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简并寡核苷酸引物PCR技术的建立及其检测灵敏度分析
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作者 邓建强 刘宝琴 +3 位作者 蔡继峰 李文慧 龙仁 侯一平 《法医学杂志》 CAS CSCD 2012年第1期41-43,共3页
目的建立基于简并寡核苷酸引物PCR(degenerate oligonucleotide primed-PCR,DOP-PCR)的全基因组检测体系,并对其可靠性、灵敏度进行研究。方法通过荧光标记STR复合扩增毛细管电泳检测系统,对DOP-PCR扩增产物进行检测,获得DOP-PCR检测体... 目的建立基于简并寡核苷酸引物PCR(degenerate oligonucleotide primed-PCR,DOP-PCR)的全基因组检测体系,并对其可靠性、灵敏度进行研究。方法通过荧光标记STR复合扩增毛细管电泳检测系统,对DOP-PCR扩增产物进行检测,获得DOP-PCR检测体系的灵敏度、可靠性。结果成功建立了可靠的DOP-PCR检测体系,经过DOP-PCR预处理再进行STR分型检验,其检测灵敏度可达到5个细胞量(相当于30 pg)。结论本研究建立的DOP-PCR技术可靠且可提高法医学微量检材的检测灵敏度。 展开更多
关键词 法医遗传学 基因扩增 简并寡核苷酸引物pcr
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简并寡核苷酸引物PCR扩增单细胞基因组的影响因素研究 被引量:1
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作者 王晶 乔龙 +3 位作者 孙海翔 胡娅莉 李洁 李朝军 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第16期6675-6677,共3页
[目的]研究影响简并寡核苷酸引物聚合酶链反应(degenerate oligonucleotide primed PCR,DOP-PCR)扩增单细胞全基因组的因素。[方法]以单个人外周血淋巴细胞为材料,进行DOP-PCR,研究新鲜细胞与冷藏细胞及采用新鲜和冻存的细胞裂解物为模... [目的]研究影响简并寡核苷酸引物聚合酶链反应(degenerate oligonucleotide primed PCR,DOP-PCR)扩增单细胞全基因组的因素。[方法]以单个人外周血淋巴细胞为材料,进行DOP-PCR,研究新鲜细胞与冷藏细胞及采用新鲜和冻存的细胞裂解物为模板对扩增产物的均匀性及特异性的影响。[结果]以新鲜的淋巴细胞为模板与以冷藏的淋巴细胞为模板相比,扩增产物的均匀性相当,特异性上新鲜细胞较好。细胞裂解后立即进行扩增的效果在产物的均匀性及特异性方面均明显优于冻存的细胞裂解物。[结论]对单细胞应用DOP-PCR方法进行全基因组扩增时,应尽量选取新鲜细胞进行裂解,裂解后避免冻存以保证扩增的均匀性及特异性。 展开更多
关键词 单细胞 简并寡核苷酸引物pcr 基因扩增 全基因组
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共有序列简并杂合寡核苷酸引物聚合酶链反应在呼吸道副黏病毒科病毒诊断中的应用 被引量:1
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作者 赵百慧 王春 +8 位作者 沈佳仁 俞雪莲 高烨 滕峥 朱兆奎 储维 宋黎黎 张泓 张曦 《微生物与感染》 2013年第2期89-95,共7页
采用共有序列简并杂合寡核苷酸引物聚合酶链反应(CODEHOP PCR)体系和商品化RV12试剂盒对急性呼吸道感染患儿下呼吸道标本中的副黏病毒科病毒进行检测,比较CODEHOP PCR与RV12试剂盒检测结果的符合率和敏感度,观察CODEHOP PCR在临床呼吸... 采用共有序列简并杂合寡核苷酸引物聚合酶链反应(CODEHOP PCR)体系和商品化RV12试剂盒对急性呼吸道感染患儿下呼吸道标本中的副黏病毒科病毒进行检测,比较CODEHOP PCR与RV12试剂盒检测结果的符合率和敏感度,观察CODEHOP PCR在临床呼吸道标本中对副黏病毒诊断的应用价值,进一步探讨具备检测已知呼吸道病毒和未知新病毒特点的CODEHOP PCR在呼吸道疾病谱和未知潜在呼吸道病毒诊断中的推广价值。