∶2000地形图对图根点的精度要求,省时、省力、省钱,在小面积地形图测绘中可采用。

动力系统(X,N,f)的稳定点

本文在βN上定义了一个新型的二元运算“-”并发现它与βN上著名的二元运算“+”具有某种联系。我们还证明了在(βN,N,σ)系统中存在幂等点u∈βN\N,使u既是循环点,又是稳定点。

LED等点、线光源在城市夜景艺术中的正确应用

本文通过绘画艺术与建筑艺术之间的关系，阐述如何正确的使用LED等点、线光源的应用。

半夏种茎的薄层等电聚焦电泳鉴别

目的:研究半夏种茎的薄层等电聚焦电泳鉴别方法。方法:对不同产地成熟期和发芽期半夏种茎进行蛋白质圆盘IEF电泳和薄层IEF电泳图谱的比较。结果:不同产地发芽期半夏种茎的蛋白质圆盘IEF电泳图谱有一定差别,但同一产地半夏发芽期的圆盘IEF电泳图谱相同;成熟期和发芽期半夏的薄层IEF的谱带基本一致,只是浓度略有差别。结论:薄层IEF电泳的分辨率较高,不同产地半夏种茎的薄层IEF电泳图谱较为稳定,可用于半夏种茎的真实性鉴定。

γ射线诱导人卵巢癌细胞G2-染色单体断裂与修复

应用早熟染色体凝集技术研究了γ-射线诱导人卵巢癌细胞G2-染色单体断裂畸变的剂量效应与畸变修复的时间效应。结果表明:G2-染色单体型断裂畸变(chromatid-type breaks)与辐射剂量呈线性关系;G2-等点染色单体型断裂畸变(iso-chromatid breaks)与辐射剂量呈线性平方关系。2Gyγ-射线诱导的G2染色单体断裂畸变随着孵育时间的延长发生了明显的连接即修复,对G2-染色单体型断裂畸变,有近65％的断裂在辐射后24h内得以修复;对G2-等点染色单体型断裂,在辐射后24h内只有20％左右得以修复,两类断裂畸变的修复主要发生在辐射后2h内,在辐射后12-24h内染色体断裂量趋于稳定,表明修复基本完成。

蛋白质组学研究的有效工具——双向电泳鉴定技术

在当今生命科学研究的热门领域蛋白质组学研究中,双向电泳技术是分离检测细胞、细胞系、器官和组织的总蛋白质组的最有效的方法.双向电泳技术是根据蛋白质等电点和分子量两个相互独立的参数,在相互垂直的两个方向进行二次电泳的过程,其主要步骤包括样品制备、电泳、凝胶染色和图像分析.本文就双向电泳的步骤、技术特点、缺陷和发展前景进行简述.

基于双特异性抗体的全柱成像毛细管等电聚焦电泳方法开发策略

双特异性抗体是治疗性抗体领域的研究热点,抗体药物的质量控制也一直是生物制药企业和法规机构的关注重点。全柱成像毛细管等电聚焦电泳(Whole-Column Imaging Detection for Capillary Isoelectric Focusing,WCID-CIEF)是检测治疗性双特异性抗体等电点(Isoelectric point,p I)与电荷异质体的有效方法,但由于双特异性抗体分子本身的结构与理化性质复杂,通常需要针对特定分子进行方法开发或优化,以保证分析方法的专属性和良好的分离效果。本文基于双特异性抗体对全柱成像毛细管等电聚焦电泳的方法开发策略进行概述,包括添加剂、载体两性电解质种类与比例、占位剂、上样量、等电点标记物以及工作溶液稳定性等方面,以期为国内双特异性抗体研究与生产提供方法开发上的技术参考。

一种渐开线圆柱齿轮离散点模型的建立方法

在众多的齿轮检测方法中,坐标测量法越来越受重视,但目前数据仅能通过实验测量方法获得,不利于研究的深入开展。针对这一问题,提出了一种渐开线圆柱齿轮离散点模型的建立方法;给出了该模型的存储结构、坐标系的建立方法、各离散点的计算方法;选取合适的变量和步长计算方法,使得离散点的点距近似相等;通过实验验证了建模方法的可行性。齿轮离散点模型模拟了坐标测量的测量数据,为齿轮坐标测量的研究提供了一种研究对象,有助于提升我国齿轮产业的技术水平。

