低温等电点沉淀法提取头发中的L-精氨酸

用低温等电点沉淀法对头发中L-精氨酸的提取工艺条件进行了研究,考查了头发水解条件、沉淀剂的种类及用量、pH值、氯离子浓度、提取温度等因素对L-精氨酸产量的影响.实验结果表明:在pH值10、温度0℃,氯离子浓度为2.1 mol/L2、mL苯甲醛作沉淀剂时,30 mL头发水解液中L-精氨酸的产量为0.139 g.

蓝圆鲹酸/碱等电点沉淀法分离蛋白凝胶特性与消化特性

采用酸/碱等电点沉淀(isoelectric solubilization/precipitation,ISP)法制备蓝圆鲹肌肉分离蛋白(acid/alkaline aided protein isolate,API/KPI),并对全蛋白(total protein,TP)、肌原纤维蛋白(myofibrillar protein,MP)与分离蛋白的理化特性、凝胶特性以及消化稳定性进行比较研究。结果表明,蓝圆鲹肌肉蛋白在碱性条件下溶解性显著高于酸性条件,经优化后的API与KPI的回收率分别为65.0%与84.6%,显著高于MP(54.0%)。KPI、API与MP的脂肪与灰分含量明显低于TP,其中KPI的粗蛋白含量最高。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示KPI与API的蛋白组成与TP相近,但KPI与API的氨基酸组成中甘氨酸与脯氨酸含量显著低于TP。质构与流变学分析结果显示,KPI与API的凝胶强度与储能模量(G’)均明显低于TP与MP,其中TP、MP与KPI的储能模量在50~55 ℃会出现明显的下降趋势,表明发生凝胶劣化现象,而API组无明显变化。扫描电子显微镜结果表明,与90 ℃相比,经55 ℃加热处理的KPI、TP与MP组凝胶结构更加疏松、多孔,这与流变学分析的结果一致。体外模拟胃肠液消化实验表明,MP具有最佳的消化性,API与KPI的消化性相当,且显著高于TP。综上所述,利用ISP制备分离蛋白可显著提高蛋白回收率,且分离蛋白的消化性明显优于TP。由于分离蛋白失去凝胶化能力,故可考虑将其应用于食品蛋白配料领域。

等电点沉淀法提取牡蛎蛋白及其蛋白组成分析

本文采用等电点沉淀法对牡蛎蛋白的提取工艺进行优化后,对牡蛎中各蛋白组分的构成进行了分析,并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定其分子质量的分布。结果表明,在室温、溶解pH 12.0、提取时间1.0 h、酸沉pH 4.0条件下,蛋白提取率为65.6%,纯度为84.3%。牡蛎蛋白中盐溶性蛋白含量最高,其后依次是碱溶性蛋白、水溶性蛋白和醇溶性蛋白。SDS-PAGE电泳图谱显示,经过β-巯基乙醇(变性电泳)和未经β-巯基乙醇(非变性电泳)处理的样品中,等电点沉淀法制备的蛋白样品分别在44.3和97.2 kDa处出现明显条带;盐溶性蛋白分别在44.3和20.1 kDa出现明显条带;水溶性蛋白条带分散;碱溶性蛋白分子电泳条带分布较宽,主要在200.0和50.0 kDa以下;醇溶性蛋白仅在44.3 kDa处有一条带。

等电点沉淀法分离毛发水解物L-酪氨酸

本文叙述了以毛发水解液为起始原料,利用等电点沉淀法,在不影响提取L-胱氨酸的同时,提取了L-酪氨酸的工艺过程。得率为0.45％,产品质量达到日本药典标准。

采用等电点沉淀法回收市政污泥水解液中的蛋白质

从城市污水处理厂市政污泥中回收蛋白质是一种污泥资源化的新途径,等电点沉淀法是从市政污泥水解液中回收蛋白质的有效方法。结果表明,当pH为3.5、沉淀温度为5℃、离心转速为3 000 r·min^(-1)和蛋白质浓度为6 000 mg·L^(-1)时,市政污泥水解液中的蛋白质回收率为87.46%。采用高效液相色谱仪分析所得蛋白质产品中的氨基酸含量,发现7种必需氨基酸(赖氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸)占沉淀物干重的12.37%。采用电感耦合等离子体发射光谱仪(inductively coupled plasma optical emission spectrometer,ICP-OES)分析所得蛋白质的重金属含量,与原市政污泥相比,所得蛋白质中As、Pb、Cr等重金属的削减率均在90%以上,等电点沉淀法有利于市政污泥中重金属的去除,所得蛋白质产品存在重金属风险较低。

