贯筋藤酶解核桃分离蛋白及其体内抗疲劳作用

为了研究核桃蛋白酶解物的抗疲劳作用,为其功能性产品的开发和利用提供科学依据。本文以超临界萃取的核桃粕为原料,提取核桃分离蛋白(WPI),使用贯筋藤蛋白酶酶解WPI,以水解度为指标,研究最佳酶解条件制备核桃肽,并研究不同分子量的核桃蛋白酶解物对小鼠运动性疲劳的缓解作用。将小鼠随机分为五组,每日经口灌胃受试样品,干预周期为一个月,最后进行负重及力竭游泳实验,测定血清尿素氮(BUN)、乳酸(LA)、肝糖原(HG)、肌糖原(MG)、谷胱甘肽过氧化氢酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量。SDS-PAGE凝胶电泳表明贯筋藤蛋白酶对WPI有明显的降解作用;单因素实验结合响应面试验表明,当料液比为9:100、pH9.6、酶添加质量9.4%、酶解时间180 min、酶解温度63℃时,水解度最高达30.1%;HE染色显示,使用贯筋藤蛋白酶提取的酶解物对小鼠无任何毒副作用;与其他组相比,分子量小于3000 Da的核桃蛋白酶解物干预小鼠的LA和BUN含量有所降低,HG和MG含量提高,延长负重游泳时间较为显著(P<0.05),核桃蛋白酶解物干预的各组小鼠血清中SOD酶、GSH-Px酶活性显著提高(P<0.05)。表明核桃蛋白酶解物可以缓解小鼠运动性疲劳,而小分子量的核桃蛋白酶解物效果更显著,这可能是通过调节体内抗氧化活性实现的。

不同产地宽筋藤药材质量研究

目的:建立宽筋藤药材UPLC特征图谱及含量测定方法,对不同产地宽筋藤药材进行综合评价。方法:对21批不同产地宽筋藤药材进行特征图谱及含量同法测定,并结合聚类分析、偏最小二乘法分析对其质量进行评价。结果:所建立的特征图谱共确定了20个共有峰,并通过对照品比对指认了其中2个成分,分别为紫丁香苷和木兰花碱,聚类及偏最小二乘法分析显示21批样品可以分为两类,含量测定结果则显示不同产地之间的样品含量差异较大。结论:所建立的方法科学合理,能更全面反映不同产地宽筋藤药材的质量,为宽筋藤药材的质量控制提供了参考。

百色地区野生宽筋藤总生物碱及紫丁香苷的含量分析

目的:分析测定百色地区野生宽筋藤及其不同药用部位的总生物碱、紫丁香苷含量差异和不同季节含水量区别,为产地采收加工宽筋藤提供理论支持。方法:采用紫外-可见分光光度计法测定总生物碱的含量;采用HPLC法测定紫丁香苷含量;采用烘干法测定不同季节宽筋藤的水分含量计算其折干率。结果:宽筋藤不同药用部位总生物碱的含量差异明显,皮部含量明显高于木质部;不同直径的宽筋藤总生物碱含量差异较大,中等藤与细藤差异不明显,在较粗的宽筋藤中总生物碱含量最高;不同药用部位的紫丁香苷含量差异不显著;不同直径的宽筋藤中紫丁香苷的含量差异显著,随着藤茎的直径的增加含量越高;冬季含水量较低。结论:在一定范围内,宽筋藤总生物碱与紫丁香苷含量与生长年限呈正相关;冬季采收效益最高。

宽筋藤化学成分、药理作用研究进展及其质量标志物的预测分析

宽筋藤民间应用历史悠久,主要含有萜类、木脂素类、苯丙素类、黄酮类、甾体类、生物碱类等化学成分,具有镇痛、抗类风湿性关节炎、抗阿尔茨海默病、抗糖尿病、保肝等药理活性。就近年来有关宽筋藤的相关化学成分及其药理作用进行综述,并在此基础上结合质量标志物(quality marker, Q-Marker)的核心概念,从植物亲缘学及化学成分特有性、传统药性、传统功效及拓展功效、化学成分可测性和网络药理学方面进行宽筋藤质量标志物的预测分析。结果发现与其传统功效及拓展功效相关药理作用的活性成分主要为生物碱、木脂素类、苯丙素类和萜类成分,并初步预测出小檗碱、巴马汀、伪巴马汀、药根碱、橙黄胡椒乙酰胺、反式-N-p香豆酰基酪胺、 N-反式-阿魏酰酪胺、 N-反式-咖啡酰酪胺、丁香脂素、紫丁香苷、反式丁香苷、顺式-克罗酰胺K、克罗酰胺K、tinosinen、tinosinenside A、tinoscorside D等成分可作为宽筋藤质量标志物的候选化合物,为建立和完善宽筋藤质量标准提供依据,也为宽筋藤药材质量的深入研究及综合利用提供参考。

