产叶酸菌株的筛选及产量的优化

本研究分别从母乳、婴儿粪便、乳制品和酸肉中筛选叶酸生产菌株,并通过培养基优化、代谢途径研究等方法提高叶酸的产量。结果表明,在39株产叶酸菌株中得到4株高产菌株,分别为鼠李糖乳杆菌B2-14(39.56 ng/mL)、双歧杆菌D020(32.56 ng/mL)、罗伊氏乳杆菌B1-28(60.72 ng/mL)、格式乳杆菌F020(61.22 ng/mL)。通过优化培养基条件,叶酸产量可提高50%~70%。在经过条件优化的牛乳培养基中培养,叶酸产量可提高6~10倍。其中,菌株B1-28在牛乳培养基培养后产量达910 ng/mL。分析产叶酸路径的一些指标及相关代谢基因,探究叶酸合成途径指标的变化及其机理,从而研制出有利于人群叶酸摄入的乳制品。

两株鱼源降脂乳酸菌的分离、体外筛选及分子鉴定

脂肪肝病是我国人工养殖鱼类中常见的营养性疾病,对水产养殖业造成很大的负面影响。为了筛选具有降脂作用的潜在乳酸菌,利用MRS琼脂培养基,从健康褐篮子鱼(Siganus fuscescens)和卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)肠道中分离得到52株乳酸菌。测定这些菌株的溶血性后得到35株不溶血乳酸菌菌株。经降脂活性复筛(测定菌株体外降胆固醇能力、体外降三酰甘油能力)后从中筛选得到2株具有降脂能力的潜在益生菌,随后测定了这2株菌株对人工模拟胃液、人工模拟肠液的耐受性、菌株的黏附能力(菌株表面疏水活性和自凝集能力)、胞外酶活性及颉颃病原菌活性,最终获得2株具有较强体外降脂能力的潜在益生菌(LZ8和F2),其中,菌株LZ8分离于褐篮子鱼肠道、F2分离于卵形鲳鲹肠道。经16S rRNA鉴定分别为乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)和粪肠球菌(Enterococcus faecalis)。

耐盐碱性蛋白酶菌株LK-3的筛选及酶学性质

为了寻找产碱性蛋白酶活性高且稳定性良好的野生菌株,作者从上海临港区域的东海海水中筛选出一株高产稳定且耐盐的产碱性蛋白酶菌株。对该菌株的形态学特性、生理特性以及16S rDNA基因序列进行测序和分析,确定该菌株为同温层芽孢杆菌(Bacillus stratosphericus),并命名为B. stratosphericus LK-3。酶学性质研究结果显示,该酶的最适作用条件为温度35℃、p H 8.5、最适接种体积分数7%,该酶在上述条件下发酵72 h的酶活力为(581.74±0.81) U/mL。此外该酶具有较好的耐盐性,即使在40 g/dL的高饱和盐质量浓度下仍然保持22.03%的相对原始酶活力。蛋白酶的耐盐性是一个有价值的特性,可将其纯化后作为洗涤剂的生物添加剂应用于工业生产。

蒙古黄芪内生细菌产IAA菌株筛选与培养条件优化

【目的】探寻蒙古黄芪内生菌的促生功能,挖掘优异微生物资源。【方法】采用前期从蒙古黄芪品系甘芪1号根中分离纯化的20株内生细菌菌株(B1~B20,GenBank序列收录号OM938262~OM938281)为研究对象,以纯培养液为对照(CK),利用Salkowski显色法对产吲哚乙酸(IAA)功能菌株鉴定,然后对优异菌株的培养条件进一步进行优化研究。【结果】甘芪1号根可培养内生细菌菌株,有12株菌株较CK有明显Salkowski显色反应,测量各菌株产IAA浓度依次为B16>B18>B10>B20>B8>B13>B11>B3>B4>B6>B1>B17,产IAA浓度范围为2.74~26.48 mg/L,平均10.10 mg/L,其中B16高稳产IAA(GenBank OM938262),平均产IAA浓度高达26.48 mg/L,极显著高于其他菌株产IAA的水平。培养条件优化显示,B16菌株培养最适温度为15~25℃,在浓度为0.1%~7%的NaCl培养基均能正常生长,最适NaCl浓度为1%,最适pH为7.0,最适碳、氮源分别为酵母提取物和蛋白胨。培养条件优化后B16增殖及IAA产能较优化前分别极显著提高28.6%和53.5%。【结论】蒙古黄芪根内生细菌中产IAA菌株比例较高,是优异豆科药用植物微生物资源宝库,且筛选到一株高稳产IAA菌株B16,经过培养条件优化可达到40.658 mg/L,是有较大的生态调控利用潜力的菌株。