采集2011年上海市儿童医院因急性呼吸道感染住院的患儿下呼吸道标本572份,分别采用2种方法对副黏病毒进行检测。CODEHOP PCR检测出阳性标本113例,阳性率为19.76%;RV12试剂盒检测出阳性标本102例,阳性率17.83%;2种方法检测符合率为85.39%。以10倍倍比稀释呼吸道合胞病毒A(RSVA)感染的细胞收获液,检测结果显示,CODEHOP PCR和RV12试剂盒检测下限分别为10-8和10-6。CODEHOP PCR具备简便、易操作和测序精度高等特点,适合疾病预防系统和临床检验科使用。该方法与一些新兴的高通量快速分子诊断技术结合,可提高检测灵敏度,具有高通量、快速检测和筛查未知新病毒的优势,在呼吸道病原体检测领域值得进一步优化和推广。 展开更多
关键词 共有序列简并杂合寡核苷酸引物聚合酶链反应 副黏病毒科 新呼吸道病毒
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Potyvirus属成员基因组全序列的简并引物PCR和RACE扩增方法 被引量:30
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作者 陈炯 陈剑平 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期371-374,共4页
Based on multi-alignment of complete polyprotein amino acid sequences of genus Potyvirus,five degenerated primers were designedThey were Sprimer(5′-GGX AAY AAY AGY GGX CAZ CC-3′),pNIa(+)(5′-TNY TGG AAM CAY TGG A... Based on multi-alignment of complete polyprotein amino acid sequences of genus Potyvirus,five degenerated primers were designedThey were Sprimer(5′-GGX AAY AAY AGY GGX CAZ CC-3′),pNIa(+)(5′-TNY TGG AAM CAY TGG AT-3′),pCI2(+)(5′-GCX ACX AAX ATX ATX GAX AA-3′),pCI1(+)(5′-GTX GGX TCX GGX AAX TCX AC-3′)and pHC(+)(5′-TGY GAY AAY CAZ TTX GA-3′)(X=A,T,C or G:Y=T or C;Z=A or G;N=A or T;M=A,T or G)Using degenerated PCR and modified RACE methods,a protocol for determination of complete genome sequence of potyviruses was established and proved to be successful on five 展开更多
关键词 Potyvirus属成员 基因组分序列 pcr RACE 扩增方法 马铃薯Y病毒属 简并引物 全序列测定 扩增方法
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通用多重不对称PCR结合寡核苷酸芯片检测7种食源性致病菌 被引量:4
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作者 王小强 袁军 +1 位作者 韩锐郡 营思思 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第8期290-295,共6页