宽筋藤合剂联合壮医经筋疗法治疗交感神经型颈椎病患者的疗效观察

目的 观察应用宽筋藤合剂联合壮医经筋疗法治疗交感神经型颈椎病患者的临床疗效。方法 选取2021年6月—2022年7月期间在广西国际壮医院针灸推拿科治疗的240例交感神经型颈椎病患者,按照随机数字表法分为观察组和对照组,每组各120例。对照组采用常规推拿针刺手法,观察组采用壮医经筋疗法联合宽筋藤合剂。治疗2周后,观察比较两组患者临床疗效、不良反应情况,治疗前后对患者颈椎疼痛评分(Visual analogue scale, VAS)、交感神经症状评分、椎动脉与基底动脉平均血流速度[右椎动脉(Right vertebral artery, RVA)、左椎动脉(Left vertebral artery, LVA)、基底动脉(Basilar artery, BA)]、血液流变学指标[全血高、中、低切黏度(Whole blood viscosity with high, midst and low, WBV),血浆黏度(Plasma viscosity, ηb),红细胞压积(Hematocrit, HCT)、血沉(Erythrocyte sedimentation rate, ESR)、红细胞聚集指数(Red blood cell aggregation index, AI)]变化。结果 治疗后观察组临床总有效率92.86%(104/112)明显高于对照组82.69%(86/104),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗2周后对照组VAS、交感神经症状评分均较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);治疗1、2周后观察组VAS、交感神经症状评分均较治疗前明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);且观察组VAS、交感神经症状评分均优于对照组治疗同期,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗2周后观察组患者LVA、RVA与BA平均血流速度均较治疗前明显加快,差异有统计学意义(P<0.05);且观察组LVA、RVA与BA平均血流速度均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗2周后观察组患者WBV、ηb、HCT、ESR及AI指标均较治疗前明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);且观察组WBV、ηb、HCT、ESR及AI指标均较对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗期间,两组患者均无不良反应发生。结论 应用壮医经筋疗法联合宽筋藤合剂治疗交感神经型颈椎病,能够明显改善患者脑部供血、颈椎生理曲度,提高治疗交感神经型颈椎病临床总有效率。

宽筋藤水提液镇痛抗炎作用的实验研究

目的:研究宽筋藤水提液镇痛抗炎作用。方法:给药组小鼠分别给予宽筋藤水提液高、中、低剂量(15.6,7.8,3.9 g/kg)灌胃,1次/d,连续灌胃给药7 d,采用醋酸扭体法和福尔马林致痛法进行镇痛实验研究,采用腹腔毛细管通透增加法和二甲苯致小鼠耳肿胀法进行抗炎实验研究,观察宽筋藤水提液的镇痛抗炎作用。结果:给药组与空白对照组比较,宽筋藤水提液能显著减少冰醋酸刺激引起的小鼠扭体反应次数(P<0.05,n=10);小鼠福尔马林致痛实验在第I时相、第II时相的舔足及抖足累积时间均显著缩短(P<0.05或P<0.01,n=10);宽筋藤水提液高、低剂量能显著抑制二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀度(P<0.01,n=10),具有较强的肿胀抑制作用;宽筋藤水提液的中剂量组对冰醋酸刺激小鼠腹腔毛细管通透性增加试验有显著抑制作用,炎症因子的渗出率显著降低(P<0.05,n=10)。结论:宽筋藤水提液对小鼠有镇痛抗炎作用。

贯筋藤鲜茎中凝乳酶的提取工艺研究

以云南西北部地区的野生植物贯筋藤的鲜茎为原料,在单因素的试验基础上,采用L9(33)正交试验方法,以贯筋藤鲜茎中凝乳酶活力为评价指标,研究了不同的预处理方式、料液比、浸泡时间、浸泡温度对其提取工艺的影响,确定了贯筋藤鲜茎中凝乳酶的最佳提取条件和提取率。结果表明,贯筋藤鲜茎中凝乳酶的提取最佳条件为料液比1∶20(g∶m L),提取时间40 min,提取温度65℃,在此条件下得到的凝乳酶活力为260.984 SU/m L,提取率为31.35%。

