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逆转录聚合酶链反应与常规法检测蚊体内黄病毒的比较研究 被引量:3
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作者 林立辉 陈翠华 +2 位作者 方美玉 彭翼飞 蒋廉华 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS CSCD 1997年第6期444-446,共3页
目的:检测比较蚊体内的黄病毒。方法:采用RT-PCR技术及常规的C6/36细胞培养结合免疫荧光法。结果:无论实验感染的登革热病毒蚊虫标本,还是从野外捕捉的标本,均表明RT-PCR检出黄病毒的阳性率比常规法高,且快速、敏捷,操作简便... 目的:检测比较蚊体内的黄病毒。方法:采用RT-PCR技术及常规的C6/36细胞培养结合免疫荧光法。结果:无论实验感染的登革热病毒蚊虫标本,还是从野外捕捉的标本,均表明RT-PCR检出黄病毒的阳性率比常规法高,且快速、敏捷,操作简便;常规法检出周期长(2~3周),操作复杂、繁琐和反复多次,检出率低。但常规法能通过细胞病变,观察病毒的毒力,这是RT-PCR所不及的。结论:以RT-PCR结合常规法进行虫媒病毒的研究,将更有利于探索蚊虫与虫媒病毒的关系和内在规律。 展开更多
关键词 逆转录 聚合反应 常规 黄病毒 蚊虫
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逆转录多重套式聚合酶链反应在儿童病毒性脑炎病原学研究中的应用 被引量:5
2
作者 孙永梅 梁东 李海波 《小儿急救医学》 CAS 2005年第5期378-380,共3页
目的探讨早期同步检测病毒性脑炎(VE)主要病原新方法.方法应用逆转录多重套式聚合酶链反应(RT-M-nPCR)对100例VE患儿及73例对照组脑脊液(CSF)标本进行单纯疱疹病毒(HSV)DNA与肠道病毒(EV)RNA同步检测.结果整个过程约需5 h.该法与ELISA... 目的探讨早期同步检测病毒性脑炎(VE)主要病原新方法.方法应用逆转录多重套式聚合酶链反应(RT-M-nPCR)对100例VE患儿及73例对照组脑脊液(CSF)标本进行单纯疱疹病毒(HSV)DNA与肠道病毒(EV)RNA同步检测.结果整个过程约需5 h.该法与ELISA及经典nPCR方法比较,符合率分别为96%及100%.100例VE患儿CSF标本中,HSV阳性18例,EV阳性17例,在100例VE中,有26例重症,其中HSV感染14例(53.85%),EV感染7例(26.92%),不明病原5例(19.23%).不同病原检出率与年龄的关系:年龄~3岁、~7岁、~14岁HSV分别检出7.4%、11.9%、35.5%,EV分别检出25.9%、19.05%、6.5%.结论RT-M-nPCR是一种能在早期同步检测HSV及EV的具有巨大潜在应用价值的病原检测技术;在VE重症中HSV感染最常见;HSV感染在年长儿发病率高,而EV感染在学龄前及婴幼儿中多见. 展开更多
关键词 病毒性脑炎 逆转录多重套聚合反应 单纯疱疹病毒 肠道病毒
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逆转录套式聚合酶链反应检测库存血丙型肝炎病毒核糖核酸的临床意义
3
作者 陈会枝 《中国煤炭工业医学杂志》 2003年第9期889-889,共1页
关键词 丙型肝炎病毒 逆转录聚合反应 库存血 丙型肝炎抗体 输血后肝炎 发病率
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逆转录-半套式-聚合酶链反应在流行性乙型脑炎病人病原学诊断中的临床应用研究(摘要)
4
作者 丁淑军 余光开 张建军 《泸州医学院学报》 2001年第5期379-379,共1页
关键词 流行性乙型脑炎 病原学诊断 逆转录-半套-聚合反应
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逆转录聚合酶链式反应检测胎盘多药赖药基因与胎盘胆汁酸排泌的相关性
5
作者 陈新萍 《江西医药》 CAS 2010年第8期812-814,共3页