应用通用多重不对称聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和寡核酸芯片技术建立一种同时检测7种常见食源性致病菌的方法。每种致病菌上游或下游引物5’端连接一段异源的共有序列。以荧光标记的该共有序列作为通用引物,与限制... 应用通用多重不对称聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和寡核酸芯片技术建立一种同时检测7种常见食源性致病菌的方法。每种致病菌上游或下游引物5’端连接一段异源的共有序列。以荧光标记的该共有序列作为通用引物,与限制性特异引物经一步多重不对称PCR同时获得所有目标菌的单链标记靶序列,可被芯片上固定的特异性寡核苷酸探针捕获。通过芯片扫描、分析荧光信号完成检测。标准菌株检测结果证实,该方法可特异地检测单一和混合感染的目标菌,基因组DNA的检测灵敏度为0.1~1 pg。95份模拟污染和零售食品样本芯片检测结果与常规的分离与生化鉴定及荧光定量PCR结果一致。建立的寡核苷酸芯片方法可为快速、特异、灵敏及高通量地鉴定食源性致病菌提供一种有效的检测手段。 展开更多
关键词 食源性致病菌 通用引物 多重不对称pcr 寡核苷酸芯片
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检测HPV的新策略——简并引物PCR 被引量:3
6
作者 杨怀涛 杨秀英 《国外医学(临床生物化学与检验学分册)》 CAS 1994年第2期71-73,共3页
目前用PCR法检测HPV多采用型特异性引物,该法有很多弊端.最近人们采用简并引物PCR法来检测HPV,即借助一对HPV简并引物用PCR技术扩增HPV_sDNA,进而用分子杂交法或用酶切片段长度多形性来确定HPV类型,该法较型特异性引物PCR有很大优点.本... 目前用PCR法检测HPV多采用型特异性引物,该法有很多弊端.最近人们采用简并引物PCR法来检测HPV,即借助一对HPV简并引物用PCR技术扩增HPV_sDNA,进而用分子杂交法或用酶切片段长度多形性来确定HPV类型,该法较型特异性引物PCR有很大优点.本文就HPV简并引物的设计、HPV类型确定方法等进行了详述. 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 检测 简并引物 pcr
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优化简并引物PCR克隆Candida glycerinogenes 3-磷酸甘油脱氢酶基因片段
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作者 陈献忠 饶志明 +4 位作者 沈微 诸葛斌 方慧英 王正祥 诸葛健 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期91-96,共6页
为了从工业生产菌株耐高渗产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes)克隆甘油合成的限速酶编码基因胞浆NAD+-3-磷酸甘油脱氢酶基因(ctGPD),对不同酵母和其他真核生物的NAD+-3-磷酸甘油脱氢酶进行比对,分析氨基酸和核苷酸的保守序列,设计... 为了从工业生产菌株耐高渗产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes)克隆甘油合成的限速酶编码基因胞浆NAD+-3-磷酸甘油脱氢酶基因(ctGPD),对不同酵母和其他真核生物的NAD+-3-磷酸甘油脱氢酶进行比对,分析氨基酸和核苷酸的保守序列,设计了4对简并引物用于扩增C.glycerinogenes的NAD+-3-磷酸甘油脱氢酶(GPD)基因片段,经过优化PCR反应条件,利用其中一对中等简并度的引物扩增出CgGPD基因中约600 bp的保守核心片段。DNA序列及推绎的氨基酸序列进行比对分析表明,该基因片段与其他酵母的胞浆NAD+-3-磷酸甘油脱氢酶基因的对应区域具有典型的保守区域,并且与安格斯毕赤酵母的GPD基因相似性较高。 展开更多
关键词 pcr NAD^+依赖3-磷酸甘油脱氢酶 产甘油假丝酵母 克隆 简并引物
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简并引物在PCR扩增甘油-3-磷酸转酰酶基因中的应用
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作者 刘继梅 陈善娜 +2 位作者 杨明挚 鄢波 黄兴奇 《云南植物研究》 CSCD 1998年第2期225-228,共4页
