基因库的制备及用单克隆抗体筛选基因

本文介绍用单克隆抗体从基因库中筛选基因的方法及基因库的制备方法。作者用该方法制成了人畸胎癌细胞基因库,并用抗人微管蛋白(Tubulin)及人角蛋白(Keratin)的单克隆抗体从中筛选出了相应基因。

基于机器学习的胃癌关键基因筛选及预测模型构建

目的:为了验证与胃癌相关的遗传特征,提出一种混合式特征选择方法确定靶基因,进一步分析其意义并建立新的诊断预测模型。方法:对原始胃癌数据进行生物信息学方差分析,使用随机森林、支持向量机的递归特征消除、套索算法等机器学习方法筛选胃癌相关基因,对结果取交集,获得关键基因集。进行富集分析,确定关键基因并验证;依据关键基因构建基于多层感知器(MLP)、逻辑回归、决策树等8种机器学习分类算法的诊断预测模型。结果:混合式的特征选择方法筛选出的关键基因与肿瘤发生和发展的生物学过程密切相关;8个关键基因(TXNDC5、BMP8A、ONECUT2、COL10A1、JCHAIN、INHBA、LCTL和TRIM59)被确定为诊断效果较好的胃癌潜在标志物;根据8种分类模型的ROC曲线和准确率结果可知,MLP为最佳胃癌预测模型,其准确率高达97.77%,比他人构建的Xgboost胃癌预测模型准确率高出3.83%。结论:本研究获得了诊断和预防胃癌的8个关键基因,并建立了最佳预后模型。

基于Fosmid文库筛选山羊瘤胃微生物源蛋白酶基因及其表达验证

【目的】利用Fosmid文库功能筛选法,获得山羊瘤胃微生物源蛋白酶基因并进行原核表达。【方法】利用功能底物筛选法从山羊瘤胃微生物源Fosmid文库中筛选具有蛋白酶活性的克隆子,对其进行Illumina二代测序,对预测到的基因进行功能注释,根据基因丰度结果确定后续研究的功能基因。利用大肠杆菌BL21(DE3)对功能基因进行诱导表达,对表达产物进行酶活性测定。通过CRISPR/Cas9基因编辑技术,将密码子优化后的功能基因分别敲入枯草芽孢杆菌C6基因组ctc位点并进行表达验证。【结果】从Fosmid文库1700个克隆子中筛选到1个具有蛋白酶活性的阳性克隆Pro4-C5。通过二代测序技术,鉴定出3个潜在的蛋白酶基因gene0833(内肽酶,EC编号:EC3.4.21.53)、gene0196(金属内肽酶,EC编号:EC3.4.24)和gene0585(羧肽酶,EC编号:EC3.4.17.14)以及1个L-天冬酰胺酶基因(gene0683,EC编号:EC3.5.1.1)。以pET-28a(+)为表达载体,通过大肠杆菌BL21(DE3)原核诱导表达发现,gene0585和gene0196未表达;gene0833表达的蛋白分子质量为87 ku,蛋白酶活性为10.45 U/mL;gene0683表达的蛋白分子质量为37 ku,L-天冬酰胺酶活性为88.52 U/mL,同时发现该蛋白也具有蛋白酶活性,酶活性为5.25 U/mL。将密码子优化后的gene0683和gene0833定点敲入枯草芽孢杆菌C6基因组中表达发现,gene0833未表达,gene0683表达的蛋白酶活性为109.72 U/mL,相比原始菌株(100.97 U/mL)显著提高了8.67%(P<0.01);L-天冬酰胺酶活性为31.63 U/mL,相比原始菌株(22.79 U/mL)显著提高了30.06%(P<0.01)。【结论】从山羊瘤胃微生物源Fosmid文库中筛选和鉴定出了2个具有蛋白酶活性的功能基因(gene0833和gene0683),均来源于微小杆菌属(Exiguobacterium),其中gene0683在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中的表达产物具有较高的蛋白酶和L-天冬酰胺酶酶活性。