藏药宽筋藤的化学成分研究

目的：研究藏药宽筋藤的化学成分。方法：采用硅胶柱色谱、薄层色谱和制备高效液相色谱等分离纯化技术,结合波谱方法分离鉴定化合物结构。结果：从宽筋藤中分离纯化得到12个化合物,分别鉴定为：齐墩果酸（1）、熊果酸（2）、没食子酸（3）、对羟基苯甲酸（4）、异鼠李素（5）、p-香豆酰-多巴胺（6）、二十四烷酸（7）、二十八烷醇（8）、十九烷醇（9）、十八烷酸（10）、β-谷甾醇（11）、胡萝卜苷（12）。结论：其中,化合物1~10为首次从该植物中分离得到。

宽筋藤对类风湿性关节炎模型大鼠关节肿胀及脾脏组织病理学的影响

目的:观察宽筋藤对弗氏完全佐剂(CFA)诱导的佐剂性关节炎(AA)大鼠关节肿胀及脾脏组织病理改变的影响。方法:足跖皮内注射CFA复制AA大鼠模型,将模型大鼠随机分成模型组、甲氨蝶呤阳性对照组及宽筋藤高、中、低剂量组。观察各组大鼠一般状态;统计各组大鼠四肢关节肿胀个数;足容积法测量继发侧足爪肿胀度;光学显微镜观察脾脏组织病理学变化。结果:经宽筋藤治疗后,AA大鼠在体质量、关节肿胀、灵活性、毛色、饮食等一般症状方面均有所改善。与模型组比较,宽筋藤各剂量组关节肿胀个数显著减少(P<0.05或P<0.01)。对脾脏组织病理改善方面,宽筋藤各剂量均能不同程度改善AA大鼠脾脏组织的病理损害,降低脾脏组织病理改变程度评分(P<0.05)。结论:宽筋藤对AA大鼠有一定治疗作用。

宽筋藤提取物对高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的影响及对大鼠痛风性炎症的预防作用

目的观察宽筋藤提取物对高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的影响,并观察其对大鼠痛风性炎症的预防作用。方法雄性小鼠100只分为A、B两组各50只,其中50只制作高尿酸血症模型(A组),分为5组,其中3组分别采用宽筋藤提取物高(10.0 g/kg)、中(5.0 g/kg)、低(2.5 g/kg)剂量灌胃,另两组采用20 mg/kg别嘌醇片、等体积蒸馏水灌胃。另取50只小鼠(B组)为对照,分为5组,其中3组分别采用宽筋藤提取物高、中、低剂量灌胃,另两组采用20 mg/kg别嘌醇片、等体积蒸馏水灌胃,两组均1次/d,连续10 d,第10天灌胃60 min时采用磷钨酸比色法检测两组血清尿酸。另取雄性大鼠40只随机分为1、2、3、4组,1、2组分别采用宽筋藤提取物高、低剂量灌胃,3、4组予等体积蒸馏水灌胃,各组均1次/d,连续12 d,第12天灌胃1 h取1、2、3组大鼠,于右后足跖皮下注射0.15 m L 100 g/L MSU,制作痛风性炎症大鼠模型,分别于注射前后的第1、2、3、4、5、6 h观察各组大鼠右后足跖肿胀情况,计算其肿胀度。结果 A组宽筋藤提取物高剂量、中剂量干预者小鼠血清尿酸水平均低于A组等体积蒸馏水灌胃者(P均<0.05)。3组大鼠右后足足跖肿胀度明显高于4组(P均<0.05)。注射1、3 h时,1、2组大鼠右后足足跖肿胀度低于3组(P均<0.05);注射2、5 h时,1、2组大鼠右后足足跖肿胀度高于3组(P均<0.05);注射4 h时,1组大鼠右后足足跖肿胀度低于3组,2组大鼠右后足足跖肿胀度高于3组(P均<0.05);注射6 h时,1组大鼠右后足足跖肿胀度低于3组(P<0.05)。结论宽筋藤提取物可降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平。宽筋藤提取物可预防大鼠痛风性炎症。