应用高简并引物,结合PCR扩增技术从南瓜Cucurbitamoschata总RNA的逆转录产物中得到了GPAT基因保守区。在PCR反应中,简并引物之间的浓度配比是影响扩增效率的关键。用脱氧次黄苷(dI)替代简并引物中... 应用高简并引物,结合PCR扩增技术从南瓜Cucurbitamoschata总RNA的逆转录产物中得到了GPAT基因保守区。在PCR反应中,简并引物之间的浓度配比是影响扩增效率的关键。用脱氧次黄苷(dI)替代简并引物中的高简并位点,可大幅度降低简并程度,显著提高扩增产物的特异性及扩增效率。 展开更多
关键词 简并引物 甘油 磷酸转酰酶 pcr
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高简并引物小温度范围不规则降落PCR在庞大基因家族扩增中的应用
9
作者 华慧颖 王芳 +1 位作者 常重杰 杜启艳 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第17期10164-10166,共3页
[目的]探讨高简并性引物扩增庞大基因家族基因的特殊方法。[方法]采用高简并引物对鲤鱼基因组DNA分别进行了常规PCR扩增、常规降落PCR扩增以及优化后的小温度范围不规则跳跃降落PCR扩增。[结果]采用常规PCR仅得1条明显条带,得到的基因较... [目的]探讨高简并性引物扩增庞大基因家族基因的特殊方法。[方法]采用高简并引物对鲤鱼基因组DNA分别进行了常规PCR扩增、常规降落PCR扩增以及优化后的小温度范围不规则跳跃降落PCR扩增。[结果]采用常规PCR仅得1条明显条带,得到的基因较少;采用常规降落PCR仅得到弥散性扩增,无明显条带出现;而采用小温度范围不规则跳跃降落PCR则得到了3条明显条带和多个基因,扩增结果理想。[结论]为庞大基因家族扩增条件的优化与选择提供了理论依据。 展开更多
关键词 简并引物 不规则降落pcr 基因家族 扩增
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简并PCR技术在疾病检测中的应用
10
作者 刘敏 程淮 +2 位作者 蔡欢嫦 张贺伟 任静强 《生物技术进展》 2024年第4期545-554,共10页
普通PCR引物对目的基因扩增的单一特异性,限制了其在临床疾病检测中的通用性范围,而多重PCR需要避免若干引物对之间二级结构的干扰,应用同样受到一定的限制。简并PCR技术中简并性引物是基于基因保守区域的分析并结合简并碱基而设计,可... 普通PCR引物对目的基因扩增的单一特异性,限制了其在临床疾病检测中的通用性范围,而多重PCR需要避免若干引物对之间二级结构的干扰,应用同样受到一定的限制。简并PCR技术中简并性引物是基于基因保守区域的分析并结合简并碱基而设计,可以检测出高度相似的靶基因,具有高效性、灵敏性、特异性和低成本的特点,目前已被广泛应用于多个领域。综述了简并PCR技术在临床、食品安全、动植物疫病、寄生虫、水产养殖等领域疾病检测中的应用,并对其优缺点进行了讨论,以期为简并PCR的进一步发展以及在其他领域的应用提供参考和指导。 展开更多
关键词 pcr技术 简并pcr 简并引物 疾病检测
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简并PCR技术及其在基因克隆中的应用 被引量:29
11
作者 王洪振 周晓馥 +2 位作者 宋朝霞 刘文广 曾宪录 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期201-204,共4页
本文简要介绍简并PCR技术,包括什么是简并引物,如何设计简并引物,进行简并PCR的反应条件,应用简并PCR获得全长基因的方法和简并PCR技术的应用范围,并对简并PCR技术的局限性及其新进展进行讨论。在此基础上,简述基因的克隆策略以及简并PC... 本文简要介绍简并PCR技术,包括什么是简并引物,如何设计简并引物,进行简并PCR的反应条件,应用简并PCR获得全长基因的方法和简并PCR技术的应用范围,并对简并PCR技术的局限性及其新进展进行讨论。在此基础上,简述基因的克隆策略以及简并PCR技术在基因克隆中的应用。简并PCR技术是寻找和发现"新"基因或蛋白质家族新成员的一种非常有用的工具。 展开更多
关键词 简并pcr 简并引物 基因克隆
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采用简并引物克隆葎草花粉过敏原全长同源cDNA 被引量:5