文库构建与基因簇靶向筛选驱动的微生物天然产物高效发现

微生物天然产物作为小分子药物的主要来源,已被广泛应用于医药与农业等领域。随着全球抗生素耐药性与其他公共健康问题的加剧,新结构、新靶点微生物天然产物发现迫在眉睫。大规模(宏)基因组测序揭示微生物蕴含了巨大的生物合成潜力,相继催生了多种不同类型的天然产物挖掘策略。然而,目前仍然缺乏将天然产物合成基因簇与编码产物快速关联的高效方案。近年来,(宏)基因组文库构建在获取批量天然产物合成基因簇方面展现出明显优势,结合高效的基因簇靶向筛选方法,显著加速了新结构天然产物系统发现。本文综述了三类基于(宏)基因组文库构建与靶向筛选驱动天然产物创新发现的策略,主要从克隆载体类型、文库构建方式、基因簇靶向筛选方法等角度进行了阐述,并对Cosmid/Fosmid文库、BAC/PAC文库、FAC/YAC文库等不同文库类型的优缺点及应用范围进行了对比,最后对这些策略的发展前景进行了展望。未来,基于文库构建与基因簇靶向筛选策略将极大驱动不同生境微生物来源的活性天然产物挖掘,预期大量新靶点、新结构天然产物将不断涌现。

冠心病进展相关基因筛选及冠心Ⅱ号方干预靶点的预测

目的:探索冠心病疾病进展相关基因,并预测冠心Ⅱ号方防治冠心病的作用靶点。方法:从基因表达综合数据库(GEO)下载急性心肌梗死(AMI)与稳定型冠心病(SCAD)病人转录组表达谱,通过差异表达分析和加权基因共表达网络分析(WGCNA),筛选冠心病疾病进展相关基因,并针对冠心病进展相关基因进行基因本体(GO)功能分析与京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。从中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)数据库下载冠心Ⅱ号方的有效成分及药效靶点,与冠心病疾病进展相关基因进行交集分析,获得冠心Ⅱ号方防治冠心病的潜在靶点。结果:通过差异表达分析比较AMI和SCAD转录组表达谱,共获得166个差异表达基因(DEGs)。通过WGCNA获得与AMI相关的基因模块Black。取DEGs与Black模块的交集,获得64个冠心病疾病进展相关基因。从TCMSP数据库共获得224个冠心Ⅱ号方的药效靶点,将药效靶点与冠心病疾病进展相关基因取交集,得到冠心Ⅱ号方防治冠心病的潜在作用靶点,即过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARG)、单核细胞分化抗原CD14(CD14)和细胞色素P4501b1(CYP1B1)。结论:细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)、嗜酸性粒细胞阳离子相关蛋白(ECRP)、肿瘤坏死因子受体超家族成员10D(TNFRSF10D)、S100钙结蛋白A9(S100A9)等64个基因可能与冠心病疾病进展相关,其中,PPARG、CD14、CYP1B1是冠心Ⅱ号方防治冠心病的潜在作用靶点。

糖尿病肾病核心基因的筛选与鉴定

目的基于生物信息学筛选糖尿病肾病(DKD)核心基因,探究DKD的治疗靶点,讨论其可能的调控机制。方法提取GEO数据库(GSE30528,GSE47183)DKD患者肾小球转录组表达数据矩阵,采用生物信息学方法对差异表达基因(DEGs)进行筛选,鉴定出核心差异基因,对核心差异基因进行基因表达与富集分析(GSEA),预测有效靶点。结果通过对DKD mRNA表达矩阵的筛选和鉴定,共筛选出5个核心基因,其中C1orf21、NPHS1表达显著下调,CD48、COL1A2、TGFBI表达上调,研究得知,NPHS1、CD48与免疫差异、细胞间交流及细胞表面相互作用等有显著相关性。通过受试者工作特征曲线(ROC)分析、GSEA分析及药物靶点与miRNA预测显示,这些差异基因可能对DKD的治疗具有重要意义。结论该研究筛选的核心基因与DKD具有显著相关性,有可能作为糖尿病治疗有效标志物,为DKD的治疗与鉴定提供理论依据。

塔里木河淤泥小单孢菌抗生素合成基因筛选及抑菌活性初探

本研究以分离自塔里木河淤泥的31株小单孢菌(分属于14个种)为研究对象,检测菌株所具有的大环内酯类抗生素、安莎类抗生素合成过程中的关键酶基因;选用4种培养基进行小单孢菌小量发酵,经80%甲醇萃取,浓缩发酵液;以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌以及解淀粉欧文氏菌为靶标菌,采用滤纸片法进行抑菌活性检测;对具有抑菌活性的菌株发酵产物做高效液相色谱(HPLC)检测分析。结果表明31株小单孢菌中24株含有PKS-I基因,15株含有AHBA基因;对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌以及解淀粉欧文氏菌有拮抗活性的分别有3株、3株、6株以及14株菌;13株菌同时具有抗生素合成关键酶基因和抑菌活性。青铜小单孢菌(TRM99160)、土壤小单孢菌(TRM99303)、绛红产色小单孢菌(TRM99166)和碳样小单孢菌(TRM99551)菌株的发酵产物具有广谱抑菌活性,可用于深入挖掘次级代谢产物。综上,塔里木河淤泥小单孢菌具有拮抗多种病原菌活性及抗生素生物合成潜力,值得深入挖掘次级代谢产物。