红芝LYL263混合培养高产漆酶菌株的筛选

以产漆酶的红芝LYL263菌株为试材,采用不同微生物混合培养的方法,研究了红芝LYL263与苏平平菇、白金金针菇、凤尾菇混合培养的产酶效果和产酶条件,以期能筛选出提高红芝LYL263产漆酶的相容菌株以及与之相适应的产酶条件。结果表明:红芝LYL263与其相容菌株-苏平平菇混合培养后漆酶活性达到1346.4 U·mL^(-1),比红芝LYL263单独培养产酶提高35.7%;红芝LYL263与苏平平菇的接种比例为4:2时,其产酶量最高,最优接种时间是同时接入红芝LYL263和苏平平菇。

西藏牦牛瘤胃源产纤维素酶菌株筛选鉴定及产酶条件探究

为提高纤维素的利用率,寻找到安全性能好、产酶效率高的菌株添加剂添加到饲料中,以提升动物对饲料的利用率,从牦牛瘤胃中分离高产纤维素酶菌株,进行16S rDNA的鉴定,并探究其在不同温度、pH、接种量和发酵阶段产内切型-β-葡聚糖酶、外切型-β-葡聚糖酶、β-葡萄糖苷酶的特性。结果表明:通过形态学鉴定以及16S rDNA基因序列测定,最终确定高产菌株M1为克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)。M1产内切型-β-葡聚糖酶活性大于外切型-β-葡聚糖酶、β-葡萄糖苷酶;M1在35℃、pH为7、接种量为2%的条件下产内切型-β-葡聚糖酶的效率最高,在30℃、pH为6、接种量为2%的条件下产外切型-β-葡聚糖酶的效率最高,在30℃、pH为6、接种量为1%条件下产β-葡萄糖苷酶的效率最高;在M1生长过程中,先产生了β-葡萄糖苷酶,其次是外切型-β-葡聚糖酶、内切型-β-葡聚糖酶,并且外切酶活性远远大于内切酶和β-葡萄糖苷酶活性。

一种适宜秸秆栽培的金针菇菌株筛选方法

以一株野生黄金针菇菌株为试验材料,研究了在试管内进行适宜秸秆栽培的金针菇菌株的筛选方法,对栽培的黄金针菇进行组织分离和孢子分离,并对分离后的菌株进行了栽培试验。结果表明:在密闭试管内以秸秆为栽培基质栽培黄金针菇可以顺利出菇,继而进行的组织分离与孢子分离,操作方便,成功率高,可用于适宜秸秆栽培的菌株初步筛选。

一种适宜秸秆栽培的金针菇菌株筛选方法

以一株野生黄金针菇菌株为试验材料,研究了在试管内进行适宜秸秆栽培的金针菇菌株的筛选方法,对栽培的黄金针菇进行组织分离和孢子分离,并对分离后的菌株进行了栽培试验。结果表明:在密闭试管内以秸秆为栽培基质栽培黄金针菇可以顺利出菇,继而进行的组织分离与孢子分离操作方便、成功率高,可用于适宜秸秆栽培的菌株初步筛选。

木糖发酵产2,3-丁二醇菌株的筛选鉴定及其发酵条件优化

该研究以木糖为唯一碳源,通过富集培养、初筛和复筛、纯化,从蜗牛样品中筛选产2,3-丁二醇菌株,通过形态学观察和分子生物学技术对其进行鉴定。采用气相色谱(GC)法、气相色谱-质谱联用(GC-MS)法分析筛选菌株利用木糖发酵产物成分,利用木糖、葡萄糖与木糖混合糖发酵筛选高产2,3-丁二醇菌株,并对其发酵条件进行优化。结果表明,筛选出5株能利用木糖产2,3-丁二醇菌株(编号为SN1~SN5),经鉴定这5株菌均为变栖克雷伯菌属(Klebsiella variicola)。GC和GC-MS分析结果显示,2,3-丁二醇为筛选菌株利用木糖发酵的主要产物,其中菌株SN5发酵产2,3-丁二醇能力最强,在有氧条件下,2,3-丁二醇产量为(14.26±0.18)g/L。在葡萄糖与木糖2∶1的混合糖发酵条件下,发酵48 h产2,3-丁二醇(21.83±0.66)g/L。菌株SN5最佳发酵条件为蛋白胨添加量为5 g/L,发酵温度37℃,发酵时间48 h,初始pH值为6.0,初始木糖含量为80 g/L。在此优化条件下,2,3-丁二醇产量为(26.58±0.26)g/L,较优化前提高了89%,其转化率可达(0.53±0.01)g/g。

