NaHCO_3浓度对等鞭藻3011、等鞭藻塔溪堤品系和绿色巴夫藻生长的影响

对等鞭藻 30 11(Isochrysisgalbana 30 11)、等鞭藻塔溪堤品系 (TahitianIsochrysisgalbana)和绿色巴夫藻 (Pavlovaviridisai) 3株微藻种进行培养。NaHCO3的质量浓度分别为 0 ,2 0 0 ,4 0 0 ,80 0 ,12 0 0和 16 0 0mg/L ,培养温度 (2 2± 1)℃ ,盐度 2 8,光照强度 50 0 0lx。结果表明 ,NaHCO3的浓度对 3株微藻生长的影响差异显著 ,经过 6d的培养 ,培养液中不加NaHCO3、但连续充气组中 3株微藻的细胞浓度都达到最大值 ;除充气不加NaHCO3组外 ,3株微藻的细胞浓度都在NaHCO316 0 0mg/L组中达到最大值。

球等鞭金藻3011浓缩细胞低温保存技术的研究

为了探讨球等鞭金藻3011(Isochrysis galbana Parke)浓缩细胞的保存条件,通过研究其在不同温度条件下的长期保存效果来确定最佳的保存温度范围.实验结果表明,在0～10℃的低温下长期(2个月以上)保存后,球等鞭金藻3011获得较高的存活率(70%以上),并且在恢复生长时保持较高的比生长率,因此0～10℃是球等鞭金藻3011浓缩细胞长期保存的最佳温度范围.

球等鞭金藻3011絮凝效应的研究

[目的]实现球等鞭金藻3011在生产性培养中的浓缩收集。[方法]采用一级保种培养、二级扩种培养及三级开放式生产性培养方式,研究絮凝试剂种类、浓度及絮凝时间对球等鞭金藻3011絮凝效应。[结果]在三角锥瓶中,明矾浓度为0.5～1.1g/L时,45min后90%以上的藻液絮凝;氢氧化钙浓度为0.7～1.1g/L时,15min后藻液上清液基本澄清;硫酸锌浓度为0.9和1.1g/L时,240min后80%以上的藻液絮凝;硫酸铝浓度为0.5～1.1g/L时,120min后藻液上清液基本澄清;聚合氯化铝浓度为0.7～1.1g/L时,45min后藻液上清液基本澄清。在白桶中,240min内1.0g/L氢氧化钙的絮凝效果最显著,硫酸锌的絮凝效果不显著;0.5和1.0g/L明矾和硫酸铝和1.0g/L聚合氯化铝均有一定的絮凝效果。在开放式水池中,0.5和1.0g/L明矾和氢氧化钙的絮凝效果显著。[结论]明矾和氢氧化钙适宜应用于藻种生产性培养的浓缩收集。

Zn^2＋对球等鞭金藻3011细胞膜电位和膜通透性的影响

目的:用亲脂性阴离子荧光染料双(1,3-二巴比妥酸)-三次甲基氧烯洛尔和碘化丙啶标记球等鞭金藻3011(Isochrysis galbana 3011),研究Isochrysis galbana 3011受Zn2+作用时膜电位和膜通透性的变化。方法:对处理藻液进行流式细胞技术检测和荧光显微镜镜检,通过对比实验设计,实验数据使用SPSS17.0统计软件进行方差分析。结果:5μg/L Zn2+作用4min可使Isochrysis galbana 3011细胞内荧光强度明显增强,并促使膜的通透性发生剧烈变化,与对照组比较具有统计学意义。结论:找到一种快速动态测定Isochrysis galbana 3011细胞膜状态的方法,发现5μg/L的Zn2+能引起Isochrysis galbana 3011细胞膜的部分去极化,并改变膜的通透性,Zn2+的吸收有可能与钠通道联动有关。

等鞭金藻3011的半连续密封培养

对等鞭金藻 3 0 1 1在不同的光照、温度和接种浓度条件下进行培养 ,分为两组 :实验组是用密封袋半连续培养 ,对照组是用大型玻璃缸槽进行培养。根据其相对生长常数K′、平均日增量X和平均倍增时间G ,筛选出最佳生长条件 :光照 6 0 0 0～ 80 0 0Lx ,水温 2 0℃ ,pH 8.2～ 8.6 ,接种浓度 3 0× 1 0 4个 mL。结果表明 ,在同样条件下 ,半连续密封培养等鞭金藻 3 0 1 1相比常规玻璃缸培养 ,达到 2 0 0× 1 0 4个 mL以上的收获浓度快 2～ 3d ,日增量和倍增时间均快

