用等电聚焦法对茄子种子几种同工酶的研究

通过等电聚焦电泳方法对茄子种子进行同工酶分析，发现酯酶和过氧化物酶同工酶酶谱在父本、母本及杂交一代之间有一定的差别，而且这种差别有一定的时间局限性。而酸性磷酸酶的同工酶酶说在茄子的亲本和杂交一代间没有差别。由于茄子种子同工酶酶谱有一定的差别，因此可以利用这种差别来进行种子纯度检验。

等电聚焦法分析人血清载脂蛋白AI同工蛋白

采用特异性抗apoAI血清与经脱脂后的全血清蛋白溶液进行免疫沉淀。免疫复合物经洗涤、解聚、定蛋白量后进行等电聚焦电泳分离不同等电点的apoAI 各同工蛋白,再行扫描分析。IsoapoAI 经SDS 电泳及等电聚焦—SDS 双向电泳鉴定。本法可分得如下几条区带apoAI_1、AI_2、AI_3、AI_4、AI_5、AI_6;样品检测范围0.3～2.5g/L;批间CV 2.25～4.28%;方法特异、易行,适用于科研与临床.

等电聚焦法检测人类血痕中的PGM1亚型

笔者采用厚度为0.2mm的超薄层等电聚焦电泳,对人类血痕中葡萄糖磷酸变位酶-1亚型（PGM1sub）进行了分型,获得了满意的结果。并用该方法对云南省250例汉族人进行了PGM1sub表型分布进行了调查。保存于室温（20℃左右）30天,4℃1年、-20℃3年的血痕全部正确测出表型。a 采用超薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳法对血痕检测PGM1sub。

全柱成像等电聚焦毛细管电泳法对双特异性Fc融合蛋白的电荷异质性分析

建立全柱成像等电聚焦毛细管电泳(WCID-CIEF)分析双特异性Fc融合蛋白电荷异质性方法。方法 通过非还原毛细管电泳法观察酶处理前后峰型的变化,初步确认了该Fc融合蛋白电荷异质性唾液酸相关;结合唾液酸酶酶切和方法优化手段,建立了此融合蛋白的WCID-CIEF分析平台;通过液相质谱法(LC-MS)鉴定了唾液酸相关N-糖构型;通过液相荧光法(LC-FLR)测定了唾液酸的含量。结果 经唾液酸酶酶切和方法优化后,此方法在2.5~7.5 mgmL-1浓度范围内线性良好,R2=0.998,回收率在96.3%~104.6%之间,准确性、专属性和耐用性均满足要求。结论 结合酶处理和方法优化手段,WCID-CIEF可较好地分析融合蛋白的电荷异质性,提供了一种简单、有效的融合蛋白质控手段,并可应用于产品放行及稳定性监测。

等电聚焦电泳法分离鉴定生漆中同工酶

从中国湖北建始和利川毛坝生漆中提取粗漆酶 ,应用等电聚焦电泳 ( IEF)技术分离鉴定同工酶 .实验结果表明 ,除了含有能催化多胺或多酚的氧化酶 (漆酶 )外 ,还有酯酶和过氧化酶 .氧化酶同工酶建始漆共有 18条带、毛坝漆有 15条带 ;酯酶同工酶建始漆有 2 0条带、毛坝漆有 18条带 ;过氧化酶建始漆有 18条带、毛坝漆只有 6条带 .并测定了各酶带的等电点 .