等电点沉淀结合凯氏定氮法测定市售纯牛奶中酪蛋白的含量

在酪蛋白测定方法的前期研究基础上,对等电点沉淀法进行改进,结合凯氏定氮法对市售纯牛奶中的乳蛋白组分进行了测定。确定了制备纯品酪蛋白的最佳洗涤剂和洗涤次数,NaOH溶液碱复溶酪蛋白等电点沉淀物最佳添加范围。实验结果表明,改进后的等电点沉淀方法,测定酪蛋白质量分数都在74%~76%。pH4.6HAc-NaAc缓冲溶液作为洗涤剂,对于体系pH的维持更加稳定。仅沉淀的处理方式可以将大部分乳清蛋白和酪蛋白进行分离。NaOH溶液最佳添加范围是25mL^35mL。改进后的等电点沉淀结合凯氏定氮法高效准确,简单易行,重现性好,可以用于纯牛奶中酪蛋白的掺假鉴定。

方差分析在等电沉淀分离牛奶酪蛋白中的应用

牛奶中酪蛋白含量的多少是衡量牛奶质量的一个重要指标,常采用等电点沉淀法测定其含量,本文通过对不同料液比条件下得到的酪蛋白含量数据进行方差分析,得出了等电点沉淀法分离酪蛋白的最适料液比值为1:1,并对此实验中的一些常见问题进行了探讨。

酪蛋白质量分数作为乳品掺假检验指标的探讨

论述了我国乳品掺假的原因、方式和危害,以及掺假鉴定的必要性和重要性,分析了酪蛋白是牛乳中的特征性成分,根据乳品中酪蛋白占乳蛋白的质量比例(即酪蛋白质量分数)一般会稳定在77%～78%左右,提出了酪蛋白质量分数≥73%,可以作为乳品掺假检验的定量指标,探讨了国内外酪蛋白定量检测方法的研究现状。结果表明,等电点沉淀法无疑是一种适合我国国情的、操作简单的酪蛋白检验方法,对防治乳品掺假具有重要的现实意义,并通过分析提出了该检验方法所需研究的内容。

饮料中提取酪蛋白的方法选择

目的探索4种沉淀蛋白质的方法在提取饮料酪蛋白过程中对其复溶率的影响,为建立超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法鉴别饮料中酪蛋白亚型及相应含量的测定寻找最佳前处理方法。方法选取乳粉、以乳粉或牛乳为原料的饮料、添加酪蛋白或酪蛋白酸钠的饮料作为测试样品,用pH 8.5的Tris-HCl溶液溶解,采用等电点沉淀法、乙腈沉淀法、丙酮沉淀法和乙醇沉淀法提取样品中的蛋白质,低温离心后对沉淀的蛋白质进行复溶,用考马斯亮蓝法分别测定沉淀前和复溶后样品溶液中可溶性蛋白质的含量,计算类酪蛋白的复溶率。结果乳粉和3类饮料中的酪蛋白经等电点沉淀法提取后,乳粉的类酪蛋白复溶率在64.95%~66.20%之间,3种饮料中的类酪蛋白复溶率在69.73%~84.95%之间,等电点沉淀法优于其他3种沉淀方法。αs-酪蛋白标准物质和β-酪蛋白标准物质的复溶率分别为70.16%和87.17%,且经高分辨质谱确证其复溶后的主成分为酪蛋白。另外对45种含酪蛋白饮料中的类酪蛋白含量进行了测定,其含量在0.10~42.36 mg/g(mg/mL)之间。结论等电点沉淀法提取类酪蛋白的复溶率较其他3种沉淀方法相对稳定,为饮料中酪蛋白的亚型鉴别及相应含量测定提供了回收率较高的前处理方法,为今后测定酪蛋白含量的液相质谱法的研究奠定了较好基础。