目的探讨胎盘多药赖药(MDR3)基因与妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)胎盘胆汁酸排泌的相关性。方法收集妊娠晚期ICP患者(ICP组)和正常晚孕妇女(对照组)各30例,分别采集母体静脉血和新生儿脐静脉血及胎盘组织,采用放射免疫分析方法检测母血及... 目的探讨胎盘多药赖药(MDR3)基因与妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)胎盘胆汁酸排泌的相关性。方法收集妊娠晚期ICP患者(ICP组)和正常晚孕妇女(对照组)各30例,分别采集母体静脉血和新生儿脐静脉血及胎盘组织,采用放射免疫分析方法检测母血及脐血中的甘胆酸(CG)含量;采用逆转录聚合酶链式反应法(RT-PCR)测定两组胎盘组织中多药赖药基因mRNA的相对表达量。结果 (1)ICP组母血、脐血中CG水平均高于对照组(28.86±8.51vs2.70±2.19;19.97±8.80vs5.83±5.06μg/ml),以上差异均有统计学意义(P<0.001);ICP组母血CG含量高于脐血中的含量,两者之间存在正相关(r=0.588);对照组脐血CG含量高于母血中的含量,两者之间无直线关系(r=0.212)。(2)两组胎盘组织中均检测到MDR3基因的mRNA,与对照组相比,ICP组胎盘组织中MDR3基因的mRNA水平下降(3.33±1.03vs6.85±1.26),差异有统计学意义(P<0.001);且MDR3-mRNA相对量与脐血甘胆酸和母血甘胆酸水平呈负相关性(r=-0.627;r=-0.795)。结论 MDR3基因可能参与了胎盘胆汁酸的排泌。 展开更多
关键词 妊娠期肝内胆汁淤积症 甘胆酸 多药赖药基因(MDR3) 逆转录聚合反应(RT-PCR) 放射免疫分析
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逆转录—聚合酶链反应—酶联夹心杂交法定量检测人IL-6mRNA
6
作者 邹立林 吕建新 《检验医学教育》 2002年第1期43-46,共4页
目的:建立一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的逆转录—聚合酶链反应—微孔板酶联夹心杂交技术定量检测人IL-6mRNA的方法。方法:从人外周静脉血单个核细胞提取总RNA,进行RT-PCR扩增,PCR产物经热变性后与检测探针一起加入已包被捕获探... 目的:建立一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的逆转录—聚合酶链反应—微孔板酶联夹心杂交技术定量检测人IL-6mRNA的方法。方法:从人外周静脉血单个核细胞提取总RNA,进行RT-PCR扩增,PCR产物经热变性后与检测探针一起加入已包被捕获探针的微孔板内进行夹心杂交,用链亲和素—辣根过氧化物酶(SAV—HRP)及底物系统检测杂交信号。结果:该方法检测IL-6mRNA的灵敏度明显高于逆转录—聚合酶链反应—琼脂糖凝胶电泳;特异性高,RT-PCR和酶联夹心杂交均无非特异阳性信号出现;重复性良好。结论:本方法操作简单、灵敏度高、特异性强、结果数据化,适合于细胞因子mRNA的定量检测。 展开更多
关键词 联夹心杂交 定量检测 IL-6MRNA 逆转录-聚合反应 白细胞介素-6 核糖核酸
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实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法与细胞培养法检测流行性感冒病毒的比较 被引量:1
7
作者 姜红涛 姚秀林 《中外医疗》 2015年第8期192-193,共2页
目的比较实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法与细胞培养法检测流行性感冒病毒的差异。方法采用实时荧光定量RT-PCR及经典的狗肾传代细胞病毒分离2种方法 ,同时对流感监测点送检的80份疑似流感标本检测流感病毒。结果细胞培养病... 目的比较实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法与细胞培养法检测流行性感冒病毒的差异。方法采用实时荧光定量RT-PCR及经典的狗肾传代细胞病毒分离2种方法 ,同时对流感监测点送检的80份疑似流感标本检测流感病毒。结果细胞培养病毒分离的阳性数为26份,实时荧光定量RT-PCR的阳性数为36份,好=8.1,P<0.005。结论 通过该实验,验证了实时荧光定量RT-PCR的确快速敏感,适用于实验室快速诊断。 展开更多
关键词 实时荧光定量逆转录-聚合反应 细胞培养 流感病毒
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套式聚合酶链反应法检测外周血单个核细胞中HBcVccDNA 被引量:4
8
作者 郑守虎 董庆鸣 《中国卫生检验杂志》 CAS 2008年第11期2317-2318,共2页