等电聚焦双向电泳法分析Alzheimer’s病脑皮质蛋白

目的 :利用等电聚焦双向电泳法 (2 DE)研究Alzheimer’s病 (AD)患者脑皮质蛋白的生化改变 ,并探讨该方法的重复性和可靠性。方法 :利用 2 DE分析AD患者和健康对照者的额、颞叶皮质蛋白 ;通过 2 DE计算机分析系统对结果进行定性、定量分析。结果 :2 DE图谱可识别蛋白或多肽 80 0余种 ,发现 31个电泳点在实验组和对照组有显著性量性差异 ,有两种未鉴别蛋白在AD脑出现频率较高。结论 :所采用的2 DE具有较高的重复性和良好的分辨率。AD脑蛋白的改变以量变为特点。

等电聚焦电泳法在3种蔬菜种子真实性及纯度鉴定中的应用

以油菜、大白菜、番茄茎叶中的脂酶、过氧化物同工酶和蛋白酶为研究对象,采用等电聚焦(IEF)电泳法,分别对3种蔬菜不同苗龄幼苗中酶的提取物电泳结果进行分析,结果表明,过氧化物同工酶等电聚焦电泳是鉴定大白菜、油菜、番茄品种真实性和纯度的理想方法。大白菜和番茄适宜凝胶支持物的pH范围为3.0～9.5,油菜为6.0～9.0。大白菜5～6 d、油菜3～4 d、番茄6～7 d的幼苗过氧化物同工酶的酶谱清晰度高,品种间的多态性能得到充分的体现,是鉴定种子真实性和纯度的适宜苗龄。

N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶同工酶等电聚焦测定及初步临床应用

本文建立了一种测定N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)同工酶的管状聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦分析法,胶浓度5%。pH 梯度3.5～10.结果表明,尿NAG-A 同工酶等电点为5.5,NAG-B为7.2.38例糖尿病患者尿液分析显示,糖尿病微血管病组NAG-B 活性显著高于无微血管病变组,NAG-B 活性对反映糖尿病性肾损害有一定价值.

大豆脂肪氧化酶缺失体鉴定方法研究

应用比色法和等电聚焦聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定大豆脂肪氧化酶缺失体,得出结论:后者是一种简单明了的鉴定脂肪氧化酶基因缺失材料的方法,能够适应大豆育种工作要求(要使农艺性状和缺失脂肪氧化酶综合到某一个体中需要对成千上万的群体进行鉴定);并同时筛选出了农艺性状优良,缺失脂肪氧化酶Lox2的稳定新品系F4-5。

三种鲀的毒性及其与种的相关性研究

用小鼠生物检测法及薄层等电聚焦电泳法测定 3种河的毒性及其蛋白质组分的种属差异性 .结果表明 ,河的毒性强弱与其种属有密切关系 ,不同种河的毒性差异很大 ;同种河的不同个体以及同一个体的不同器官组织也有较大差异 .

体细胞胚胎发生标记

De Danske Sukkerfabrikker和丹麦皇家农业大学的M.Joersbo等人已分离出一种对胚胎发生细胞有专一性的异过氧化物酶。他们使用琼脂糖凝胶上提取蛋白的等电聚焦法,从无植物生长素的培养基上再培养2～6天的胡萝卜胚胎发生细胞悬浮系中发现了同功酶。而在无胚胎发生细胞系中只发现极小量的同功酶。在培养基中加入2,4-D既抑制了细胞的胚胎发生又抑制了异过氧化物酶的活性。荷兰瓦赫宁根农业大学研究人员P.F.

国外资料文摘

关于等电聚焦法对红细胞酸性磷酸酶分型的研究.Q.B.Divall;瑞士《ForensicScience International》。1981,18(1)67—78。超薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦法(IEF)对红细胞酸性磷酸酶(EAP)进行分型的技术,已应用于大量红细胞溶解产物和干血斑的检验。

红细胞酶型

红细胞酶型是血型的一个系统。它是红细胞抗原系统(ABO、MN型)、血清型系统(HP等)外又一新的血型分类方法。目前已有近十种酶型应用于法医学的犯罪个体识别。

国外论文文摘

法医骨学鉴定的组织工作(俄)/A.K.T.Tахмчс…//拉脱维亚第一届法医大会(报告提纲)。-1985,-88～89在白骨化尸体及大量人员不幸事故的检验中和考古发现的研究中,对个别骨块、支解尸体和无名尸体都需要进行法医骨学鉴定。为了进行法医骨学鉴定,必须采用一系列的边缘学科:人类学、比较解剖学、组织学、x射线学。