成像毛细管等点聚焦电泳法对单克隆抗体制品的电荷异质性分析

目的:采用成像毛细管等点聚焦电泳法分析单克隆抗体制品的电荷异质性。方法:应用优化的成像毛细管等点聚焦电泳技术,对2种单克隆抗体制品酶切处理前后进行电荷异质性分析。结果:羧肽酶B处理前后的抗体1成像毛细管等点聚焦电泳结果比较证明其电荷异质性主要由C末端赖氨酸不均一性引起;羧肽酶B处理和/或N-糖苷酶处理前后的抗体2成像毛细管等点聚焦电泳结果比较证明其电荷异质性主要由C末端赖氨酸不均一性和N-糖的唾液酸修饰引起。结论:采用优化的成像毛细管等点聚焦电泳技术,可较好地分析单克隆抗体产品的电荷异质性;并且配合合适的酶切处理,可判断单克隆抗体产品主要电荷异质性的来源,为保证单克隆抗体产品技术药物生产工艺的稳定性及质量控制提供了有效手段。

重组假丝酵母尿酸氧化酶等电点毛细管等电聚焦检测方法的建立及验证

目的建立检测重组假丝酵母尿酸氧化酶等电点(isoelectric point,pI)的毛细管等点聚焦(capillary isoelectrie focusing,cIEF)方法,并进行验证。方法通过优化cIEF过程中稳定剂比例、聚焦时间等参数,建立cIEF方法,并对方法的专属性、精密度、准确性、耐用性进行验证。结果确定稳定剂精氨酸(arginine,ARG)︰亚氨基二乙酸(iminodiacetic acid,IDA)比例60μL︰6μL,聚焦时间15 min为最适条件。样品基质在重组假丝酵母尿酸氧化酶主峰位置无干扰峰;重复性、中间精密度、批间精密度验证相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)分别为0.81%~0.87%、0.91%~1.5%和0%~0.79%;3-10两性电解质载体、cIEF凝胶、毛细管柱等物料批号改变,方法不受影响。结论建立的cIEF方法专属性、精密度、准确度、耐用性良好,适用于重组假丝酵母尿酸氧化酶pI的检测。

成像毛细管等电聚焦技术分析重组人促红素异质性

目的:应用成像毛细管等电聚焦分析重组人促红素(rhEPO)的异构体和等电点。方法:首先对成像毛细管等电聚焦电泳技术进行了条件优化,并用优化的方法分析了rhEPO候选国家理化标准品和来自不同生产企业的10批rhEPO产品。根据成像毛细管等电聚焦电泳分析结果和体内生物学活性结果进一步分析了rhEPO糖链异构体与体内比活性的相关性。结果:优化的成像毛细管等电聚焦电泳技术可获得蛋白特异性图谱,可较好地分析重组人促红素的异构体和等电点。通过统计分析表明,成像毛细管等电聚焦电泳分析rhEPO的第2、3和4峰含量和体内生物学比活性之间存在正相关,第1和第6峰含量和体内比活性之间存在负相关。结论:成像毛细管等电聚焦技术能够分析重组人促红素的异构体和等电点,相关性分析显示异构体的组成与体内比活性相关,异质性分析在重组人促红素的质量控制中具有重要意义。

抗体偶联药物抗CD30-vc-MMAE的异质性分析

目的建立一种基于半胱氨酸偶联方式的抗体偶联药物(antibody-drug conjugates,ADCs)抗CD30-vc-MMAE异质性分析的质控方法。方法本实验应用了分子排阻色谱(SEC-HPLC)、毛细管电泳(CE-SDS)以及实时成像毛细管等电聚焦电泳(iCIEF)等分析方法,对抗体偶联药物抗CD30-vc-MMAE的大小异质性和电荷异质性进行了分析。结果SEC-HPLC分析的纯度为(95.69±0.01)%;还原CE-SDS分析的纯度为(98.38±0.25)%,非还原CE-SDS可分离开6个主要峰,纯度之和为(97.82±0.44)%;和裸抗药物类似,iCIEF可有效的将酸区,碱区和主峰抗体进行较好地分离,主峰区的峰面积百分比为(43.52±2.03)%。结论初步建立了一种基于半胱氨酸偶联方式的ADC药物抗CD30-vcMMAE异质性分析的质控方法 ,为此类生物制品的质量控制提供参考。