藏药宽筋藤抗胶原诱导大鼠类风湿性关节炎的药理作用研究

目的研究宽筋藤提取物对牛Ⅱ型胶原诱导的类风湿性关节炎(Collagen-induced Arthritis,CIA)模型大鼠的改善作用。方法取大鼠随机分成5组,每组10只,即空白组,模型组,甲氨蝶呤组(1 mg·kg^(-1)),宽筋藤高、低剂量组(宽筋藤提取物12,6 g·kg^(-1))。除空白组外,其余各组大鼠右后足底皮下注射牛Ⅱ型胶原与弗氏完全佐剂的混悬剂0.1 mL,7 d后在大鼠尾根部及背部分3点皮内注射等量的混悬剂。造模第3天开始灌胃给药,至第4天结束,测量大鼠右后足掌和踝关节周长,每周1次;步态分析仪采集大鼠步态信息。HE染色观察大鼠膝关节和踝关节的病理变化。结果宽筋藤提取物可以明显改善CIA大鼠足掌及踝关节肿胀度,缓解疼痛;明显减轻滑膜增生,减少炎细胞浸润及血管翳的形成,并改善软骨病变损伤。结论宽筋藤提取物对CIA大鼠有显著的改善作用,对抗类风湿性关节炎药物开发有一定的意义。

宽筋藤的本草考证

通过文献检索,查阅、整理有关宽筋藤的本草记载资料,并进行对比分析和归纳总结。宽筋藤之名始见于《生草药性备要》,其后多部岭南药学本草都有记载,但其基原品种尚不确定,有防己科中华青牛胆Tinospora sinensis(Lour.)Merr.或石松科石松Lycopodium japonicum Thunb.ex Murray、铺地蜈蚣Lycopodium cerunum L.等多种来源的可能。直至1959年出版的《广西中兽医药用植物》才首次以防己科植物中华青牛胆Tinospora sinensis(Lour.)Merr.正品明确收载。传统中医药以其藤茎部分入药,主要有舒筋活络、祛风止痛的功效;民族医药则以其藤茎、叶、根入药,除有舒筋活络、祛风止痛的功效外,还有补虚、调经等作用。

宽筋藤中L-1,2,4/3,5环己五醇的分离鉴定

从宽筋藤的水提取物中分离得到一种无色结晶体,经光谱分析确定其化学结构为L-1,2,4/3,5环己五醇,该化合物系首次从天然界中分离得到。

宽筋藤对类风湿性关节炎模型大鼠踝关节组织病理学的影响

为了观察宽筋藤对弗氏完全佐剂(CFA)诱导的佐剂性关节炎(AA)大鼠踝关节组织病理改变的影响,除正常组外,其余各组大鼠足跖皮内注射CFA致AA大鼠模型,将模型大鼠随机分成模型组、宽筋藤高剂量组、宽筋藤中剂量组、宽筋藤低剂量组、阳性药物组,灌胃给药20 d,观察各组大鼠继发侧足爪肿胀度及踝关节滑膜、软骨、关节腔、周围软组织炎症反应等组织病理改变情况,进行综合评分。实验结果表明,与模型组比较,宽筋藤能减轻AA大鼠关节肿胀程度,并显著抑制炎症细胞的浸润和滑膜增生以及血管翳的形成,减轻软骨及骨质损伤程度(P<0.05或P<0.01)。实验证明,宽筋藤可显著改善AA大鼠关节组织病理改变。

藏药宽筋藤极性部位的化学成分研究

目的:研究藏药宽筋藤极性部位的化学成分。方法:采用硅胶柱层析、半制备液相色谱和Sephadex LH-20色谱,重结晶等方法进行分离纯化,运用波谱数据并结合文献鉴定化学结构。结果:从藏药宽筋藤中分离得到12个化合物,分别鉴定为:宽筋藤苷A(1)、宽筋藤苷B(2)、Cyclo(D-Tyr-D-Tyr)(3)、反式丁香苷(4)、tinoscorside D(5)、turpinionoside A(6)、3,4-dimethoxyphenyl-O-β-D-apiofuranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside(7)、3,4,5-trimethoxyphenyl-O-β-D-apiofuranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside(8)、lcariside F2(9)、顺式丁香苷(10)、corchoionoside C(11)、松脂素(12)。结论:其中,化合物3、6~11均为首次从该植物中分离得到。