饲养方式对滩羊肌内脂肪沉积影响及相关基因表达差异研究

本试验基于转录组学技术探讨舍饲与放牧条件下,滩羊脂肪沉积的差异及相关表达基因的筛选及分析。试验采用随机区组的试验设计方法,将体况相近的12只4月龄滩羊羯羊随机分为2组,每组6只,分别采用放牧和舍饲的饲养模式。于6月龄屠宰取背最长肌与股二头肌。试验结果表明:舍饲滩羊背最长肌肌内脂肪(IMF)含量显著高于放牧组(P <0.05),放牧组滩羊背最长肌IMF含量为(1.4567±0.0987)%,舍饲组滩羊背最长肌IMF含量为(2.0700±0.1493)%。股二头肌IMF含量舍饲组较放牧组高,但差异不显著。与舍饲组滩羊相比,放牧组滩羊背最长肌与股二头肌饱和脂肪酸含量均低,其中背最长肌己酸(C6:0)、癸酸(C10:0)、肉豆蔻酸(C14:0)、十五烷酸(C15:0)、棕榈油酸(C16:1)、十七烷酸(C17:0)、十七碳烯酸(C17:1)、硬脂酸(C18:0)含量显著低于舍饲组(P <0.05),股二头肌十五烷酸(C15:0)、棕榈油酸(C16:1)、十七烷酸(C17:0)显著低于舍饲组(P <0.05),碳原子数≥18的长链脂肪酸和不饱和脂肪酸含量以放牧组滩羊较高,其中背最长肌二十一烷酸(C21:0)和股二头肌十七碳烯酸(C17:1)含量显著低于舍饲组(P <0.05)。基于转录组学分析得知,与舍饲组相比,放牧组滩羊背最长肌脂肪代谢基因表达量显著下调的有酰基辅酶A硫酯酶7(ACOT7)、脂肪细胞分化转录因子(ADIG)与酰基辅酶A氧化酶2(ACOX2)(P <0.05),显著上调的有溶质载体家族7成员8(SLC7A8)、游离脂肪酸受体4(FFAR4)与胰岛素样生长因子2(IGF2)(P <0.05)。放牧组滩羊股二头肌脂肪代谢基因表达显著下调的有ACOT7、ADIG、脂肪酸结合蛋白4(FABP4)与脂肪酶A(LIPA)(P<0.05),显著上调的有花生四烯酸15-脂加氧酶(ALOX15)与二酰基甘油O-酰基转移酶2(DGAT2)(P <0.05)。

蔷薇属植物响应蔷薇盘二孢侵染内参基因的筛选及茉莉酸相关基因表达分析

【目的】为研究蔷薇属植物响应黑斑病侵染的稳定表达的最适内参基因,解析茉莉酸在蔷薇属植物响应蔷薇盘二孢侵染过程中的作用。【方法】以黑斑病病原菌蔷薇盘二孢侵染的6个蔷薇属种/品种不同时间的离体叶片为材料,利用qRT-PCR技术及geNorm、NormFinder、BestKeeper软件对9个候选内参基因(ACT、GAPDH、PP2A、Rcl2、SAND、TIP、TUA、TUB、UBC)的表达量进行测定和分析,利用筛选出的内参基因,对蔷薇属植物茉莉酸(JA)抗病途径相关基因(COI1、OPR3、MYC2、JAR1)的表达水平进行定量分析。【结果】(1)UBC可作为6种蔷薇属植物共同适用的内参基因,可用于后续分析JA抗病途径相关基因的表达水平。(2)内源JA含量在6种蔷薇属植物响应蔷薇盘二孢侵染的过程中存在差异。在黑斑病高抗植物受侵染0~4 d间JA含量下调,4~8 d间上调。在黑斑病易感植物受侵染0~8 d间,内源JA含量呈下调趋势。(3)JA合成相关基因OPR3及JAR1表达量在受侵染初期表达量趋势存在差异。在除荷花蔷薇外的其余5种植物中,OPR3在侵染初期(0~0.5 d)表达下调,JAR1在侵染初期表达上调。OPR3和JAR1在侵染后期均表达上调,黑斑病易感材料的上调程度高于高抗材料。(4)JA信号传导相关基因COI1及MYC2在受侵染初期表达量趋势同样存在差异。COI1在黑斑病高抗材料受侵染初期上调表达,在黑斑病易感材料下调表达,MYC2在6种植物受侵染0~2 d中均下调表达。COI1及MYC2表达量在受侵染2 d后均上调表达,且在黑斑病易感植物中的上调程度大于黑斑病高抗材料。【结论】与JA信号传导相关的MYC2、COI1在蔷薇属植物抵御黑斑病病菌入侵过程中发挥负调控作用,且由JA通路介导的抵御死体营养型病原菌的侵染在后期发挥了作用。