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作者 陶爱林 何韶衡 +2 位作者 张利达 陈章权 李东栋 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期99-103,共5页
目的 :建立一套稳定可靠的方法 ,对过敏原性物种中的过敏原同源基因进行快速克隆。方法 :在分析生物信息数据库中积累的大量过敏原序列同源性的基础上 ,设计简并引物 ,基于高质量草花粉RNA ,逆转录合成cDNA。采用Touch down方式在cDN... 目的 :建立一套稳定可靠的方法 ,对过敏原性物种中的过敏原同源基因进行快速克隆。方法 :在分析生物信息数据库中积累的大量过敏原序列同源性的基础上 ,设计简并引物 ,基于高质量草花粉RNA ,逆转录合成cDNA。采用Touch down方式在cDNA池中进行选择性PCR扩增。同时借助梯度PCR程序 ,对引物扩增的简并性作进一步强化 ,并结合RACE技术获取全长cDNA ,进而对草花粉中的过敏原同源基因进行克隆。结果 :成功地获得 3个全长cDNA克隆。序列分析显示 ,这些基因与已知过敏原的基因序列相似性高达79%~ 85 % ,初步认定其为泛过敏原肌球蛋白抑制蛋白 (pro filin)的同源基因。对比RACE技术获得的相应基因的全长序列发现 ,这些序列在引物结合处与简并引物序列之间存在 4个碱基的差异 ,提示采用Touchdown方式的梯度PCR程序 ,可使引物的简并性得到进一步扩展。结论 :简并引物与Touch down梯度PCR相结合的方法 。 展开更多
关键词 简并引物 梯度pcr 基因克隆 过敏原 同源基因
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简并PCR及其应用 被引量:14
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作者 史兆兴 王恒樑 +1 位作者 苏国富 黄留玉 《生物技术通讯》 CAS 2004年第2期172-175,共4页
简并PCR技术是根据同源蛋白的氨基酸序列扩增到同源基因的核苷酸序列,具有独特的优点。成功进行简并PCR的关键是设计好两组引物库和对反应条件进行优化。由于简并PCR自身的特点,在新基因的克隆、基因表达检测、病毒检测和基因组研究中... 简并PCR技术是根据同源蛋白的氨基酸序列扩增到同源基因的核苷酸序列,具有独特的优点。成功进行简并PCR的关键是设计好两组引物库和对反应条件进行优化。由于简并PCR自身的特点,在新基因的克隆、基因表达检测、病毒检测和基因组研究中有其广泛而独特的应用。 展开更多
关键词 简并pcr 简并引物 同源蛋白 氨基酸序列 同源基因 核苷酸序列
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通用引物PCR检测临床常见致病菌的实验研究 被引量:6
14
作者 王建春 刘静 +3 位作者 黄文红 张秀岭 叶林柏 梅国华 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期73-77,共5页
通用引物可一次性扩增18种临床常见致病菌和耐药菌株的DNA,扩增片段长度在220bp左右,18种特异性探针分别与18种标准菌株的PCR扩增产物杂交结果显示探针都具有高度特异性;5种37例经法国梅里埃API细菌鉴定系统确定的临床分离菌株进行杂交... 通用引物可一次性扩增18种临床常见致病菌和耐药菌株的DNA,扩增片段长度在220bp左右,18种特异性探针分别与18种标准菌株的PCR扩增产物杂交结果显示探针都具有高度特异性;5种37例经法国梅里埃API细菌鉴定系统确定的临床分离菌株进行杂交鉴定,鉴定结果与分离株一致,表明设计的探针具有高度特异性及准确性。80例临床标本分别用法国梅里埃API细菌鉴定系统及PCR杂交法进行检测,阳性率分别为(52.5%)和(67.5%),表明PCR结合寡核苷酸杂交法比传统的生物学培养法更为灵敏,值得推广。 展开更多
关键词 通用引物 pcr 寡核苷酸探针 致病菌
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简并引物在黑木耳交配型因子研究中的应用初报 被引量:5
15
作者 肖扬 唐利华 边银丙 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期682-685,共4页