Ca^(2+)激活猪凝血酶原作用的初步研究

为探讨Ca2 + 激活猪凝血酶原的最适工作浓度和激活时间 ,以新鲜猪血为材料 ,采用HAc等电点沉淀法获取凝血酶原后 ,添加 0 .2 5mol/LCaCl2 作为凝血酶原激活剂 ,使Ca2 + 达到不同终浓度 ,并经过不同激活时间进行对比试验。结果显示以Ca2 + 单一因子激活猪凝血酶原的最适CaCl2终浓度为 0 .0 5mol/L ;最适激活时间为 1.5h。使Ca2 + 激活猪凝血酶原的实验条件得以确立。

米糠脂多糖提取物中分离蛋白质的研究

米糠是富含植物脂多糖的植物资源。本文就米糠脂多糖制备过程中 ,蛋白与脂多糖的分离方法进行了研究。结果表明 ,等电点沉淀法和超滤法的串联应用可充分发挥两者的分离特点 。

两种凝血酶原提取方法的比较

目的比较等电点沉淀法和柠檬酸钡吸附法从猪血浆中提取凝血酶原的纯度。方法分别采用等电点沉淀法和柠檬酸钡吸附法从猪血浆中提取凝血酶原,凝血酶原经单独钙离子激活得到凝血酶,通过凝血酶效价测定、蛋白质浓度测定,计算出凝血酶的比活性。结果采用等电点沉淀法提取的凝血酶原经激活后得到的凝血酶比活性为11.01±1.54 U/mg,采用柠檬酸钡吸附法提取的凝血酶原经激活后得到的凝血酶比活性为130.17±12.30 U/mg,经配对T检验,P<0.01.结论与等电点沉淀法相比,采用柠檬酸钡吸附法从猪血浆中提取得到的凝血酶原纯度更高。

透明质酸精制方法的比较

目的:考察和比较6种常用多糖除蛋白方法对透明质酸的纯化效果。方法:通过6种常用多糖除蛋白方法,即加热法、盐酸法、三氯乙酸法、Sevage法、氯仿法和等电点沉淀法纯化透明质酸,以蛋白含量、葡萄糖醛酸含量及平均分子量为主要指标,对各种方法的纯化精品进行比较。结果:用等电点沉淀法纯化的精品经鉴定与HA对照品基本相符,平均分子量>106Da,杂蛋白含量<0.05%。结论:采用等电点沉淀法纯化效果最好。

L-丝氨酸分离提取的研究进展

总结了L-丝氨酸分离提取过程中常用的方法,如纸层析法、离子交换法、等点电位沉淀法、膜分离法,介绍了各种方法的基本原理、特点和发展动态。

酸溶条件及高强度超声波对鲢鱼肉分离蛋白的提取及凝胶特性的影响

研究了不同酸溶条件(鱼肉匀浆液的pH值)和高强度超声波(High Intensity Ultrasonic treatment,HIU)对酸溶等电点沉淀法鲢鱼肉分离蛋白(protein isolate,PI)的提取、蛋白组成以及凝胶特性的影响。数据显示:降低pH能显著提高蛋白回收率(由pH4.0到3.0,提高了21.11%),但pH<3.0时,进一步降低pH对蛋白回收率不再有提高作用;HIU显著提高了蛋白回收率(pH 3.0时,提高了3.77%);PI中以肌原纤维蛋白为主,pH降低能够显著减少等电点处可溶性中等分子蛋白种类及浓度,而HIU对此影响不大。pH降低和HIU均会增加PI凝胶亮度(89.24→94.25)和白度(83.24→88.45)。HIU显著提高了PI凝胶硬度(1531.74→1756.24 g),降低pH能够提高PI凝胶硬度(1162.55→1683.41 g),但当3.0后,作用不显著。pH低于4.0时,pH变化和HIU对PI凝胶弹性无显著影响(0.792~0.823)。降低pH和HIU引起PI凝胶蒸煮损失率的显著增加(2.05%→4.43%)。结论:极酸pH(pH<3.0)并不会提高蛋白回收率,且对PI凝胶特性无益。采用pH 3.0的酸溶条件并辅以HIU,能够得到最高的蛋白回收率及最优的PI凝胶特性。