不同氮源对球等鞭金藻3011增殖的影响

本试验分别以尿素、硝酸钠、氯化铵为氮源供体 ,对金藻门的球等鞭金藻 30 11进行了培养观察 ,并分析了其增殖曲线 ,结果表明以尿素为氮源最好 ,硝酸钠次之 ,氯化铵较差。

低温环境对球等鞭金藻3011抗氧化系统和二十二碳六烯酸产量的影响

以球等鞭金藻(Isochrysis galbana)3011为对象,通过研究降低培养温度后其超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化物酶(peroxidase,POD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)活性以及还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、脂质过氧化产物丙二醛(malondialdehyde,MDA)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)和二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)含量的变化,以阐明低温环境对球等鞭金藻细胞抗氧化系统和DHA含量的影响。用流式细胞术结合荧光染色法测定低温环境对球等鞭金藻细胞内ROS水平的影响;并采用气相色谱法检测球等鞭金藻细胞内DHA含量。结果表明:在21、18、15℃低温环境处理下,球等鞭金藻细胞SOD、CAT和POD活性均随培养时间延长而呈现先升高后降低的趋势;温度越低,峰值出现越早,且峰值越大,峰后酶活性下降越快;GSH含量的变化趋势与上述酶活性的变化相似,MDA含量则持续增加;ROS水平随着温度的降低而呈现出较为复杂的变化,15℃和18℃诱导16 h出现ROS水平爆发,20 h时达到峰值,分别为(14.11±0.11)%和(14.74±0.58)%(P<0.05);经18℃低温诱导24 h后,球等鞭金藻细胞内DHA含量为0.105 mg/g,比对照组高0.06 mg/g。因此,低温环境可以作为提高代谢物产量的诱导子,使球等鞭金藻细胞产生主动防御反应,引起清除活性氧相关的酶活性的升高,同时也提高了DHA产量。

低温诱导球等鞭金藻3011脂肪酸去饱和酶基因片段的筛选及mRNA表达分析

本实验通过设计特异引物序列,对经低温诱导处理的球等鞭金藻3011的脂肪酸去饱和酶基因片段进行筛选,以实时荧光定量聚合酶链式反应检测酶的表达量,探索低温对该多不饱和脂肪酸脱饱和酶基因表达量的影响。结果表明:用prime5设计包括内参基因在内的14条引物,其中7条引物具有特异性扩增,根据扩增效果对其扩增体系进行优化。结果表明:Des4、Des5、Des6、Des8、Des9和Des12 m RNA相对最大表达量分别为7.71、11.33、42.58、22.02、73.91和16.01。随温度的降低均呈现先增加后降低的趋势。根据SPSS 19.0统计分析,6个基因在其m RNA相对表达量最大的诱导时间时,18℃的m RNA相对表达量与其在12、15、21℃3个温度条件下的相对表达量相比具有极显著差异(P<0.01)。18℃条件下诱导24 h可以有效增加Des9基因在球等鞭金藻3011中的表达。此研究结果为人为调控微藻的多不饱和脂肪酸含量提供了一条可行的方法。

乙酰甲喹对小新月菱形藻、等鞭金藻3011的毒性效应

通过考察乙酰甲喹对小新月菱形藻(Nitzschia closterium f.minutissima)、等鞭金藻(Isochrysis galbana Parke3011)的生长抑制和对叶绿素a、总超氧岐化酶(T-SOD)活性以及丙二醛(MDA)浓度的影响,研究了乙酰甲喹对2种微藻的毒性效应,为评价兽药乙酰甲喹的使用安全性和保护养殖环境提供基础数据。结果表明,乙酰甲喹对2种微藻的生长抑制作用随质量浓度的增加而增大,乙酰甲喹对小新月菱形藻的24 h-EC50(半数有效浓度)为4.73 mg·L^(-1)、对等鞭金藻3011的24 h-EC50为2.14 mg·L^(-1),乙酰甲喹对2种微藻均属于高毒物质,等鞭金藻3011更敏感。暴露24 h后,随着乙酰甲喹质量浓度的升高,小新月菱形藻叶绿素a浓度下降而等鞭金藻3011叶绿素a浓度基本不受影响;2种微藻的T-SOD活性随着乙酰甲喹质量浓度的升高均显著增加,各实验组MDA浓度也高于对照组,等鞭金藻3011更敏感,说明乙酰甲喹对2种微藻均能造成氧化胁迫,对细胞造成氧化损伤。

