超声波协同等电点沉淀法提取螺旋藻藻胆蛋白工艺的优化

以螺旋藻粉为原料,通过正交试验,对超声波细胞破碎及等电点沉淀提取藻胆蛋白进行研究,并优化其工艺条件。结果表明,在藻液质量分数5%、630W(额定功率为900W)条件下超声20min,效果最佳;而采用冰醋酸作为等电点沉淀介质,在pH4.0的条件下,从提取液中低温沉淀藻蛋白,其操作较为简便。由于冰醋酸溶液易挥发分离,简化了生产工艺。最后通过冷冻干燥,得到粗蛋白粉末。利用本法优化工艺后,提取液中藻蓝蛋白的含量高达4.36%;而经沉淀干燥得到的粗蛋白粉末得率为52.5%,其中藻蓝蛋白含量为7.7%、别藻蓝蛋白含量为7.9%、藻红蛋白含量为0.8%。

酸/碱溶解-等电点沉淀法回收罗非鱼蛋白的工艺优化及蛋白组成分析

以罗非鱼(Oreochromis niloticus)肉为原料,采用酸/碱溶解-等电点沉淀法回收罗非鱼肌肉蛋白,主要探讨溶解p H值、料液比和溶解时间对可溶性蛋白得率以及沉淀p H值对可溶性蛋白沉淀得率及蛋白亚基组成的影响.结果表明,酸/碱溶解回收罗非鱼肉可溶性蛋白的最佳p H值为p H2.0、3.0、11.0和12.0,料液比1∶9(ω/v),溶解时间10 min,可溶性蛋白种类齐全,包含了典型的鱼蛋白电泳条带;酸/碱可溶性蛋白的最佳沉淀条件为p H 5.5,在此条件下,溶解-沉淀过程的蛋白得率分别为61.59%-64.95%.与鱼肉蛋白相比,四种分离蛋白中盐溶性蛋白的比例均升高,水溶性蛋白的比例均降低(p<0.05).比较而言,碱溶-等电点沉淀过程中鱼蛋白的变性程度较小,其水溶性组分和盐溶性组分所占的比例均较高,组成相对比较齐全,而酸提蛋白中肌球蛋白重链部分降解,少量肌浆蛋白损失.因此,碱溶-等电点沉淀法更有利于回收鱼肉分离蛋白.

超滤芝麻蛋白和等电点沉淀芝麻蛋白的功能特性比较

研究超滤法和等电点沉淀法制备的芝麻蛋白（分别以UF-SP和IEP-SP表示）在功能特性方面的差异.结果发现：UF-SP和IEP-SP的吸油性及持水力差异不显著（P〉0.05）;在pH 2.0~10.0范围内,UF-SP和IEP-SP的溶解性、乳化性、发泡性和泡沫稳定性均呈pH依赖性,并具有相似的变化趋势.与IEP-SP相比,除在pH 8.0~10.0范围内UF-SP的泡沫稳定性低于IEP-SP之外,UF-SP均表现出较好的功能特性.为芝麻饼粕蛋白资源的开发利用提供一定参考.

等电点沉淀-超滤提取猪血SOD

本研究利用超滤和等电点沉淀等技术,建立了猪血超氧化物歧化酶(SOD)生产的简便工艺。该工艺用等电点沉淀、热变性方法除去血红蛋白,用超滤技术浓缩和纯化SOD,减少了传统方法中有机溶剂的使用,减轻了对环境的危害。此试验制得的SOD收率、纯度、比活等方面均得到了较大的提高,500mL猪血可以得到SOD35mg,比活为6171U/mg,纯度为95.3%。

三种泵用胰岛素体外对抗等电点沉淀的研究

目的比较三种市售泵用胰岛素对抗等电点沉淀的效果。方法通过加入稀释盐酸的方法模拟p H值下降过程中,用高效液相色谱(HPLC)测定三种胰岛素(重和林R、诺和灵R、优泌林R)等电点沉淀情况。并采用高斯拟合的方法绘制出沉淀曲线,并得出三种胰岛素发生沉淀时的p H值。结果重和林R、诺和灵R和优泌林R在出现10%和90%沉淀时的p H值分别为6.52和5.82,6.85和6.00,6.68和5.94。结论重和林R开始出现沉淀的p H值最低,对抗等电点的作用最强,其次是优泌林R,诺和灵R最差。胰岛素等电点会引起胰岛素构象改变发生沉淀,阻塞胰岛素泵,进而引起血糖控制不佳。但本研究仅在体外比较了胰岛素对抗等电点沉淀的不同,与临床中胰岛素泵堵塞之间作用的机制仍需进一步研究。

低温等电点沉淀法提取头发中的L-精氨酸

用低温等电点沉淀法对头发中L-精氨酸的提取工艺条件进行了研究,考查了头发水解条件、沉淀剂的种类及用量、pH值、氯离子浓度、提取温度等因素对L-精氨酸产量的影响.实验结果表明:在pH值10、温度0℃,氯离子浓度为2.1 mol/L2、mL苯甲醛作沉淀剂时,30 mL头发水解液中L-精氨酸的产量为0.139 g.

