从噬菌体抗体库筛选人源性抗白细胞介素8抗体

目的: 从噬菌体抗体库中筛选人源性抗IL- 8单链抗体(scFV)。方法: 采用原核表达载体pRSET- IL- 8在大肠杆菌BL21(DE3)中表达IL- 8 His融合蛋白, 并通过亲和层析纯化。以该融合蛋白为固相抗原, 对噬菌体抗体库进行 3轮淘筛, 并对所获阳性克隆进行抗原结合活性测定和DNA序列测定。结果: 获得 2株特异性抗IL- 8噬菌体抗体。对其DNA序列测定结果表明, 其VH基因均属于人IgGVH3亚群, Vλ基因分别属于人VλDPL5和VλDPL2亚群。结论: 利用噬菌体抗体库技术可不经免疫制备人源性抗IL- 8抗体, 为银屑病及相关疾病的临床应用提供了条件。

应用毕赤酵母分泌表达筛选人抗狂犬病毒抗体scFv-Fc

目的:利用毕赤酵母人抗狂犬病毒抗体分泌表达文库获得具特异性狂犬病毒抗原结合活性的分泌型小分子抗体(scFv-Fc)。方法:RT-PCR方法扩增获得一组轻链和重链可变区基因。利用重叠延伸PCR方法组装scFv基因后克隆入毕赤酵母scFv-Fc抗体库通用表达质粒pPICZα/Fc后,电转化X33酵母菌,甲醇诱导表达后进行ELISA筛选、基因序列分析及免疫印迹分析。结果:构建了抗狂犬病毒毕赤酵母分泌型scFv-Fc库,获得了12株阳性菌株。对其中2株阳性克隆进行了序列分析证实为新的抗体可变区基因。ELISA、Western blotting分析,证实该scFv-Fc具有特异性狂犬病毒抗原结合活性,相对分子质量为56 000。结论:通过毕赤酵母人抗狂犬病毒抗体scFv-Fc分泌表达文库筛选获得具较高亲和力的新scFv-Fc抗体。

噬菌体展示技术筛选人乳腺髓样癌细胞特异性结合肽

目的利用噬菌体随机七肽库体外筛选与人乳腺髓样癌Bcap-37细胞特异性结合的小分子多肽。方法培养人乳腺髓样癌Bcap-37细胞作为靶细胞,人正常乳腺上皮细胞MCF-10A为吸附细胞,将噬菌体展示随机七肽库与人乳腺髓样癌Bcap-37细胞进行减性体外筛选,用ELISA法鉴定噬菌体对人乳腺癌Bcap-37细胞的亲和力。提取亲和力较高的单克隆噬菌体DNA,测定DNA序列并翻译出相应的氨基酸序列,进行同源性分析。结果利用噬菌体随机七肽库通过4轮减性筛选获得了与人乳腺髓样癌Bcap-37细胞特异结合的小分子多肽。ELISA法表明,第1,3,5,6,8,12,14,16,17,18和20号单克隆噬菌体与人乳腺髓样癌Bcap-37细胞有很强的亲和力和特异性。测序结果显示,重复性最高的序列为LXRNTNX。结论利用噬菌体展示技术体外筛选获得了能与人乳腺癌Bcap-37细胞特异性结合的小分子多肽LXRNTNX,经检索该肽段与已知蛋白尚无同源性,因此它很有可能成为乳腺癌的早期诊断和靶向治疗新的靶点。

以鼠源重链Fd片段为模板导向筛选人源性抗γ-精浆蛋白抗体轻链

目的:以鼠源抗γ-sm抗体重链Fd片段为模板,筛选人源性抗人γ-精浆蛋白抗体轻链。方法:利用RT-PCR从前列腺癌患者外周血淋巴细胞扩增出全套的人抗体轻链基因,克隆入含鼠源性抗γ-sm抗体重链Fd片段的噬粒载体pComb3X/mFd中,电转化大肠杆菌XL1-Blue后建立人-鼠杂合的Fab抗体库。通过稀释滴定、限制性酶切和随机测序,对所建杂合库的库容、重组率和多样性分别进行鉴定,以M13K07辅助噬菌体超感染,利用亲和纯化的γ-sm为抗原,对挽救展示的噬菌体抗体库进行3轮淘筛和克隆鉴定。最后对筛选出的杂合抗体进行初步的功能检测。结果:构建成功1.2×107CFU、重组率为90%、多样性好的杂合人-鼠噬菌体抗体库。利用纯化的γ-sm3轮亲和淘筛后,5个克隆成功诱导表达特异性的pIII融合抗体。ELISA进一步检测表明,5个克隆均呈特异性阳性反应,其中2个克隆亲和力较高,测序显示其所含轻链基因序列完全相同,可变区来源于IGKV4-101胚系基因家族。结论:利用鼠源Fd片段为模板,导向筛选杂合噬菌体库,成功筛选到人源性抗人γ-精浆蛋白抗体轻链。