喹烯酮对小新月菱形藻、等鞭金藻3011的毒性效应

通过分析喹烯酮对小新月菱形藻(Nitzschia closterium f.minutissima)和等鞭金藻(Isochrysis galbana Parke 3011)的生长抑制、叶绿素a含量、总超氧岐化酶(T-SOD)活性以及丙二醛(MDA)含量的影响,研究了喹烯酮对两种微藻的毒性效应。实验结果如下:1)喹烯酮对微藻的生长抑制作用随浓度的增大而增大。喹烯酮对小新月菱形藻的24 h-EC_(50)为1.85 mg/L。喹烯酮对等鞭金藻3011的24 h-EC_(50)为0.41 mg/L,表明喹烯酮对等鞭金藻3011的生长抑制作用较小新月菱形藻更敏感。2)暴露24 h后,随着喹烯酮浓度的增大,小新月菱形藻叶绿素a含量下降;而等鞭金藻3011叶绿素a的含量基本不受影响。3)暴露24 h后,两种海洋微藻的总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性随着喹烯酮浓度的升高均显著增加(P<0.05),各实验组丙二醛(MDA)含量也高于对照组,其中等鞭金藻3011对喹烯酮更敏感,说明喹烯酮对两种微藻均能造成氧化胁迫,对细胞造成氧化损伤。研究表明,喹烯酮对两种微藻均具有显著急性毒性效应,对两种微藻而言,喹烯酮属于高毒物质,等鞭金藻3011对喹烯酮更敏感。本研究可为正确评价兽药喹烯酮的使用安全性提供基础数据。

荧光分析法检测金藻对Zn^(2+)的利用

研究球等鞭金藻3011(Isochrysis Galbana 3011)对Zn2+的利用。采用FDA-PI双色荧光分析法对处理藻液进行流式细胞技术检测和荧光显微镜镜检,评价4 h和24 h的细胞活性,通过单因素对比试验设计,试验数据使用spss17.0统计软件进行方差分析。结果在活性浓度作用域中,未发现致毒现象,藻细胞长势良好,Zn2+处理Isochrysis Galbana 30114 h、24 h时,FDA-PI荧光检测显示Zn2+浓度为80μg/L时流式检测结果与对照组比较具统计学意义,藻细胞膜的完整性几乎没有受到影响,而FDA荧光检测则表明藻细胞的脂酶活性受到刺激。这一趋势在处理24 h时依然存在,并获得最大活度。研究表明80μg/L是Zn2+利用的最佳浓度域,说明Zn2+的摄入加速了细胞膜上磷脂代谢。

Cu^(2+)对两种海洋微藻生长和叶绿素荧光特性的影响

运用水样叶绿素荧光仪(WATER-PAM)研究Cu2+胁迫下,湛江叉鞭金藻(Dicrateria zhanjiangensis)和球等鞭金藻3011(Isochrysis galbana MACC/H59)叶绿素荧光特性的变化,同时监测微藻的生长情况。结果就叶绿素荧光参数而言,湛江叉鞭金藻和球等鞭金藻3011的叶绿素荧光参数Fv/Fm,Fv/F0,Yield和ETR均随着Cu2+浓度的增大而明显降低;就生长情况而言,随着Cu2+浓度的增大,两种海洋微藻细胞密度的增长明显变缓。在24h时Cu2+对湛江叉鞭金藻的毒性大于球等鞭金藻3011,48～96h时Cu2+对球等鞭金藻3011的毒性大于湛江叉鞭金藻,Cu2+的毒性随着胁迫时间的延长而逐步增大。

