贲门癌组织环氧化酶-2和血管生成因子的表达及其与血管生成的关系

目的:探讨环氧化酶-2(COX-2)和血管生成因子(VEGF)在贲门癌组织中的表达及其与肿瘤血管生成的关系.方法:免疫组化法检测贲门癌手术切除标本46例和癌旁正常黏膜标本21例中COX-2,VEGF表达.采用抗CD34抗体标记微血管内皮细胞,计算微血管密度(MVD).分析COX-2,VEGF表达与MVD和贲门癌主要临床病理特征的相关性.结果:贲门癌组织COX-2,VEGF阳性表达率、MVD值显著高于癌旁正常黏膜的(80.4% vs 14.3%,x^2=26.22,P<0.01;76.1% vs 19.1%,x^2=19.28,P<0.01:31.95±3.87 vs 16.28±1.55,t=17.76,P<0.01).COX-2,VEGF表达、MVD值与肿瘤临床TNM分期和淋巴结转移密切相关,TNM分期中Ⅲ+Ⅳ期的贲门癌组织中COX-2,VEGF表达率、MVD值显著高于Ⅰ+Ⅱ期的(90.3% vs 60.0%,x^2=5.91,P<0.05;96.8% vs 46.7%,x^2=16.13,P<0.01;33.43±3.34 vs 28.90±3.08,t=4.42,P<0.01).伴有淋巴结转移的贲门癌组织中COX-2,VEGF表达率,MVD值显著高于无淋巴结转移的(94.1% vs 41.7%,x^2=15.51,P<0.01:91.2% vs 50.0%,x^2=9.56,P<0.01;33.53±3.21 vs 27.48±1.03,t=6.38,P<0.01).Spearman等级相关分析表明,COX-2,VEGF表达与MVD呈显著正相关(r= 0.823:r=0.892,P<0.01).结论:COX-2,VEGF异常表达及其诱导的血管生成在贲门癌的侵袭和淋巴结转移中起重要作用.

不同细胞密度对小鼠心肌微血管内皮细胞小管生成的影响

目的探讨小鼠心肌微血管内皮细胞的体外小管生成实验的最佳细胞浓度,从而为心脏微血管的研究提供体外实验模型。方法组织块贴壁法培养小鼠心肌微血管内皮细胞,将小鼠心肌微血管内皮细胞分成5×10^3个/孔、1×10^4个/孔、2×10^4个/孔、3×10^4个/孔4组,并接种至Matrigel胶包被的48孔板中,细胞接种后24 h在倒置显微镜下观察拍照,并用Image J软件对形成的管腔数量、分支数量进行统计,统计结果用(x±s)表示,数据采用SPSS 17.0软件分析。结果组织块贴壁法可成功培养小鼠心肌微血管内皮细胞,分离培养的小鼠心肌微血管内皮细胞vWF相关抗原阳性表达。细胞密度为5×10^3个/孔时无管腔样结构生成,当细胞浓度为1×10^4个/孔、2×10^4个/孔、3×10^4个/孔时可有管腔样结构生成。细胞浓度为2×10^4个/孔时形成的管腔数量及分支数量高于1×10^4个/孔、3×10^4个/孔(P<0.05)。结论分离培养的小鼠心肌微血管内皮细胞具有血管形成能力。在一定的细胞接种浓度范围内,接种的细胞密度越大,体外血管形成能力增强,但细胞浓度超过血管形成的最佳浓度后,随着接种细胞浓度的增大,小鼠心肌微血管内皮细胞的体外血管形成能力减弱。

陈国强课题组最新成果或为肝癌治疗提供新策略上海交大医学院科研人员在干预肝癌组织新生皿管生成研究中取得新进展可能为肝癌的治疗提供新策略

历时6年,上海交通大学医学院细胞分化和凋亡教育部重点实验室陈同强教授领衔的课题组在多梳蛋白4（Cbx4）~过类泛素（SUMO）化修饰低氧诱导因子1α（HIF-α），

小管形成实验在肿瘤微血管形成中的应用研究

肿瘤的增殖与侵袭有赖于肿瘤新生微血管的形成,破坏或者抑制此过程就能切断肿瘤生长的"营养与能源",因此肿瘤血管生成抑制因子、抗血管生成的药物及研究方法已成为人们研究的热点。本文就小管形成实验在肿瘤微血管生成的应用及影响小管实验管腔形成的各项因素做一综述。

人血纤维蛋白溶酶原K5环的基因合成、表达、纯化与活性鉴定

根据大肠杆菌遗传密码的偏爱性 ,人工合成人血纤维蛋白溶酶原 K5全基因 ,并在原核系统中以硫氧还蛋白融合蛋白的形式实现了高效表达 .重组蛋白通过 Ni2 +金属螯合层析得到初步纯化 ,通过肠激酶切割去除了融合标签 .应用鸡胚尿囊膜实验检测切割后的 rh K5的生物学活性 ,发现与对照组相比 ,rh K5能明显地降低血管管径、血管总面积以及血管总面积与视野面积的比值 ,表明切割后的产物具有显著抑制新生血管生成的生物学活性 .为进一步研究和开发抗血管生成药物奠定了基础 .