应用团体量表筛选人群心理障碍患者的有效性研究

目的筛选心理障碍患者快捷有效的最佳工具。方法以驻桂某部入伍3个月新兵、桂林某大学在校学生以及桂林市某社区居民为受检对象,分别用症状自评量表(Symptom Checklist90,SCL-90)、康奈尔医学指数(Cornell Medical Index,CMI)、大学生人格问卷(University Personality Inventory,UPI)和WHO神经症筛选表进行检测,而后逐例做临床精神检诊,以《中国精神障碍分类与诊断标准第3版(CCMD-3)》为标准,对符合标准的心理障碍患者作出临床诊断,用效标效度检验,评价各量表的有效性。结果 WHO神经症筛选表评分效标效度的灵敏度为100%,特异度为94.26%;SCL-90的灵敏度为44.90%,特异度为85.89%;CMI的灵敏度为42.75%,特异度为84.56%;UPI的灵敏度为90.59%,特异度为43.66%。结论 WHO神经症筛选表的灵敏度、特异度均为最好,但操作费时费力,适用性受限,不是理想的团体筛选量表;SCL-90与CMI的灵敏度不理想,约一半以上的患者被漏筛,难以成为团体测验的筛选工具;UPI的灵敏度高,可筛选出绝大多数患者,量表有测伪项目,可将不真实、不认真填写而遗漏的患者进行重测补救,且测前有30min时间进行心理卫生宣传和介绍防治人员服务内容、联系方法,使存在问题的人主动应询,可避免遗漏,是值得推荐的团体量表筛选工具。

噬菌体展示技术筛选人隐孢子虫P23抗原表位

目的本研究利用噬菌体展示技术筛选人隐孢子虫P23抗原表位,为研制其抗原表位疫苗奠定基础。方法首先用人隐孢子虫重组P23抗原免疫动物以制备抗体,将该抗体与噬菌体展示随机肽库结合,通过ELISA和Western-blot方法鉴定阳性克隆,并对阳性克隆进行增殖,然后对其序列测定和抗原表位预测。结果噬菌体肽库结合抗体后,经ELISA方法可鉴定10株为阳性克隆,Western-blot检测可发现有67kD目的条带出现;序列分析结果可发现它们中具有3个不同结构表位序列,命名为ep1,ep2,ep3,且预测出具有良好的亲水性。结论所得序列是具有B细胞抗原表位。

噬菌体表面展示文库筛选人干细胞因子模拟肽

目的用噬菌体表面展示文库筛选具有人干细胞因子(hSCF)生物学活性的模拟肽。方法采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)从噬菌体环七肽库和十二肽库筛选与重组hSCF受体(rc-kit/Ig1-3)有较高亲和力的噬菌体克隆,提取噬菌体单链DNA进行序列测定,根据序列测定结果合成阳性小肽,四甲基偶氮噻唑盐(MTT)法检测合成小肽刺激UT-7细胞增殖的活性。结果经3轮筛选获得11个来源于环七肽库和8个来源于十二肽库与rc-kit/Ig1-3结合活性较高的噬菌体克隆,DNA测序结果显示环七肽库筛选到1个共有序列DPSPHTH,十二肽库没有筛选到共有序列。序列比对分析显示,这些小肽与hSCF没有同源序列。MTT法测定结果表明,合成的4个小肽均能促进UT-7细胞增殖,其中CE16和LE20刺激效果明显。结论获得4个具有较高hSCF生物学活性的模拟肽。

嵌合轻链为模板导向筛选人源性抗肝癌抗体重链Fd片段

目的:利用噬菌体抗体库和导向选择技术,以抗HAb18G嵌合抗体轻链为模板,筛选人源性抗肝癌抗体Fd片段。 方法:利用RT-PCR自肝癌患者外周血淋巴细胞中扩增全套人抗体重链Fd基因片段,克隆入含嵌合L链的展示载体 pComb3X,建立人-鼠杂合Fab噬菌体抗体库。然后,利用大肠杆菌表达的非融合HAb18GE为抗原进行亲和筛选,利用pⅢ 融合抗体的形式进行克隆鉴定,并对筛选出的杂合抗体进行初步的功能检测。结果:构建成功库容量为2×107PFU的杂合 人-鼠噬菌体抗体库,利用非融合表达的HAb18GE进行6轮筛选。ELISA及流式细胞仪检测,其中7个克隆呈特异性阳性反 应。其中克隆AP6-2和AP6-7亲和力较高,测序显示其基因序列相同,且与亲本抗体恒定区序列相同,属IgG2亚类,可变区属 VH3家族。结论:通过本实验,利用嵌合轻链为模板,进行Fd片段替换,成功筛选到人源性抗体Fd片段。