等电点沉淀提取蛋白和漂洗鱼糜蛋白的高温胶凝特性

研究不同加热温度(100、110、120℃)和时间(15、30、60 min)对等电点沉淀法(isoelectric solubilization precipitation,ISP)提取蛋白与漂洗鱼糜蛋白高温胶凝特性的影响,以白鲢为原料,分别测定凝胶强度、持水性、色泽、化学作用力、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳。结果表明,ISP蛋白凝胶的破断力低于漂洗蛋白凝胶,凹陷深度高于漂洗蛋白凝胶。漂洗蛋白凝胶和ISP蛋白凝胶获得最高凝胶强度的热处理温度分别为110℃和100℃。随着加热时间的延长,凝胶的破断力和凹陷深度降低。ISP蛋白凝胶的持水性不受热处理条件的影响,而漂洗蛋白凝胶的持水性随加热时间的延长而降低,ISP蛋白凝胶的持水性低于漂洗蛋白凝胶。漂洗蛋白凝胶的亮度值(L^*)和白度值(W)高于ISP蛋白凝胶,随着加热时间的延长,漂洗蛋白凝胶的L^*值和W值呈下降趋势,而ISP蛋白凝胶的L^*值和W值呈上升趋势。高温处理过程中,ISP蛋白凝胶和漂洗蛋白凝胶的离子键和氢键含量呈先上升后下降趋势,而疏水相互作用和总巯基含量整体呈下降趋势;漂洗蛋白凝胶和ISP蛋白凝胶的肌球蛋白重链条带消失,肌动蛋白和原肌球蛋白等蛋白条带强度逐渐下降。

超声波辅助酸/碱溶解等电点沉淀法提取鸡架分离蛋白的组成及其凝胶特性

利用高强度超声(high intensity ultrasound,HIU)辅助酸/碱溶解等电点沉淀(isoelectric solubilization/precipitation,ISP)法提取鸡架分离蛋白(protein isolate,PI),采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳研究PI组成,并分析PI凝胶特性。结果表明:PI主要由肌原纤维蛋白组成;酸溶解会导致肌球蛋白重链降解,HIU可减弱降解程度;碱溶PI凝胶的硬度、蒸煮损失率、离心损失率与对照(鸡胸肉糜凝胶,后同)无显著差异,显著高于酸溶PI凝胶(P<0.05);HIU显著提高了酸溶PI凝胶的硬度和弹性(P<0.05),降低了蒸煮损失率及离心损失率(P<0.05);PI凝胶白度均显著低于对照(P<0.05)。碱溶PI凝胶对水分子的结合力和束缚力均优于酸溶PI凝胶;碱溶PI凝胶与对照凝胶均具有均匀致密微观结构,而酸溶PI凝胶微观结构明显粗糙、不均匀。结论:HIU辅助碱溶ISP法可高效提取鸡架中肌原纤维蛋白并保持其凝胶特性,有助于鸡架增值利用。

等电点沉淀结合凯氏定氮法测定市售纯牛奶中酪蛋白的含量

在酪蛋白测定方法的前期研究基础上,对等电点沉淀法进行改进,结合凯氏定氮法对市售纯牛奶中的乳蛋白组分进行了测定。确定了制备纯品酪蛋白的最佳洗涤剂和洗涤次数,NaOH溶液碱复溶酪蛋白等电点沉淀物最佳添加范围。实验结果表明,改进后的等电点沉淀方法,测定酪蛋白质量分数都在74%~76%。pH4.6HAc-NaAc缓冲溶液作为洗涤剂,对于体系pH的维持更加稳定。仅沉淀的处理方式可以将大部分乳清蛋白和酪蛋白进行分离。NaOH溶液最佳添加范围是25mL^35mL。改进后的等电点沉淀结合凯氏定氮法高效准确,简单易行,重现性好,可以用于纯牛奶中酪蛋白的掺假鉴定。