国外论文文摘

用低压等电聚焦法对血斑和发根中的酯酶D进行分型。1.YUASA等,瑞士《国际法庭科学》,1985年,第28卷,第1期,第63页本文描述了一种对血斑和发根中的酯酶D进行分析的新等电聚焦法。该方法可以快速、简便地测定酯酶D1、酯酶D2和酯酶D7等6种表现型。实验表明,这种方法在法医斑痕检验申是切实可行的。此外,该方法也可用于酯酶D5的分型。用酶联免疫吸附测定法检查人唾液及精液中的H型物质。胜又义直等,《日本法医学杂志》,1984年,第39卷,第1期。

纳豆激酶的酶学性质研究

采用显色底物检测法研究纯化所得的纳豆激酶NKII的酶学性质。结果表明:通过等电聚焦电泳法测得的NKII等电点为8.6,最适反应温度为55℃,45℃以下NKII半衰期在60min以上,热稳定性好。NKII的最适、最稳定pH分别为7.5、8.0。抑制剂研究表明,PMSF能完全抑制NKII活性,Leupeptin、Pepstain部分抑制其活性,Aprotin、EGTA、EDTA不能抑制其活性,NKII属于丝氨酸蛋白酶。

2种菌株来源的左旋门冬酰胺酶的鉴别和效价测定研究

目的:探讨由大肠埃希菌(E.coliASI.357)和欧文菌(Erwinia carotovora)制备的左旋门冬酰胺酶的鉴别方法,以及效价测定的最适酶促反应条件。方法:采用高效液相色谱法及等电聚焦电泳法对2种菌株来源的左旋门冬酰胺酶进行鉴别;考察缓冲液的种类及pH值对左旋门冬酰胺酶效价测定的酶促反应的影响。结果:大肠埃希菌和欧文菌2种来源的左旋门冬酰胺酶的色谱图有差别,主峰保留时间分别为11.0、11.8min,等电点色带分别为4.65～5.1、7.1～8.20;效价测定的最适酶促反应条件分别是三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液(pH=9.0)、0.2mol·L-1磷酸盐缓冲液(pH=8.0)。结论:2种菌株来源的左旋门冬酰胺酶的等电点有显著差别,效价测定的最适酶促反应条件亦不相同,应作为2个品种制定质量标准。

治疗性单克隆抗体类药物分析技术及其应用

治疗性单克隆抗体(单抗)类药物是高度均一的生物大分子,抗原表位、理化性质和生物活性等方面的均一性程度高,能够通过特异性地与靶标分子结合发挥治疗作用。单抗类药物治疗过程中不良反应发生率低、患者耐受性高。单抗类药物是生物药物领域的热点和焦点,已成为现代生物制药行业中占比最大、增长最快的细分领域。根据生产技术和工艺的不同,单抗类药物发展已经经历了4代。我国最近批准上市的信迪利单抗注射液、特瑞普利单抗注射液、注射用卡瑞利珠单抗和替雷利珠单抗注射液等均属于第3代人源化单克隆抗体药物。单抗类药物分子结构复杂,容易发生二聚体、多聚体、末端氨基酸突变等不均一性变化,严重影响临床用药的安全性和有效性。对单抗类药物的原液和成品进行有效的质量控制是确保该类产品安全性和有效性的重要措施。目前,单抗类产品质量控制与分析的主要方法包括高效液相色谱(HPLC)法、酶联免疫吸附测定(ELISA)法、毛细管区带电泳(CZE)法、毛细管等电聚焦电泳(cIEF)法、成像毛细管等电聚焦电泳(iCIEF)法和十二烷基硫酸钠-毛细管电泳(CE-SDS)法等。本文就单抗类药物质量控制分析方法及应用进行综述,为相关研究及产品质量控制提供参考。