一种快速筛选人目的基因反义片段的简单有效方法

本文选取人elp3基因三个不同的区段(基因全序列、5′端非HAT区、3′端HAT区)构建了反义质粒pRS313a1644、pRS314a1107、pRS314a450,通过与人elp3基因共转化酵母后的功能互补和基因表达检测,筛选出可显著抑制人Elp3表达的5′端非HAT区1107bp有效反义片段。该片段在随后的HeLa细胞转染实验中被检测出可显著抑制Elp3的mRNA水平,表明利用该方法可避开繁琐的细胞培养和转染步骤,快速筛选到人类兴趣基因的有效反义片段。

SEREX方法筛选人胎盘抗原

目的筛选并获得来自人胎盘有潜在应用价值的抗原。方法基于血清学筛选重组cDNA表达文库(serological analysis of recombinant cDNA expression library,SEREX)技术,制备人绒毛组织免疫的兔血清,利用该免疫血清筛选人胎盘组织cDNA表达文库,通过两轮筛选得到免疫反应阳性的单克隆重组噬菌体并测序,并对所得到的序列进行生物信息学分析。结果经过两轮筛选共得到69个阳性反应克隆,序列分析发现它们代表12种不同的基因序列,其中功能已知基因9个,功能未知基因3个,进一步分析发现绒毛膜生长催乳激素基因(CSH1和CSH2)有57个阳性反应克隆,占总数的82.6%,可能是一个具有重要功能的抗原基因,所筛选到的其他基因与胚胎生长发育相关。结论SEREX技术筛选胎盘抗原是行之有效的,本实验筛选出的抗原基因对研究胚胎生长发育具有一定的意义。

用酵母单杂交系统筛选人IL-2Rα基因NIRS元件结合蛋白的cDNA

目的筛选与白细胞介素2受体(IL2R)α基因NIRS元件相互作用的结合蛋白。方法采用酵母单杂交体系从HTLV1转化的人外周血淋巴细胞MATCHMAKERcDNA文库中筛选与NIRS相互作用的蛋白。结果经过筛选并排除假阳性后有9个阳性克隆仍保持His+表型和βgal活性;测序后分析发现它们分别属于4个不同蛋白的cDNA克隆。其中一个是已知的反式作用因子Ku抗原,另一个是RNA聚合酶Ⅰ的转录终止因子。它们的C末端分别含有SAP和SANTDNA结合结构域。结论在Jurkat细胞中存在与NIRS元件相互作用的结合蛋白,相关的研究正在进行中。

在巴西一组血库5年期间常规筛选人类免疫缺陷病毒P24抗原中,检出1例单纯的窗口期献血

背景和目的 本文记叙在巴西4所血库中对献血者作HIVP24抗原检测筛选的经验,并报道首次窗口期献血的检测。材料和方法 采用商业性酶联免疫吸附实验(ELISA)试剂,在61个月期间(1996年5月至2001年6月),对总计103。

筛选人生的靶标——记中科院院士陈凯先

前言 2003年,当SARS刚刚展露恐怖的面孔不久的时候,有媒体如此报道:"4月20日晚上,中国科学院路甬祥院长找到上海药物研究所所长陈凯先,已经是夜里11点多了.路院长用了45分钟的时间向他紧急下达了任务--迅速展开研究,投入到全国性的抗击SARS的斗争.21日零点左右,药物研究所副所长沈竞康博士接到了陈凯先长达1个小时的电话.战役开始了."

筛选人睾丸特异性含溴结构域蛋白(BRDT)的小分子抑制剂

目的睾丸特异性含溴结构域的蛋白(BRDT)在睾丸中特异表达,参与精子生成的染色质重组过程。本文虚拟筛选基于结构的人BRDT小分子抑制剂。方法从PDB(Protein Data Bank)下载BRDT核心结构域与小分子抑制剂JQ1结合结构域的晶体结构(PDB ID:4FLP),利用分子模拟软件Discovery Studio 3.0,构建了其活性位点抑制剂的药效团模型。运用最佳药效团模型对10 000个化合物的数据库进行初筛,随后运用Libdock分子对接方式对初筛得到的潜在目标化合物进行复筛;最后运用BRDT Bromodomain TR-FRET Assay方法,对虚拟筛选得到的化合物进行实物筛选。结果运用虚拟筛选和蛋白水平筛选相结合的方法,从40 000个化合物中最终得到1个对BRDT有较高抑制作用的小分子抑制剂T480。结论利用一种基于结构的集合虚拟筛选与蛋白水平筛选的BRDT抑制剂的高通量筛选方法,筛选到BRDT的一个小分子抑制剂。