关键词 交配型 等基因池 特异性简并引物 BSA/pcr分析
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用简并引物快速克隆苛求芽孢杆菌尿酸酶的编码序列 被引量:2
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作者 赵运胜 卜友泉 廖飞 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期219-224,共6页
目的:从头克隆苛求芽孢杆菌尿酸酶基因的编码序列。方法:据Edman降解所得N端氨基酸序列(AERTMFYGKGDV)用BLASTp搜索N端相似性>70%细菌尿酸酶;多序列联配比对发现靠近N端和C端的2个保守肽段。据N端已知序列和2个保守肽段设计简并引物... 目的:从头克隆苛求芽孢杆菌尿酸酶基因的编码序列。方法:据Edman降解所得N端氨基酸序列(AERTMFYGKGDV)用BLASTp搜索N端相似性>70%细菌尿酸酶;多序列联配比对发现靠近N端和C端的2个保守肽段。据N端已知序列和2个保守肽段设计简并引物进行PCR扩增;将所得片段连接到T载体,转化后筛选阳性克隆测序。结果:据密码子偏好性调整简并引物,获得该尿酸酶从第六位氨基酸到终止密码子之间的编码序列;此尿酸酶共含322个氨基酸残基,原核尿酸酶靠近N端的保守序列ATDSMKNFI从该尿酸酶第70位氨基酸残基左右开始,另一保守序列GKVYTEPR从该尿酸酶第290位氨基酸残基开始但变为GAVFTEPR。结论:用简并引物PCR快速克隆获得了苛求芽孢杆菌尿酸酶的编码序列。 展开更多
关键词 苛求芽孢杆菌尿酸酶 简并引物pcr 基因测序
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从水稻Ac/Ds插入突变体扩增Ds侧翼序列的最适TAIL-PCR引物(英文) 被引量:14
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作者 孙丙耀 PIAO Hai-Long +1 位作者 PARK Sung-Han HAN Chang-Deok 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期821-826,共6页
温度非对称交互PCR(TAIL PCR)技术已广泛应用于从多种生物体系克隆侧翼于已知序列的DNA片段的分子操作中 ,并极大地促进了反向遗传学研究。但是 ,可能由于不同物种间基因组大小和序列存在显著差异 ,在采用该技术进行转座元件Ds水稻插入... 温度非对称交互PCR(TAIL PCR)技术已广泛应用于从多种生物体系克隆侧翼于已知序列的DNA片段的分子操作中 ,并极大地促进了反向遗传学研究。但是 ,可能由于不同物种间基因组大小和序列存在显著差异 ,在采用该技术进行转座元件Ds水稻插入突变体鉴定过程中 ,常因TAIL PCR反应的稳定性差而影响突变体筛选效率。有鉴于此 ,根据Ds核苷酸序列设计了分别对应或互补于Ds插入元件两端长度不同的 12个特异引物组成 32个组合 ,在大量预试验基础上与 6个不同简并性 (32~ 2 5 6 )的随机简并引物分别组合进行TAIL PCR反应 ,较系统地研究了引物特性对以水稻基因组DNA为模板的TAIL PCR反应效率的影响。结果发现 ,第一反应采用长序列特异引物(36~ 4 0mer)可显著提高扩增特异性 ,随机简并引物的简并度对反应的影响显著。还选择出两个适于从水稻Ds插入突变体基因组高效扩增出Ds插入侧翼片段的最优特异引物组合和最适简并引物。应用本研究结果可显著地提高TAIL 展开更多
关键词 随机简并(AD)引物 Ds-特异引物 Ds侧翼序列 水稻 温度非对称交互pcr
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真菌通用引物PCR反应鉴别兔眼真菌性和细菌性角膜溃疡 被引量:2
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作者 吴建国 丁进亚 +1 位作者 金中秋 周和政 《医学新知》 CAS 2004年第3期161-162,共2页