蛇毒血凝酶纯度分析方法研究

目的:建立蛇毒血凝酶纯度测定方法。方法:分别采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)和等电聚焦法(IEF),对凝胶考染并扫描;采用体积排阻高效液相色谱法(SEC-HPLC),使用TSK G3000SW(7.8 mm×300 mm)凝胶柱,流动相为55 mmol.L-1柠檬酸钠-0.01%Tween 80溶液;流速0.5 mL.min-1,检测波长280 nm;采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC),使用C8Vydac(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为0.1%三氟乙酸溶液(A)-含0.1%三氟乙酸的90%乙腈(B),梯度洗脱,流速0.8 mL.min-1,;柱温为45℃,检测波长:280 nm。结果:4种方法测得蛇毒血凝酶的纯度分别为89.3%,88.5%,95.4%,87.4%。结论:对于蛇毒血凝酶纯度测定,非还原SDS-PAGE、IEF及RP-HPLC法均可准确地反映其样品纯度。

肝癌细胞辐射敏感性与G_2期染色体畸变的线性关系及其应用研究

目的研究人肝癌细胞系HepG2细胞辐射敏感性与G2期染色体断裂畸变关系及临床应用的可行性。方法用Calyculin-A诱导的早熟染色体凝集技术测定细胞G2期染色体断裂畸变,用克隆形成实验测定细胞受照后的克隆形成率。结果γ射线照射24h后,G2期细胞内残存的等点染色单体断裂和染色单体型断裂与剂量之间存在良好的相关性;两类畸变与受照后的细胞存活分数均有一定的相关性,但等点染色单体断裂畸变的相关性(r为0·989)比染色单体型的(r为0·853)强。结论细胞照后24h,残存G2等点染色单体断裂畸变可以作为预测HepG2细胞内在辐射敏感性的指标,也可为临床诊断和治疗肝癌提供依据。

海南单柄蛛毒素杀虫肽HNTXa的分离与性质分析

为了从海南单柄蛛Ornithoctonus hainana毒素中获得对哺乳动物无毒而对昆虫有毒杀作用的单一蛋白组分,应用反相层析和阳离子交换对海南单柄蛛粗毒素进行分离纯化。分别通过胸腔注射、腹腔注射和饲喂的方法测定各毒素组分对蟋蟀、小鼠和棉铃虫的毒性作用,并采用改进的寇式法计算LD50。分离得到一种新的杀虫肽,命名为海南单柄蛛毒素a(Hainana toxica,HNTXa),聚丙烯酰胺等点聚焦电泳(IEF-PAGE)分析其等电点为8.15～8.45。杀虫肽HNTXa对棉铃虫和蟋蟀有较强的抑制作用。棉铃虫经饲喂浸沾HNTXa的棉花叶片72h后,死亡率超过30%;HNTXa对蟋蟀的LD50值为58μg/g,LD50的95%置信区间为55～62μg/g;HNTXa对哺乳动物小鼠无明显毒性。

鳕鱼排分离蛋白的提取工艺研究

为了充分利用鳕鱼加工副产品鳕鱼排,采用等点促溶促沉法提取鱼排分离蛋白,以蛋白质提取率为指标,在单因素试验基础上,利用正交试验探讨碱液pH,提取温度,提取时间和料液比对鱼排分离蛋白提取率的影响。在电动搅拌器辅助碱提的条件下,确定鱼排分离蛋白最优提取条件为碱液pH13.5,提取温度40℃,提取时间2.5h,料液比1:10(g/mL)。在此条件下,蛋白质的提取率可达到47.68%。鱼排分离蛋白的最佳沉淀点为4.5,蛋白质沉淀率为70.26%,沉淀经冷冻干燥得到的蛋白粉中蛋白质含量为73.33%。