梨小食心虫实时荧光定量PCR内参基因的筛选

【目的】本研究旨在探明梨小食心虫Grapholita molesta在不同发育阶段、成虫不同组织以及不同浓度的3种杀虫剂处理后成虫中稳定表达的内参基因,为后续对梨小食心虫目的基因表达的研究奠定基础。【方法】基于梨小食心虫转录组数据筛选10个候选内参基因(β-actin,18S rRNA,β-tubulin,EF-1α,RPL13,RPL32,RSPL40,UBC7,α-tubulin和RPS20);通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定候选内参基因在梨小食心虫不同发育阶段(卵、1-5龄幼虫、蛹和成虫)、成虫不同组织(头、前肠、中肠、后肠、脂肪体、马氏管、精巢和卵巢)以及不同浓度的3种杀虫剂(阿维菌素:19.819,72.897和179.663μg/mL;吡虫啉:17.638,163.323和762.986μg/mL以及高效氯氟氰菊酯:33.791,96.123和198.282μg/mL)通过玻璃管药膜法处理后成虫中的表达量;利用geNorm,NormFinder,ΔCt,BestKeeper和RefFinder对10个候选内参基因的表达稳定性进行评价。选择梨小食心虫细胞色素P450基因CYP354A 32进行验证。【结果】结合qRT-PCR结果和软件评价结果表明,梨小食心虫不同发育阶段内参基因表达稳定性从高到低依次为β-tubulin,18S rRNA,EF-1α,RPL13,β-actin,RPS20,UBC7,RPL32,α-tubulin和RSPL40;成虫不同组织内参基因表达稳定性从高到低依次为UBC7,β-tubulin,β-actin,18S rRNA,RSPL40,EF-1α,RPS20,RPL13,RPL32和α-tubulin;不同浓度阿维菌素、吡虫啉和高效氯氟氰菊酯处理后成虫中内参基因表达稳定性从高到低依次为RPS20,RPL13,β-tubulin,β-actin,RPL32,RSPL40,EF-1α,UBC7,α-tubulin和18S rRNA。用所获得的内参基因组合对CYP354 A2表达特性进行的分析结果表明,用β-tubulin,18S rRNA和EF-1α组合作为内参基因时CYP354 A2在高龄幼虫及成虫中表达量较高,用UBC7,β-tubulin和β-actin组合作为内参基因时在成虫精巢和卵巢中有较高表达,且用RPS20,RPL13和β-tubulin组合作为内参基因时不同浓度杀虫剂处理后仅有19.819μg/mL阿维菌素处理时CYP354 A2表达量高于对照,其余浓度杀虫剂处理时CYP354 A2表达量均低于对照。【结论】梨小食心虫不同发育阶段目的基因表达的研究推荐使用β-tubulin,18S rRNA和EF-1α组合作为内参基因;梨小食心虫成虫不同组织目的基因表达的研究推荐使用UBC7,β-tubulin和β-actin组合作为内参基因;不同浓度阿维菌素、吡虫啉和高效氯氟氰菊酯处理梨小食心虫成虫后目的基因表达的研究推荐使用RPS20,RPL13和β-tubulin组合作为内参基因。