目的 利用真菌通用引物PCR反应 ,鉴别兔眼真菌性和细菌性角膜溃疡。方法 根据临床上常见的致病细菌菌株 (金葡菌、绿脓菌 ) ,真菌菌株 (烟曲霉菌、白念菌、镰刀菌 ) ,制作兔眼角膜溃疡的动物模型 ,选取一对真菌通用引物 ,一对寡核苷... 目的 利用真菌通用引物PCR反应 ,鉴别兔眼真菌性和细菌性角膜溃疡。方法 根据临床上常见的致病细菌菌株 (金葡菌、绿脓菌 ) ,真菌菌株 (烟曲霉菌、白念菌、镰刀菌 ) ,制作兔眼角膜溃疡的动物模型 ,选取一对真菌通用引物 ,一对寡核苷酸引物B2F(5 'ACTTTCGTAGGATAG - 3')和B4R(5 ' TGATCGTCTTCGATAAATA 3') ,对标本进行聚合酶链反应。结果 在 6 87bp处出现DNA扩增带者为阳性。造模后第 3d真菌组出现扩增带阳性的 90 % ,第 5d真菌组出现扩增带阳性的 96 .6 %。细菌组始终未出现阳性结果。 展开更多
关键词 兔眼 细菌性角膜溃疡 真菌性 阳性 鉴别 通用引物 pcr反应 DNA扩增 寡核苷酸 标本
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利用CODEHOP设计简并引物克隆镰刀菌果胶酶基因片段
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作者 邹庆甲 王树桐 +3 位作者 王娟 王亚南 胡同乐 曹克强 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期57-62,93,共7页
利用CODEHOP(Consensus-degenerate hybrid oligonucleotide primers)设计真菌果胶酶基因片段的简并引物,并对设计的多对引物进行筛选,比较了普通PCR和Touchdown-PCR(TD-PCR)程序的扩增效果,并对产物进行了测序、比对和分析。结果表明:... 利用CODEHOP(Consensus-degenerate hybrid oligonucleotide primers)设计真菌果胶酶基因片段的简并引物,并对设计的多对引物进行筛选,比较了普通PCR和Touchdown-PCR(TD-PCR)程序的扩增效果,并对产物进行了测序、比对和分析。结果表明:利用CODEHOP设计简并引物可信性强,阳性率高,能够从供试菌株中获得与目的片段大小相近的产物。利用TD-PCR程序扩增比普通PCR扩增效果好。扩增产物序列BLASTX比对和分析结果表明,产物片段编码的氨基酸序列与镰刀菌属来源的果胶酶氨基酸片段相似性均超过90%,说明所扩增的序列即为镰刀菌果胶酶基因片段。 展开更多
关键词 简并引物 镰刀菌 果胶酶基因 降落pcr
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简并PCR在肠道病毒血清型鉴定中的应用
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作者 林裕龙 温坤 +2 位作者 王压娣 晋晶 车小燕 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期291-293,共3页
目的探讨共有序列简并杂合寡核苷酸引物PCR(CODEHOP-PCR)在肠道病毒血清型鉴定中的临床应用价值。方法以CODEHOP-PCR检测经实时荧光RT-PCR鉴定为EV71和CA16手足口病患者的临床样本和病毒分离培养细胞上清的肠道病毒VP1基因片段,经琼脂... 目的探讨共有序列简并杂合寡核苷酸引物PCR(CODEHOP-PCR)在肠道病毒血清型鉴定中的临床应用价值。方法以CODEHOP-PCR检测经实时荧光RT-PCR鉴定为EV71和CA16手足口病患者的临床样本和病毒分离培养细胞上清的肠道病毒VP1基因片段,经琼脂糖凝胶电泳并回收、测序,与Genbank提供的序列比较,确定肠道病毒的血清型。结果 CODEHOP-PCR后的序列分析表明,所有的EV71毒株和CA16毒株与近几年国内报道的部分毒株同源性在96%以上,其血清分型结果验证了实时荧光RT-PCR分型结果的准确性。结论 CODEHOP-PCR合并测序用于肠道病毒血清型的准确鉴定,与传统的病毒分离及血清中和试验相比,具有更快速、准确的优点。 展开更多
关键词 共有序列简并杂合寡核苷酸引物 肠道病毒 血清型 手足口病
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