蓝圆鲹酸/碱等电点沉淀法分离蛋白凝胶特性与消化特性

采用酸/碱等电点沉淀(isoelectric solubilization/precipitation,ISP)法制备蓝圆鲹肌肉分离蛋白(acid/alkaline aided protein isolate,API/KPI),并对全蛋白(total protein,TP)、肌原纤维蛋白(myofibrillar protein,MP)与分离蛋白的理化特性、凝胶特性以及消化稳定性进行比较研究。结果表明,蓝圆鲹肌肉蛋白在碱性条件下溶解性显著高于酸性条件,经优化后的API与KPI的回收率分别为65.0%与84.6%,显著高于MP(54.0%)。KPI、API与MP的脂肪与灰分含量明显低于TP,其中KPI的粗蛋白含量最高。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示KPI与API的蛋白组成与TP相近,但KPI与API的氨基酸组成中甘氨酸与脯氨酸含量显著低于TP。质构与流变学分析结果显示,KPI与API的凝胶强度与储能模量(G’)均明显低于TP与MP,其中TP、MP与KPI的储能模量在50~55 ℃会出现明显的下降趋势,表明发生凝胶劣化现象,而API组无明显变化。扫描电子显微镜结果表明,与90 ℃相比,经55 ℃加热处理的KPI、TP与MP组凝胶结构更加疏松、多孔,这与流变学分析的结果一致。体外模拟胃肠液消化实验表明,MP具有最佳的消化性,API与KPI的消化性相当,且显著高于TP。综上所述,利用ISP制备分离蛋白可显著提高蛋白回收率,且分离蛋白的消化性明显优于TP。由于分离蛋白失去凝胶化能力,故可考虑将其应用于食品蛋白配料领域。

等电点沉淀法提取牡蛎蛋白及其蛋白组成分析

本文采用等电点沉淀法对牡蛎蛋白的提取工艺进行优化后,对牡蛎中各蛋白组分的构成进行了分析,并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定其分子质量的分布。结果表明,在室温、溶解pH 12.0、提取时间1.0 h、酸沉pH 4.0条件下,蛋白提取率为65.6%,纯度为84.3%。牡蛎蛋白中盐溶性蛋白含量最高,其后依次是碱溶性蛋白、水溶性蛋白和醇溶性蛋白。SDS-PAGE电泳图谱显示,经过β-巯基乙醇(变性电泳)和未经β-巯基乙醇(非变性电泳)处理的样品中,等电点沉淀法制备的蛋白样品分别在44.3和97.2 kDa处出现明显条带;盐溶性蛋白分别在44.3和20.1 kDa出现明显条带;水溶性蛋白条带分散;碱溶性蛋白分子电泳条带分布较宽,主要在200.0和50.0 kDa以下;醇溶性蛋白仅在44.3 kDa处有一条带。

等电点沉淀法分离毛发水解物L-酪氨酸

本文叙述了以毛发水解液为起始原料,利用等电点沉淀法,在不影响提取L-胱氨酸的同时,提取了L-酪氨酸的工艺过程。得率为0.45％,产品质量达到日本药典标准。

采用等电点沉淀法回收市政污泥水解液中的蛋白质

从城市污水处理厂市政污泥中回收蛋白质是一种污泥资源化的新途径,等电点沉淀法是从市政污泥水解液中回收蛋白质的有效方法。结果表明,当pH为3.5、沉淀温度为5℃、离心转速为3 000 r·min^(-1)和蛋白质浓度为6 000 mg·L^(-1)时,市政污泥水解液中的蛋白质回收率为87.46%。采用高效液相色谱仪分析所得蛋白质产品中的氨基酸含量,发现7种必需氨基酸(赖氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸)占沉淀物干重的12.37%。采用电感耦合等离子体发射光谱仪(inductively coupled plasma optical emission spectrometer,ICP-OES)分析所得蛋白质的重金属含量,与原市政污泥相比,所得蛋白质中As、Pb、Cr等重金属的削减率均在90%以上,等电点沉淀法有利于市政污泥中重金属的去除,所得蛋白质产品存在重金属风险较低。

人血清小分子蛋白质分离中等电点沉淀法的探索

目的：探索经等电点沉淀法去除高丰度蛋白后用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清中小分子量（〈10kD）蛋白质的方法。方法：血清经U9处理后加不同pH值的缓冲液沉淀高丰度大分子量蛋白，取上清超滤（MW=3kD）浓缩、置换，用Tricine—SDS—PAGE电泳检测。结果：血清经pH5．6的醋酸钠缓冲液处理后，可提高低丰度蛋白上样量6～8倍，电泳图可显示更多小分子蛋白条带。结论：等电点沉淀法可以有效沉淀人血清中高丰度大分子量蛋白，是一种分离血清部分小分子量蛋白质简便、经济、有效的前期处理方法。

