有关植物双向电泳体系建立中几个问题的探讨

双向电泳技术是目前最常用的能够从植物组织中分离出上千种蛋白的技术．因此，需对蛋白样品制备过程、等电聚焦、第二相电泳、染色等进行分析探讨，结果表明，样品制备需根据样品的成分选择不同的裂解液成分（如：CHAPS，TritonX-100和DTT等）；胶条越长要求上样量越大（考染上样量约为银染上样的5倍），等电聚焦电压越大，聚焦过程也越长；SDS-PAGE胶体积分数为10％～15％，常用12％；第二相电泳需选择恒定电流，且先以10mA／胶，跑0．5～1．0h，再以大电流30mA／胶至第二相电泳完成．

水稻根尖质膜蛋白质组学研究方法的建立

以徐稻3号水稻苗期幼嫩根尖为材料，利用葡聚糖／聚乙二醇两相分配法纯化得到纯度达90％的质膜组分，使用优化的双向电泳水化液溶解质膜蛋白，通过等电聚焦／十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶双向电泳（IEF／SDS-PAGE）分离和基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱（MAI-DI—TOF／TOF）分析，鉴定了31个水稻质膜相关蛋白。结果表明IEF／SDSPAGE双向电泳适合分离亲水性相对较高的膜附着蛋白。进一步利用高盐和温和去污剂对纯化的质膜进行洗涤，以降低质膜组分的复杂程度，通过SDS-PAGE单向电泳分离和液相色谱串联质谱（LC-MS／MS）分析，鉴定了8个质膜蛋白。经洗涤后的质膜组分复杂度显著降低，SDS-PAGE中的蛋白条带只包含1～2种蛋白，且主要为疏水性较强的穿膜蛋白，说明多种生物化学分离方法及不同质谱分析的综合运用，是解决生物膜蛋白质组学难点的有效途径。