以鼠源重链Fd片段为模板导向筛选人源性抗γ-浆蛋白抗体轻链

以鼠源抗γ-sm抗体重链Fd片段为模板，筛选人源性抗人γ-精浆蛋白抗体轻链．方法：利用RT-PCR从前列腺癌患者外周血淋巴细胞扩增出全套的人抗体轻链基因，克隆入含鼠源性抗γ-sm抗体重链Fd片段的噬粒载体pComb3X／mFd中，电转化大肠杆菌XL1-Blue后建立人-鼠杂合的Fab抗体库。

辽宁省玉米秸秆基质栽培糙皮侧耳菌株筛选评价

为筛选出适宜辽宁地区以玉米秸秆为主要栽培基质的优良糙皮侧耳菌株,以19个糙皮侧耳菌株为试验材料,对菌丝长势、满袋时间、污染率、生物学效率及农艺性状等指标进行测定和比较分析。结果表明,C14号菌株综合指标优于其他供试菌株,其母种和栽培种在玉米秸秆基质中菌丝长势均较好,生物学效率较高,为105.8%,子实体菌盖颜色深灰色,菌柄3.1~6.8 cm,朵大韧性好,菇型紧凑,菌盖肥厚,中等大小,光泽好,可作为生产用优良菌株。C10、C2号菌株子实体性状一般,但其母种及栽培种在玉米秸秆基质中菌丝长势强、生物学效率高,利用秸秆能力强,可作为品种选育的备选材料。

基于相对联系数的区域水利高质量发展评价指标体系筛选方法

为综合判断在区域水利高质量发展目标、发展途径、发展条件相互作用下区域水资源-经济社会-生态环境复合系统不断协同优化的系统高质量发展水平状态,构建了由发展目标、发展途径和发展条件3个子系统组成的区域水利高质量发展初步评价指标体系。为定量分析初步评价指标体系的专家咨询信息,根据专家指标排序合理性模糊关系的取值区间特点提出了相对联系数,用相对联系数的平均集对势估计各专家指标排序合理性的权重,进而可得各指标重要性的专家综合排序值,据此筛选初步评价指标体系,构建了基于相对联系数的区域水利高质量发展评价指标体系筛选方法(SM-RCN)。SM-RCN在陕西省的应用结果表明:筛选后的指标体系汇聚了各专家对区域水利高质量发展主要影响指标的综合评判;SM-RCN可克服评价指标体系构建过程缺乏定量分析依据的不足,可识别不同专家、同一专家对不同评价方面的指标排序合理性的程度。该筛选方法在区域水利现代化、水资源空间均衡、水资源承载力等评价指标体系构建过程中具有应用前景。

东北酸菜发酵乳酸菌的筛选及评价

为获得适用东北酸菜发酵的乳酸菌菌株,该研究通过对来源于发酵蔬菜10株乳酸菌的生长性能和发酵特性进行评价,发现植物乳植杆菌YJ132和肠膜明串珠菌肠膜亚种UA107显示出显著的发酵潜力:培养16 h后,发酵液OD600值分别升高至1.707和1.672,而pH值分别降低至3.93和3.88,培养24 h后,可滴定酸度(TA)含量为65.62 g/L和63.21 g/L,对亚硝酸盐的降解率达到96.41%和95.78%,在5%NaCl溶液中培养24 h后OD600值仍达到1.51以上,综合评价菌株YJ132和UA107可作为发酵菌种用于东北酸菜发酵。利用YJ132和UA107制备酸菜,发酵末期酸菜样品中TA含量为35.96 g/L,还原糖和可溶性蛋白含量降低至6.51 mg/g和111.27μg/g,并在发酵初期显著降低亚硝酸盐的含量,与对照组相比差异极显著(P<0.01)。接种乳酸菌可抑制有害菌肠杆菌的增殖(P<0.01),增加酸菜中微生物群落的多样性,同时乳杆菌在发酵中后期始终是优势菌群,由此推断YJ132和UA107是通过调控微生物群落来提升东北酸菜的品质。综上所述,YJ132和UA107是适用于东北酸菜发酵的优良乳酸菌菌种。