目的:建立套式聚合酶链反应法(nPCR)检测慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)中乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)。方法:根据HBV基因组DNA正负链上下游缺口序列,设计两套相对保守的引物,建立HBV cccDNA套式PCR,并用该法检测... 目的:建立套式聚合酶链反应法(nPCR)检测慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)中乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)。方法:根据HBV基因组DNA正负链上下游缺口序列,设计两套相对保守的引物,建立HBV cccDNA套式PCR,并用该法检测200例慢性乙型肝炎患者PBMC中HBV cccDNA。结果:该法检测200例慢性乙型肝炎患者,HBV cccDNA阳性率为60%。结论:套式PCR法简便、灵敏,可用于测定PBMC中HBV cccDNA。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 聚合反应 共价闭合环状DNA(cccDNA) 慢性乙型肝炎
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筑巢式聚合酶链反应检测急性早幼粒细胞白血病PML/RARαmRNA
9
作者 程久芬 张月芳 +3 位作者 荆腊滢 周云 李震宇 郑田春 《镇江医学院学报》 2001年第5期602-604,共3页
目的 :观察急性早幼粒细胞白血病 (APL)患者PML RARαmRNA的表达情况。方法 :应用逆转录筑巢式聚合酶链反应(NestedPCR)检测了 3 0例APL患者的PML RARαmRNA。结果 :3 0例APL患者中 2 2例检测到PML RARαmRNA ,其中 16例为L型 ,6例为S... 目的 :观察急性早幼粒细胞白血病 (APL)患者PML RARαmRNA的表达情况。方法 :应用逆转录筑巢式聚合酶链反应(NestedPCR)检测了 3 0例APL患者的PML RARαmRNA。结果 :3 0例APL患者中 2 2例检测到PML RARαmRNA ,其中 16例为L型 ,6例为S型。结论 :NestedPCR是检测APL患者PML 展开更多
关键词 筑巢聚合反应 PML RARαmRNA 早幼粒细胞白血病 急性白血病
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逆转录-套式PCR检测汉坦病毒感染的实验研究 被引量:1
10
作者 朱子犁 刘建军 +2 位作者 阳帆 汪洪富 何建凡 《中国卫生检验杂志》 CAS 2007年第3期416-418,共3页
目的:探讨逆转录-套式聚合酶链反应(RT-nested-PCR)检测汉坦病毒(Hantavirus,HV)感染的准确性和敏感性。方法:用RT-nested-PCR和直接免疫荧光法(direct immunofluorescence,FA)分别检测深圳市2005年肾综合征出血热宿主动物监测中捕获的... 目的:探讨逆转录-套式聚合酶链反应(RT-nested-PCR)检测汉坦病毒(Hantavirus,HV)感染的准确性和敏感性。方法:用RT-nested-PCR和直接免疫荧光法(direct immunofluorescence,FA)分别检测深圳市2005年肾综合征出血热宿主动物监测中捕获的鼠类中HV的感染情况。结果:在76份特异性总抗体阳性的鼠肺标本中,用RT-nested-PCR检出61份抗原阳性,而FA仅检出47份阳性。结论:RT-nested-PCR是一种比较准确的检测汉坦病毒感染的方法,其敏感性高于FA。 展开更多
关键词 汉坦病毒 逆转录-套聚合反应 直接免疫荧光
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逆转录-套式PCR检测血清中丙肝病毒RNA
11
作者 胡向阳 黄晓明 +1 位作者 高翼之 尤大钰 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第S1期3-4,共2页
利用与丙型肝炎病毒(HCV)基因组5'非编码区保守序列同源的套式引物,建立了检测血清中HCVRNA的聚合酶链反应(PCR)技术,由于在引物设计中选择了最保守的区域且避开了与黄病毒属的同源序列,保证了PCR检测的灵敏度... 利用与丙型肝炎病毒(HCV)基因组5'非编码区保守序列同源的套式引物,建立了检测血清中HCVRNA的聚合酶链反应(PCR)技术,由于在引物设计中选择了最保守的区域且避开了与黄病毒属的同源序列,保证了PCR检测的灵敏度和特异性。经逆转录和两轮PCR扩增,可检出1×10-3ul血清中的HCVRNA。研究了影响HCVRNAPCR检测的各种因素,并对RNA分离及RT-PCR反应体系进行了优化,在此基础上研制了HCV的PCR检测试剂盒。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒RNA 逆转录 聚合反应.