草鱼脂肪组织及脂肪细胞qRT-PCR内参基因的筛选

为探究4个内参基因在草鱼脂肪组织和脂肪细胞中的稳定表达情况及筛选稳定性最佳的内参基因,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测了在水温26.5~27.5℃下,摄食脂肪含量为4%、8%和12%的饲料4周、体质量为(15.0±0.5)g的草鱼腹腔脂肪组织中及在成脂培养基中诱导分化至第6天时,用含0、40、80、120 mmol/L的油酸处理的草鱼脂肪细胞中的18S rRNA基因、β-actin基因、GAPDH基因和EF1α基因等4个候选内参基因的转录水平,随后采用GeNorm、NormFinder和Bestkeeper软件分析其表达稳定性,以筛选出特定条件下草鱼脂肪组织及脂肪细胞中稳定表达的内参基因或其组合。结果显示,候选内参基因的定量PCR引物均可获得特异性扩增产物和理想的扩增效率。在草鱼脂肪组织和脂肪细胞中,候选内参基因表达稳定性顺序分别为18S rRNA>β-actin>GAPDH>EF1α和18S rRNA=β-actin>GAPDH>EF1α。GeNorm标准化因子配对差异分析显示,其配对变异值均小于0.15,即草鱼脂肪组织及脂肪细胞中最适内参基因数至少有2个。结果表明,在草鱼脂肪组织和脂肪细胞中稳定表达的是18S rRNA基因,建议选择18S rRNA、β-actin基因作为草鱼脂肪组织及脂肪细胞内参基因组合。

多浪羊超数排卵卵巢中可变剪接基因的筛选

为了鉴定和筛选多浪羊在超数排卵处理下卵巢中的可变剪接(AS)事件和基因,本研究采用Illumina HiSeq2500测序平台对超数排卵组(DC)和同期发情组(DT)多浪羊卵巢组织分别进行转录组测序(RNASeq),使用HISAT2软件对2组的基因表达量进行统计,使用rMATS软件对样本中的AS事件和差异剪接基因(DSGs)进行鉴定,对差异表达基因(DEGs)和DSGs进行GO功能和KEGG通路分析。结果表明:18个样本共获得37150524个原始Reads,与绵羊参考基因组(Ovisariesv2.0)的比对率达83.07%。发现有32087个基因参与表达(FPKM≥0.1),其中高表达(FPKM≥100)基因约占12.5%。DC vs DT共鉴定出116392个AS事件,其中外显子跳跃(SE)占76.7%,涉及46280个AS基因,每个基因平均发生2.5个AS事件;DCvsDT所得的5409个DEGs和7161个DSGs的交集基因有267个,其中DCBvsDTB中有242个(占90.6%)。交集基因被显著富集到的GO条目有ATP依赖的微管运动活性等,KEGG通路有PI3K-AKT等信号通路,说明DC和DT在这些通路间存在较大差异。

玉米大斑病菌转录因子基因StbZIP9的克隆、表达分析及其下游靶基因的筛选

碱性亮氨酸拉链(bZIP)转录因子蛋白是一类在动植物及微生物中结构和功能均具有保守性的转录调控因子,为明确bZIP类转录因子在植物病原真菌中的功能及作用机制,进一步确定其与病菌生长发育及致病性的关系,以玉米大斑病菌01-23为材料克隆得到了StbZIP9基因(GenBank No.XM_008032179.1),StbZIP9是bZIP转录因子家族成员之一,对该基因结构及蛋白质特征分析结果显示,该基因全长788 bp,开放阅读框为726 bp,编码241个氨基酸,其编码蛋白包含一个在真菌中高度保守的同源结构域BRLZ;对该基因在病菌生长发育及侵染宿主过程的RNA-seq数据进行分析,发现与菌丝时期相比StbZIP9在附着胞和芽管时期表达量升高2~4倍,在侵染玉米叶片24,72 h后基因表达从无到有且持续升高,表明StbZIP9与附着胞发育和芽管形成相关联并在病菌侵染宿主细胞过程中发挥重要作用;进一步利用生物信息学技术预测其结合保守基序及调控的靶基因,结合基序为NNTWACGTNN,包含bZIP类转录因子识别核心序列ACGT,并根据该序列预测StbZIP9下游靶基因,结合RNA-seq数据进行表达模式分析得到4个下游靶基因(JGI数据库中蛋白ID分别为:132893、163024、162798、40466),功能注释表明,其参与细胞壁组分聚合和运输、侵染宿主、孢子休眠等多种生物过程。为进一步阐明其在参与调控病菌侵染寄主的分子机制提供依据。