达州市夏栽秀珍菇的优质菌株筛选

为筛选适合达州夏季栽培的优良秀珍菇菌株,共收集了12个来源不同的秀珍菇品种,通过拮抗试验、菌丝生长试验、出菇试验,对12个秀珍菇的菌丝生长速度、子实体农艺性状、产量、生物学效率等指标进行综合比较,根据拮抗试验结果选取不同分类菌株进行ITS-PCR鉴定。结果表明,拮抗试验可以将12个菌株分为3类,从3类菌株中各选取1株菌株进行ITS测序,结果显示3个菌株间的碱基差异不大,均为秀珍菇。出菇试验结果显示,京秀1号产量最高,头三潮菇产量达278.5 g/袋,生物学效率为62.2%,综合表现优良,适合在达州推广栽培。

适宜福州地区栽培的草菇菌株筛选

为筛选出适宜福州地区栽培的草菇品种,对6个草菇菌株从蛋形期和成熟期农艺性状、产量、商品性等方面进行综合比较。结果表明,菌株V1172、V1295、V1296在农艺性状、产量、商品性状等方面综合表现较好,可作为福州地区生产应用菌株。

猪肚菇设施化栽培菌株筛选

为筛选猪肚菇设施化栽培模式的优良菌株,试验以不同地区的12个猪肚菇菌株为材料,通过拮抗试验分析了菌株间的差异,并对各菌株的菌丝生长特性、子实体农艺性状和产量进行统计分析。结果表明,2号、5号、11号这3个菌株适合在设施控温条件下栽培。3个菌株的菌丝生长正常、稳定性好,单个子实体的质量为35~45 g,大小适中,较符合市场的需求;且出菇均比对照菌株早,单袋产量也高。其中2号和11号菌株的出菇时间较一致,采收时间较短。以栽培特性为指标,所筛选的3个菌株各有优势,可作为设施化栽培的种质资源进行进一步试验。

高产阿魏酸酯酶菌株的筛选鉴定、发酵条件优化及酶学性质研究

阿魏酸酯酶(FAEs)是一类在工业领域具有广泛应用前景的酶,能够高效地催化植物细胞壁中阿魏酸酯键的水解,释放出具有抗氧化、抗炎等多种生物活性的阿魏酸。本研究通过透明圈和酶活测定对腐殖土壤进行筛选,获得8株具有显著FAE活性的菌株,其中菌株F-6表现最佳。经鉴定,菌株F-6为假单胞菌属(Pseudomonas sp. F-6)的一株菌。此外,进行了最佳产酶条件及不同条件下的酶学性质研究,结果表明,以葡萄糖为碳源、酵母提取物为氮源、pH 6.5的培养条件,并在培养3 d后添加麦麸作为产酶诱导物,显著提高43.8%的FAE活性。FAE的最适的催化温度为40 ℃、pH 7.5和底物浓度7 mM,且对多种底物具有催化特异性。本研究为FAE的工业化生产和应用提供了宝贵的微生物资源和理论依据。

中温木聚糖酶高产真菌菌株筛选及产酶条件

利用以木聚糖作为惟一碳源的基础盐培养基,在30℃培养条件下,从新乡周边土样及腐殖质中筛选到1株β-木聚糖酶高产真菌菌株(Fusarium sp.FLH28)。该菌株在20～40℃生长良好,最适生长温度30℃。产酶培养条件优化结果表明,在培养温度为30℃,培养基初始pH 6.0,以玉米芯为碳源,以蛋白胨、酵母粉和玉米浆为有机氮源,发酵4 d,木聚糖酶活性达562.6 U/mL,木聚糖酶最适pH和温度分别为6.5和40℃。

高产表面活性剂菌株的筛选与培养条件优化

为了培养高产表面活性剂的菌株,并探究合适的培养条件。从长庆油田ZJ2区某联合站取回生化池四级处理水样、单井注入水及采出水等共9处水样。依据性状的不同,一共分离出23种菌株;利用生物表面活性剂溶血特性,使用血平板培养基挑选出7种产表面活性剂的菌株;通过对培养条件的优化,并结合实验对菌株进行筛选,优选出2种高活性的菌株;从Na Cl质量浓度、含油量、pH及温度等方面对优选菌株进行适应性评价,并进行驱油模拟实验。试验表明,菌株具有较好的抗温耐盐耐碱性,生物表面活性剂有较高的界面活性,能够有效地降低界面张力,提高原油采收率。