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庚型肝炎病毒NS3区聚合酶链反应RNA检测
12
作者 杨玉贵 许青田 杜绍财 《中国误诊学杂志》 CAS 2005年第9期1695-1696,共2页
关键词 肝炎 病毒性 人/诊断 聚合反应 RNA 病毒/分析 NS3区聚合反应 庚型肝炎病毒 RNA检测 聚合反应 结果报告 HGV 逆转录
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HGV RNA逆转录套式聚合酶链反应法的优选实验 被引量:2
13
作者 黄健 朱万孚 +2 位作者 李倬 郝娃 庄辉 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期115-115,共1页
关键词 HGV RNA 庚型肝炎 逆转录聚合反应 实验研究
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聚合酶链反应杂交ELISA对肝炎患者血清HCV RNA的测定和分析
14
作者 黄德庄 闫惠萍 +4 位作者 王凤水 罗朝霞 贺丽香 王芳 郭雁宾 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2000年第S1期59-61,共3页
HCV RNA的检测是丙型肝炎诊断的重要指标,对HCV感染的诊断、治疗和预后均有重要指导意义。HCV RNA的测定主要应用逆转录一套式聚合酶链反应法(RT-PCR)并通过琼脂糖凝胶电泳观察扩增物的阳性带判定结果。由于血清中丙型肝炎病毒含量低微... HCV RNA的检测是丙型肝炎诊断的重要指标,对HCV感染的诊断、治疗和预后均有重要指导意义。HCV RNA的测定主要应用逆转录一套式聚合酶链反应法(RT-PCR)并通过琼脂糖凝胶电泳观察扩增物的阳性带判定结果。由于血清中丙型肝炎病毒含量低微,其检出率往往不能令人满意。本研究采用HCV-PCR-H.ELISA法测定血清中HCV RNA。 展开更多
关键词 ELISA 患者血清 聚合反应 肝炎病毒 PCR产物 杂交 抗HCV阳性 检出率 HCV感染 逆转录
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羟基磷灰石抽提逆转录套式PCR检测轮状病毒
15
作者 郭乃洲 马达 王发锁 《海军医学杂志》 2001年第1期59-60,共2页
目的 :建立快速、准确、灵敏的检测轮状病毒的方法。方法 :用羟基磷灰石抽提轮状病毒RNA ,在轮状病毒基因 6片段设计引物建立RT PCR法检测腹泻婴幼儿大便中的轮状病毒。结果 :该法重复性好 ,特异性高 ,且敏感度比PAGE法至少高 10 0 0倍... 目的 :建立快速、准确、灵敏的检测轮状病毒的方法。方法 :用羟基磷灰石抽提轮状病毒RNA ,在轮状病毒基因 6片段设计引物建立RT PCR法检测腹泻婴幼儿大便中的轮状病毒。结果 :该法重复性好 ,特异性高 ,且敏感度比PAGE法至少高 10 0 0倍。 10 8例临床标本检测表明该法检测阳性率最高为 5 6 .5 %。结论 :羟基磷灰石抽提RT PCR法检测轮状病毒 ,快速、准确、灵敏度高 ,优于PAGE、ELISA和LA法。 展开更多
关键词 轮状病毒 逆转录聚合反应 羟基磷灰石
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套式逆转录聚合酶链反应在黄热病毒快速检测中的应用 被引量:8
16
作者 任瑞文 郝丽 +5 位作者 方美玉 程刚锋 洪文艳 刘建伟 田小东 林立辉 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期397-399,共3页
目的建立灵敏、特异的套式逆转录聚合酶联反应(RTPCR)快速检测黄热病毒方法。方法参照黄热病毒标准株D17序列设计套式引物,并检索国际基因序列数据库初步验证其特异性,随后对镁离子、dNTP及引物浓度,PCR反应条件进行优化,建立稳定、特... 目的建立灵敏、特异的套式逆转录聚合酶联反应(RTPCR)快速检测黄热病毒方法。方法参照黄热病毒标准株D17序列设计套式引物,并检索国际基因序列数据库初步验证其特异性,随后对镁离子、dNTP及引物浓度,PCR反应条件进行优化,建立稳定、特异的套式RTPCR快速检测黄热病毒方法,并以同属于黄病毒科的登革病毒1~4型、流行性乙型脑炎病毒为对照,验证其特异性。结果外引物扩增可获得404bp左右的特异性扩增片断,阴性对照毒株未见设计大小的扩增片断,但可见非特异性片断;内引物扩增可获得349bp左右片断,阴性对照无扩增条带。结论套式RTPCR可快速、灵敏、特异的检测黄热病毒。 展开更多
关键词 逆转录聚合反应 快速检测 黄热病毒 RT-PCR 逆转录聚合反应 流行性乙型脑炎病毒 病毒方 引物扩增 阴性对照 引物 序列设计 基因序列 反应条件 登革病毒 黄病毒科 非特异性 片断 标准株 数据库 镁离子
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实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法与RT-PCR法及细胞培养法检测甲_3型流行性感冒病毒的比较 被引量:14