用Sleeping Beauty转座子筛选肺癌相关基因及功能研究

目的探讨睡美人(SB)转座子筛选肺癌相关基因的应用。方法采用Sleeping Beauty转座子插入T2/Onc盒子(T2/Onc cassette)诱变人支气管上皮细胞(HBEC)的模型,挑选阳性克隆,高通量测序筛选共同插入位点(CIS)及候选基因。在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系NCI⁃H1299中验证筛选出的COL11A1基因功能,采用CCK⁃8细胞增殖实验等检测NCI⁃H1299细胞系敲低COL11A1前后的增殖能力及其对顺铂的敏感性变化,采用Transwell细胞迁移、侵袭实验比较其迁移、侵袭能力变化。结果使用转座子筛选中通用的蒙特卡洛模拟法确定CIS,以P<0.05为界,共找到252个CIS,包括675个候选基因。结果显示,筛选出的COL11A1基因可以促进NCI⁃H1299细胞系增殖(P<0.01)、迁移(P<0.001)、侵袭(P<0.001)并介导其顺铂耐药(P<0.001)。结论本研究证明了使用SB转座子插入T2/Onc诱变HBEC的模型能够很好地筛选出肺癌相关基因,并证实了COL11A1可以促进NSCLC细胞增殖、迁移、侵袭并介导顺铂耐药及上皮间质转换。

泛基因组——理解生物遗传多样性的新视域

泛基因组是指特定物种或类群全部进化枝的所有基因组信息的总和。泛基因组研究通过序列比较和分析,构建非冗余集合体,以识别核心基因组和可变基因组,从而了解物种或种群中基因的丰富性、基因家族的扩张与收缩、水平基因转移等现象,为探究和理解物种内的遗传多样性和基因组进化提供了新的视角和工具。本文对泛基因组的概念、研究策略及其应用进展进行了综述,以期为中学一线教师进行基因工程相关内容教学提供前沿拓展素材。

基于生物信息学分析肝癌Hub基因与差异基因的筛选与鉴定以及相关基因的突变序列

旨在基于生物信息学分析肝癌Hub基因与差异基因的筛选与鉴定,并进行相关基因的突变序列分析。方法:我们首先获取了与肝癌相关的基因表达数据和临床数据,并对其进行了质控和预处理。接着,利用网络分析方法构建肝癌基因网络,并识别了网络中的Hub基因,这些基因在网络中具有重要的连接和调控作用。通过统计学方法和假设检验校正方法确定了差异显著的基因。结果:本研究成功筛选出了肝癌中的Hub基因和差异基因,并对其进行了功能注释和通路分析。通过综合分析差异基因、Hub基因和突变事件的结果,我们发现了与肝癌发生发展密切相关的关键基因和通路。结论:本研究通过生物信息学分析揭示了肝癌的关键基因和突变事件。这些发现为深入理解肝癌的发病机制和发展过程提供了重要线索。

转基因植物中筛选标记基因的利用及消除

在基因转移过程中,人们常常使用标记基因来筛选转化细胞或组织。常用的筛选标记基因尤其是抗生素抗性基因的使用往往对环境及植物体的生长发育产生不良影响,且影响基因多重转化。为了消除这些弊端,一种全新的发展策略即获取无选择标记的转基因植物应运而生。本文主要综述转基因植物中有关筛选标记基因及其消除方法。

鲤鱼和草鱼基因文库的构建及其生长激素基因和肌动蛋白基因的筛选

用显微注射方法,把由小鼠重金属鳌合蛋白(M’r)基因启动子驱动的人生长激素(hGH)基因导人鲤鱼等的受精卵内,由此发育而成的一部分鱼的基因组内携带有MThGH基因,这些鱼称之为"转基因鱼"

以木糖异构酶基因为筛选标记的玉米遗传转化

利用木糖异构酶基因作为筛选标记可以在含有不同浓度木糖的培养基上筛选出玉米再生植株,其中50%～100%木糖浓度的总体筛选效果较好,但不同玉米基因型之间筛选的最佳浓度差异很大。通过DNA点杂交、PCR及PCR-Southern印记法检测表明,木糖异构酶基因已经整合到转基因植株中。以木糖作为筛选剂,可以减小潜在的生物安全隐患。

基因表达谱芯片在胰腺癌相关基因筛选中的应用研究

目的 :探讨基因表达谱芯片技术在高通量筛查肿瘤相关基因群及研究胰腺癌分子病理学变化中的应用价值。方法 :应用含有 40 96条人类全长基因的 c DNA表达谱芯片 ,对 3例临床切除的胰腺癌及正常胰腺标本的基因表达谱进行分析。 结果 :在 3例胰腺癌和正常胰腺组织中均有差异表达的基因 398条 ,其中新基因 2 89条 ,老基因 10 9条。从老基因中筛选出有显著表达差异基因 37条 ,其中在胰腺癌组织中上调基因 2 0条 ,下调基因 17条。 结论 :运用本基因表达谱芯片对基因表达谱进行分析 ,能够有效筛查出新的胰腺癌相关基因。