培藻肥水型EM菌对3种微藻生长的影响

在水温(22±1)℃和连续光照强度为50μmol·m^(-1)·s^(-2)下,取主要由乳酸菌、硝化菌、芽孢杆菌、光合菌,及酵母菌等组成的培藻肥水型EM菌0.5m L、2.5m L或5.0m L,分别加入到200m L密度相同的小新月菱形藻Nitzschia closterium f.、球等鞭金藻3011 Isochrysis galbana parke和小球藻Chlorella sp.中培养15d,以f培养基为对照,研究不同浓度培藻肥水型EM菌对这3种藻类生长的影响。结果表明:EM菌对金藻、硅藻、绿藻的生长都有一定的促进作用,其中对金藻及硅藻生长的促进作用更加显著,生长率提高20%~50%,最终细胞密度有所提高,添加5m L促生长作用更持久。

赤霉素对球等鞭金藻3011生物量、细胞形态与不同生长时期群体细胞活性的影响

目的观察赤霉素(gibberellins,GA)的添加量对球等鞭金藻3011(Isochrysis galbana 3011)生物量、细胞形态与不同生长时期群体细胞活性的影响。方法取处于指数生长期的球等鞭金藻3011藻液,分别添加终浓度为0(溶剂对照)、0.001、0.003、0.005、0.007、0.01、0.03、0.05、0.07、0.1 mg/L的赤霉素溶液,测定球等鞭金藻3011的密度和细胞形态;采用流式细胞技术对指数生长期(第8天)、相对生长下降期(第13天)和静止期(第18天)的球等鞭金藻3011群体细胞活性进行测定。结果添加0.005 mg/L赤霉素可使球等鞭金藻3011的生物量达到最高(1.76×108/ml);且与溶剂对照组比较,球等鞭金藻3011细胞面积增大,亮度提高(P<0.05或P<0.01)。0.07 mg/L赤霉素可使相对生长下降期群体细胞的活性最高(99.73%),引起指数生长期延长。结论 0.005 mg/L赤霉素可促进球等鞭金藻3011生物量和细胞形态指数的增加;0.07 mg/L赤霉素可提高群体细胞活性,延长了指数生长期。

海洋微藻高度不饱和脂肪酸的研究——Ⅱ.环境因子对球等鞭金藻3011中高度不饱和脂肪酸含量的影响

微藻在不同培养条件下,藻体中脂类和高度不饱和脂肪酸(PUFA)的含量及种类可发生很大变化。因此,研究不同培养条件对其含量的影响,以期寻找既能促进藻类较快生长,又能使其体内PUFA含量较高的培养条件,对于促进水产养殖的发展,乃至使其成为生产EPA和DHA的工业原料,无疑都具有重要的意义。

一种新型多节隔板-平板式光生物反应器的数值和实验研究

光是影响光生物反应器培养效率的最主要因素之一。而在一定的外部光强下,光生物反应器内部的混合状况对微藻细胞生长有重要影响。采用CFD(Computational Fluid Dynamics)模型对一种新型多节隔板-平板式光生物反应器在不同通气量下的流场分布进行了模拟并与PIV(Particle Image Velocimetry)测量结果进行比较,结果表明CFD模型可用于光生物反应器流场的模拟;利用CFD模型对不同隔板节数的平板式光生物反应器的内部流场进行了模拟,对光照方向混合进行定量研究,并通过分析光照方向径向速度U、下降通道体积平均湍动能ADT、流体(藻液)绕隔板循环一周所用时间tc、下降通道(光区)停留时间占藻液绕隔板循环一周所用时间的比例ε四个参数来优化光生物反应器的隔板节数。理论分析表明,三节隔板-平板式光生物反应器为最佳选择,并通过球等鞭金藻3011培养实验对此进行了验证。

山东北部沿海高温季节地下卤淡水在金藻3011培养中的应用

球等鞭金藻3011为陈椒芬从大溪地金藻分离出的一个高温生态品系，属于金藻门、普林藻纲、等边藻目、等边藻科。最适温度10～35％，最适盐度10～30，最适光照1000～10000lx。具有细胞膜薄、没有细胞壁、蛋白质含量高、易被鱼虾蟹贝消化吸收的特点，在水产经济动物生产中被广泛应用。

几种微藻的培养技术

本文结合生产实际，提出稳定培养微藻的几项措施。1藻种的选用 海产动物育苗的单胞藻品种主要为小新月菱形藻、三角褐指藻、扁藻、球等鞭金藻3011、绿金藻3012、盐藻、小球藻、角毛藻等。