优化Ⅰ型胶原蛋白的纯化工艺

使用0.5 mol/L乙酸和胃蛋白酶提取Ⅰ型胶原蛋白后,结合等电点沉淀法和超滤纯化技术对Ⅰ型胶原蛋白进行纯化。通过鞣酸沉淀法和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)证实等电点沉淀可有效除去胃蛋白酶;经超滤纯化后的胶原蛋白紫外光谱检测在235nm处有最大吸收峰;在SDS-PAGE谱图上出现3条Ⅰ型胶原蛋白特征谱带;采用凯氏定氮法也证实其纯度符合YY/T1511—2017医药行业标准;通过傅里叶变换红外光谱、圆二色谱法(Circular Dichroism, CD)测定证实胶原蛋白三螺旋结构被完整保留下来。采用等电点沉淀法结合超滤纯化技术,可保证Ⅰ型胶原蛋白的高纯度及三螺旋结构的完整性。

蓝圆鲹分离蛋白水溶性蛋白酶的鉴定及性质

以蓝圆鲹(Decapterus maruadsi)为研究对象,采用酸/碱溶解-等电点沉淀法制备蓝圆鲹肌肉分离蛋白(acid/alkaline aided protein isolate,API/KPI),分析比较不同分离蛋白与肌肉全蛋白(total protein,TP)的自身降解规律,并对其水溶性蛋白酶的酶学性质展开研究。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)结果显示,TP与KPI均会发生强烈的自身降解现象,API则无明显的自身降解。酶谱与酶活力测定结果表明,KPI保留了TP超过80%的酶活性,而API则仅剩10%的水解活性。酶学性质结果表明,TP的内源酶具有两个最适pH值,分别为3.0与9.0,而KPI的最适pH值为9.0;TP与KPI内源酶的最适温度均为60℃。荧光底物结果表明,TP与KPI的最适荧光底物为Boc-Gln-Arg-Arg-MCA,且对羧基端为Arg的底物均具有较高的水解活性。抑制剂结果显示,TP和KPI水溶性蛋白酶都能被丝氨酸蛋白酶抑制剂强烈抑制,暗示水溶性丝氨酸蛋白酶在碱法等电点制备的分离蛋白凝胶劣化中起关键作用。

木棉花超氧化物歧化酶分离工艺的研究

探究优化木棉花超氧化物歧化酶(SOD)的提取条件,建立木棉花SOD生产工艺.以木棉花花瓣为原料,采用正交实验优化超声波提取的技术参数,结合丙酮等电点沉淀和葡聚糖凝胶层析提取纯化SOD,经真空冷冻干燥获得SOD成品.超声波提取的最佳工艺为料液比1∶30,功率180w,超声波处理总时间9min,浸提时间8h.沉淀杂蛋白条件为2mol/L的HCl将粗提液调节至pH为5.0,提纯SOD条件为pH4.0丙酮等电点沉淀法,纯化倍数达到5.59,经Sephadex G-75纯化,获得SOD成品,纯化倍数达到18.46.为木棉花SOD的规模化生产提供理论依据.

不合格胃膜素的简单处理方法

应用联产和单产工艺生产的胃膜素,经检验常会出现粘蛋白氮超过限度的不合格产品。我们认为生产工艺过程未控制好,因而带来了不定量的酸性和碱性杂蛋白,故影响含氮量。为解决这一问题,可用等电点沉淀法除去杂蛋白,具体操作方法如下:一、溶解:将不合格的胃膜素粉加5～10倍量的水,升温至50℃,搅拌溶解。

鲤鱼血清白蛋白提取工艺及优化研究

以鲤鱼为取血对象,使用等电点沉淀法、盐析法、优化法3种不同工艺提取鱼血清白蛋白,制备好足量血清待用。结果表明:等电点沉淀法所提取的鱼血清白蛋白量最少,其次是盐析法提取鱼血清白蛋白,提取量最多并且纯度最高的是改进的优化法。