宽筋藤组织培养的初步研究

为了研究宽筋藤快繁技术,以宽筋藤健壮无病虫害的嫩茎和嫩叶作为试验材料,研究其表面消毒方法和在添加不同浓度激素的培养基上培养,对宽筋藤进行组织培养研究。结果表明:茎段表面采用75%酒精消毒30 s,用0.1%升汞浸泡5 min,无菌水漂洗2次后,再用0.1%升汞浸泡5 min,无菌水漂洗4次的效果最佳,存活率为66.7%;而叶片直接用升汞处理12 min的消毒效果较好,存活率为53.3%;适宜侧芽诱导和增殖的培养基为MS+6-BA 0.05 mg/L+GA30.04 mg/L+NAA 0.02 mg/L,30天的增殖系数为3;诱导愈伤组织以培养基MS+2,4-D 1.5 mg/L+BA 0.5 mg/L的效果较好,对嫩茎的诱导率可达83.3%,对嫩叶的诱导率可达76.7%,但所诱导的愈伤组织分化能力低,均不能分化不定芽;适宜生根的培养基为MS+NAA 0.1 mg/L,生根率可达到100%,且移栽成活率96%。

宽筋藤对辐射损伤小鼠造血功能的影响

目的研究宽筋藤对辐射损伤小鼠造血功能的影响。方法小鼠被分为五组:阴性对照组、照射对照组、药物高、中、低剂量组。实验组小鼠在^(60)Coγ射线6Gy照射后,药物组被给予不同剂量药物,其余两组给予生理盐水。分别在照射前4小时、照后第7、14天检测血象三次。在照后14d,处死小鼠,观察药物对骨髓DNA含量、骨髓有核细胞数、脾结节的影响。结果宽筋藤照后给药,给药组小鼠外周血红细胞、血小板,骨髓有核细胞计数及骨髓DNA含量比照射对照组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论宽筋藤照后给药能促进放疗后骨髓造血功能的恢复,具有一定的抗辐射作用。

宽筋藤化学成分的研究

目的:研究宽筋藤的化学成分。方法:采用硅胶柱层析、反相硅胶柱层析及半制备HPLC等色谱技术进行分离纯化,采用现代波谱技术鉴定化合物结构。结果:从宽筋藤中分离得到12个化合物,分别鉴定为:环-(缬-酪)二肽(1)、环-(异亮-丙)二肽(2)、酪氨酸(3)、脯氨酸(4)、苯甲醇-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、4,4′-dimethoxy-3′-hydroxy-7,9′:7,9′-diepoxylignan-3-O-D-glucopyranoside(6)、丁香脂素-4′-O-β-葡萄糖苷(7)、tinosinen(8)、tinosineside B(9)、槲皮素(10)、芦丁(11)、异鼠李素(12)。结论:其中,化合物1～6为首次从该植物中分离得到。

野生贯筋藤花的营养特性分析

以野生贯筋藤花为材料,采用相关国家标准规定方法,研究其常规、微量营养成分以及重金属。结果表明,野生贯筋藤花中水分含量为90.67%,蛋白质含量为2.55%,脂肪含量为3.33%,灰分含量为2.07%;野生贯筋藤花富含维生素和矿物质,每100 g中有硫胺素0.134 mg、核黄素0.050 5 mg、VC 63.3 mg;钙、磷、钾、铁、锌、铜含量分别为768、594、5 240、13.7、2.98、1.64 mg/kg。此外,野生贯筋藤花还含有丰富的赖氨酸等必需氨基酸和黄酮类成分,且重金属污染小,绿色无污染。野生贯筋藤花营养丰富、食用价值高、开发潜力较大。

宽筋藤总生物碱含量测定方法研究

目的建立宽筋藤药材中总生物碱的含量测定方法。方法以盐酸药根碱为对照品,采用紫外-可见分光光度法测定宽筋藤总生物碱的含量,测定波长为430nm。结果盐酸药根碱在0.001 1-0.006 5mg·mL-1范围内与吸光度呈良好线性关系,回归方程：Y=14.747 X-0.010 7（r=0.999 5）。盐酸药根碱平均回收率为100.4%,RSD=2.0%（n=6）。结论 16批宽筋藤药材总生物碱含量测定结果表明,所建立的方法简便、准确,可用于宽筋藤药材总生物碱的含量测定。