双液相萃取菜籽粕蛋白的萃取沉淀特性

本文以双液相萃取菜粕为研究对象，测定了不同ｐＨ下菜粕中蛋白质、植酸和总磷的溶解曲线以及室温下蛋白质的沉淀曲线。试验表明，在４０℃，ｐＨ＝１２时，双液相萃取粕蛋白质萃取率为７．１５％，植酸萃取率为３３．６％。双液相萃取粕蛋白质的等电点在ｐＨ＝４～６，ｐＨ＝５时蛋白质沉淀率为７２．１％。

蛋清卵黏蛋白提取工艺优化

卵黏蛋白是鸡蛋清中具有抗菌、降胆固醇及免疫活性的蛋白质。该文以新鲜鸡蛋清为原料,通过盐析沉淀法和等电点法结合提取卵黏蛋白,采用响应面法优化提取工艺。结果表明:蛋清中提取卵黏蛋白的最佳工艺条件为NaCl溶液浓度1.5 mol/L,以4倍蛋清体积的NaCl溶液,调节蛋清pH值至5.5,离心40 min,取沉淀重悬,在上述相同离心条件下再次离心并冻干沉淀得到卵黏蛋白,提取率为54.48%,纯度为94.26%。

方差分析在等电沉淀分离牛奶酪蛋白中的应用

牛奶中酪蛋白含量的多少是衡量牛奶质量的一个重要指标,常采用等电点沉淀法测定其含量,本文通过对不同料液比条件下得到的酪蛋白含量数据进行方差分析,得出了等电点沉淀法分离酪蛋白的最适料液比值为1:1,并对此实验中的一些常见问题进行了探讨。

脱脂麦胚中谷胱甘肽与麦胚蛋白提取

对脱脂麦胚中谷胱甘肽(GSH)和麦胚蛋白的提取进行研究。首先采用低pH值条件从脱脂麦胚中提取谷胱甘肽,并采用超滤将该提取液中的谷胱甘肽与蛋白质进行分离。再对提取过GSH后的麦胚残渣中的蛋白质进行碱提研究。最后合并超滤分离出的蛋白质与碱提蛋白质,采用等电点沉淀法对麦胚蛋白进行纯化制备。采用单因素试验结合正交试验分别对GSH和麦胚蛋白的提取工艺进行优化,并最终确定GSH最佳提取工艺为提取pH6.3、提取时间15min、固液比1:13(g/mL)、提取温度55℃,GSH的得率和提取率分别为0.31%和72.1%。麦胚蛋白的最佳提取工艺为提取pH10.5、提取温度65℃、固液比1:11、提取时间60min。提取蛋白质相对于碱提用沉淀的得率为39.2%,提取率为90.4%。相对于总麦胚得率为20.8%,提取率为58.8%。合并超滤截留液与碱提离心上清液,确定沉淀蛋白质最佳pH4.2,蛋白质沉淀率为97.5%,所得蛋白质含量达85.2%,相对于脱脂麦胚中总蛋白质提取率为81.1%。

高效液相色谱-质谱法同时测定婴幼儿配方奶粉中叶酸、VB_(12)和生物素

建立高效液相色谱．质谱法对婴幼儿配方奶粉中叶酸、VB12和生物素同时定性和定量分析方法。采用等电点沉淀（pH1．90／4．70）法提取样品，SB．Aq（2．1mm×100mm，1．8μm）色谱柱分离，0．1％（V／n甲酸溶液和乙腈作流动相，等度（16．5：83．5，V/V）洗脱，质谱MRM检测。结果表明：叶酸、VB12和生物素在5min内得到很好的分离。线性范围分别为3．5-250ng／mL、0．8～5．0ng／mL、0．7-50ng／mL，加样回收率平均值分别为97．8％、102．3％、96．9％，RSD分别为1．33％、0．9％、1．37％。该方法具有较好的精密度和准确性、灵敏度高、操作简单快速，可以应用于婴幼儿配方奶粉中叶酸、VB12和生物素的含量同时测定。

酪蛋白质量分数作为乳品掺假检验指标的探讨

论述了我国乳品掺假的原因、方式和危害,以及掺假鉴定的必要性和重要性,分析了酪蛋白是牛乳中的特征性成分,根据乳品中酪蛋白占乳蛋白的质量比例(即酪蛋白质量分数)一般会稳定在77%～78%左右,提出了酪蛋白质量分数≥73%,可以作为乳品掺假检验的定量指标,探讨了国内外酪蛋白定量检测方法的研究现状。结果表明,等电点沉淀法无疑是一种适合我国国情的、操作简单的酪蛋白检验方法,对防治乳品掺假具有重要的现实意义,并通过分析提出了该检验方法所需研究的内容。