海洋产几丁质酶菌株的筛选及发酵条件优化

通过透明圈法初筛、DNS复筛,从大连近海海域的海泥中分离出一株高产几丁质酶的菌株,经初步鉴定为扩展短杆菌(Brevibacterium linens)。采用不同碳源、氮源、温度、pH值等对培养条件进行了优化及正交试验。结果表明:该菌产酶最适条件是在28℃、pH 7.0、蛋白胨1 g/L、胶体几丁质10 g/L、NaCl20g/L条件下,几丁质酶活力可达0.508 U/mL,比优化前其产酶活力提高了9倍。

栎旋木柄天牛高毒力球孢白僵菌菌株的筛选

栎旋木柄天牛Aphrodisium sauteri是近年来在安徽黄山风景区大面积暴发的危险性林业有害生物之一,其发生危害已经严重影响了风景区自然与生态景观。本研究选择分离自不同天牛成虫的8个球孢白僵菌Beauveria bassiana菌株,依据菌落形态、菌株生长速度、产孢量、萌发率、抗旱力和产胞外蛋白酶水平等生物学性状进行初步筛选。在此基础上,筛选出生物学性状优良菌株Bb202、Bb646和Bb1898,并进一步对栎旋木柄天牛幼虫进行生物测定。基于此种筛选模式的菌株筛选方法筛选出了具有菌落生长速度快、萌发率高、产孢和抗旱能力强、胞外蛋白酶产酶水平高及毒力强的球孢白僵菌Bb202菌株。该菌株对栎旋木柄天牛的校正死亡率达92.8%,侵染率达93.3%,在浓度为1×107/mL时的半致死中时仅为5.86天,显示出对目标天牛的极强毒力,在栎旋木柄天牛的生物防治中将有重要的应用价值。

东北酸菜品质评定及发酵优良菌株筛选

东北三省不同地区采集的酸菜的感官评定及理化分析结果表明:不同纬度的东北酸菜品质存在较大差异,纬度较低即冬季温度相对较高的地区发酵制作的酸菜感官得分较高;感官得分高的酸菜其酸度和氨基酸含量较高,而其亚硝酸盐含量却相对较低。推测酸菜品质与其发酵过程中的微生态菌群之间有很大的联系,感官品质较高的酸菜有益菌含量和种类较丰富,腐败菌系较少。为了进一步研究酸菜感官与其微生态菌群之间的关系,从得分高的酸菜样品中筛选出8株乳酸菌,分别是6株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、1株鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)和1株布氏乳杆菌(Lactobacillus buchneri),这些菌株在酸菜风味形成过程中起到重要作用。

1株亚硝酸盐降解菌的筛选、鉴定、降解条件及效果

从养殖水体中筛选出1株对亚硝酸盐具有高效降解能力、增殖速度快、稳定和安全的优良菌株,经细菌学常规检测和16SrRNA序列分析确定为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium),并命名为SZ-3。对SZ-3菌株降解条件的单因素实验发现,其最佳降解条件是:pH7.0,温度33℃,降解所需的最低葡萄糖含量为0.01mg/L,在24h内对亚硝酸盐的降解率达69.58%。在亚硝酸盐质量浓度为5mg/L的100L污染水体养殖实验中,添加1000mL含量为1×108CFU/mL的SZ-3培养菌液离心后的纯菌体,在28℃的水温条件下经96h,SZ-3菌株对亚硝酸盐的降解率可达91.78%。表明该菌株对污染水体中的亚硝酸盐具有较强的降解效果。本研究旨在为研发高效实用的降解亚硝酸盐微生态活性菌奠定基础。

4种裸子植物内生真菌抗肿瘤菌株的筛选

使用组织块法 ,从罗汉松、南方红豆杉、三尖杉及银杏中分离到 112株植物内生真菌 ;为得到高活性抗肿瘤菌株 ,我们使用卤虫 (ArtemiaSailina)模型进行初筛 ,得到 39株 (LD50 >8)高活性菌株 (占总分离菌株的 34 .8% ) ,利用MTT法对具有杀卤虫活性的菌株进行复筛 ,结果显示 9株菌株 (占总分离菌株的 8.0 % ) ,对KB或HL 6 0细胞具有显著的抑制作用 (ID50 为 80～ 72 90 ) .罗汉松、南方红豆杉、三尖杉内生真菌的抗肿瘤活性菌株分别占各分离菌株的 7.4%、11.1%、8.3% ,这显示了药用裸子植物内生真菌在抗肿瘤生物活性物质的研究与应用中具有重要的价值 .