17
作者 李婵 卢亦愚 +3 位作者 严菊英 冯燕 史雯 茅海燕 《中国计划免疫》 2005年第5期360-363,共4页
目的比较实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法、RT-PCR法及细胞培养法检测甲3型流行性感冒(流感)病毒的灵敏度与特异性。方法采用建立的实时荧光定量RT-PCR、RT-PCR及经典的狗肾传代细胞病毒分离等3种方法,同时对流感监测点送检... 目的比较实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法、RT-PCR法及细胞培养法检测甲3型流行性感冒(流感)病毒的灵敏度与特异性。方法采用建立的实时荧光定量RT-PCR、RT-PCR及经典的狗肾传代细胞病毒分离等3种方法,同时对流感监测点送检的60份疑似流感标本检测甲3型流感病毒。结果细胞病毒分离的阳性数为10份,RT-PCR与实时荧光定量RT-PCR的阳性数分别为12份和15份。实时荧光定量RT-PCR的灵敏度达0.01TCID50,且对甲1型流感病毒、乙型流感病毒、禽流感病毒H5、严重急性呼吸道综合征冠状病毒及其它呼吸道病毒均无交叉反应,从病毒核酸提取至完成检测仅需3h左右。结论实时荧光定量RT-PCR由于检测在密封环境中进行,避免了产物与环境间的交叉污染,且是3种方法中最为快速敏感的方法,适用于公共卫生应急疫情的实验室快速诊断。 展开更多
关键词 实时荧光定量逆转录-聚合反应 逆转录-聚合反应 细胞培养 甲3型流行性感冒病毒
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直接免疫荧光法与多重逆转录聚合酶链反应对呼吸道感染常见病毒的诊断价值 被引量:3
18
作者 孔梅 邢长永 王莺 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第23期5422-5423,共2页
目的探讨直接免疫荧光法(DFA)和多重逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对呼吸道常见病毒人鼻病毒(HRV)感染患者分泌物的检测,判断其临床诊断价值。方法选取2010年2月-2011年12月收集的急性呼吸道感染患儿鼻咽分泌物210例,分别用DFA和RT-PCR进... 目的探讨直接免疫荧光法(DFA)和多重逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对呼吸道常见病毒人鼻病毒(HRV)感染患者分泌物的检测,判断其临床诊断价值。方法选取2010年2月-2011年12月收集的急性呼吸道感染患儿鼻咽分泌物210例,分别用DFA和RT-PCR进行检测,对两组测定方法的检测结果进行判定。结果多重RT-PCR检出112份阳性标本,阳性率为53.33%,DFA检测出89份阳性标本,阳性率为42.38%,两组比较,差异有统计学意义(χ2=27.623,P<0.01)。结论 DFA检测方法可以广泛适用于临床检测中;多重RT-PCR检测方法的敏感性高,检测病毒的范围广,可以做亚型鉴定方法,适用于呼吸道病毒流行病学的调查研究。 展开更多
关键词 直接免疫荧光 多重逆转录聚合反应 呼吸道 人鼻病毒
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逆转录聚合酶链反应法在北京市流感病毒型别鉴定中的应用 被引量:3
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作者 石伟先 刘海林 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期382-385,共4页
目的 建立在流感病毒型别鉴定中使用的逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)法。方法 用常规细胞培养法扩增病毒后 ,用 2对型别鉴定引物和 4对亚型鉴定引物进行RT PCR反应。结果 在2 3株发生细胞病理变化的标本中RT PCR阳性标本为 10份 ,其... 目的 建立在流感病毒型别鉴定中使用的逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)法。方法 用常规细胞培养法扩增病毒后 ,用 2对型别鉴定引物和 4对亚型鉴定引物进行RT PCR反应。结果 在2 3株发生细胞病理变化的标本中RT PCR阳性标本为 10份 ,其中甲型 7株 (6株甲 3亚型、1株甲 1亚型 ) ,乙型 3株。结论 该方法快速、特异、灵敏 。 展开更多
关键词 逆转录聚合反应 北京 流感病毒 型别鉴定 流感病毒A型 流感病毒B型
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逆转录-聚合酶链反应酶联夹心杂交法半定量检测人白细胞介素-6 m RNA 被引量:1
20
作者 邹立林 吕建新 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期50-51,共2页
关键词 逆转录聚合反应-联夹心杂交 半定量检测 白细胞介素6 MRNA
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