人canstatin基因克隆及其重组蛋白的表达和纯化

目的克隆人血管能抑素canstatin基因,构建其原核表达载体,表达并纯化出canstatin蛋白。方法从人胎盘组织中提取总RNA,经RTPCR扩增出canstatin基因,克隆进质粒pUCmT,将测序正确的目的基因片段插入质粒pET22b(+)相应位点,转化E.coliBL21,IPTG诱导蛋白表达。超声破碎菌体,NiNTA柱亲和层析纯化重组蛋白。结果从人胎盘组织中提取总RNA,显示3条清晰条带,分别对应28S,18S,5S,分光光度计法测得总RNA浓度为1.8g/L;RTPCR扩增出与预期目的基因canstatin长度一致的cDNA片段;构建出克隆质粒pUCmT/canstatin,基因测序结果与GenBank公布的canstatin基因序列完全一致;构建出表达质粒pET22b(+)/canstatin,BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定证实构建正确;IPTG诱导蛋白表达,SDSPAGE电泳分析表明在相对分子质量24kD左右出现新的蛋白表达条带,诱导后1h、2h、3h、4h表达蛋白占菌体总蛋白的百分比分别为18.2%、18.8%、23.0%和23.4%;诱导3h的菌体超声破碎后,Ni柱亲和层析,125、250mmol/L咪唑洗脱液SDSPAGE电泳显示出清晰的单一条带。结论成功克隆出canstatin基因,成功构建了其原核表达载体,并且成功表达、纯化出canstatin蛋白,为进一步研究其临床应用打下基础。

高压氧联合血红蛋白对高糖引起的血管内皮细胞损伤的作用

目的探究高压氧(HBO)联合血红蛋白(Hb)对高糖诱导的血管内皮细胞活力、侵袭、迁移及小管形成能力的影响及其调控机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),CCK-8法检测不同剂量血红蛋白(2、4、6、8、10μmol/L)和高压氧(0.10、0.15、0.20、0.25 Mpa)对HUVECs细胞活力的影响。建立高糖诱导的HUVECs细胞模型,分为6组:对照组(5.5 mmol/L葡萄糖处理48 h),甘露醇组(27.5 mmol/L甘露醇处理48 h),高糖组(33 mmol/L葡萄糖处理48 h),高糖+0.25 Mpa高压氧组,高糖+6μmol/L血红蛋白组,高糖+0.25 Mpa高压氧+6μmol/L血红蛋白组。通过CCK-8法检测细胞活力;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测LDH水平;TUNEL染色观察细胞凋亡情况;免疫印迹(Western blot)法检测凋亡相关蛋白表达;划痕实验和Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力;小管形成实验检测血管生成;最后通过Western blot检测核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素氧合酶1(HO-1)蛋白表达。结果随着血红蛋白或高压氧剂量的不断增加,HUVECs细胞活力未发生显著变化。与对照组相比,高糖组HUVECs细胞活力、迁移、侵袭和小管形成能力下降,LDH水平升高,凋亡率增加,且Bcl-2、Nrf2和HO-1蛋白表达减少,Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达增加。与高糖组相比,高糖+0.25 Mpa高压氧组和高糖+6μmol/L血红蛋白组细胞活力、迁移、侵袭和小管形成能力升高,LDH水平降低,凋亡率下降,且Bcl-2、Nrf2和HO-1蛋白表达增加,Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达减少;而高压氧和血红蛋白两者联合作用时,影响更为显著。结论高压氧联合血红蛋白促进高糖作用下HUVECs的细胞活力、侵袭、迁移及小管形成能力并抑制细胞凋亡,其机制可能与激活Nrf2/HO-1通路有关。

甲紫对白念珠菌毒力因子作用的实验研究

目的:确定甲紫对白念珠菌毒力因子分泌型酸性蛋白酶和细胞外磷脂酶活性及芽管生成率的作用。方法:采用蛋黄平皿培养基和小牛血清白蛋白培养基分别检测筛选蛋白酶、磷脂酶阳性且Pz值≥2+的白念珠菌各12株,将2μg/mL、0.5μg/mL的甲紫溶液作用于各菌株菌悬液1h。分别测定不同浓度甲紫溶液作用前后各菌株蛋白酶、磷脂酶的Pz值及芽管生成率,比较甲紫溶液作用前后各菌株蛋白酶、磷脂酶活性及芽管生成率的不同。结果:2μg/mL、0.5μg/mL药物作用组磷脂酶活性、蛋白酶活性及芽管生成率均显著低于药物作用前对照组(P<0.05)。结论:低浓度甲紫溶液短时间作用于白念珠菌可降低菌株磷脂酶、蛋白酶活性和芽管生成率,从而降低白念珠菌毒力和致病性。

不同培养基对白假丝酵母菌生物膜芽管形成的影响

目的评估不同培养基对产生物膜白假丝酵母菌芽管产生的影响。方法收集临床产生物膜的白假丝酵母菌20株,购买3株可以产生物膜的质控菌株。比较23株白假丝酵母菌在5种不同培养基(人血清、胰蛋白胨大豆肉汤、脑心浸液肉汤、RPMI 1640、NaHCO_(3)溶液)的出芽菌株数量和出芽率。结果在23株产生物膜的白假丝酵母菌中,人血清和脑心浸液肉汤培养基中23株(100.0%)全部产生芽管,NaHCO_(3)培养基18株(78.3%)、胰蛋白胨大豆肉汤培养基16株(69.6%)和RPMI 1640培养基15株(65.2%)。芽管生成试验阳性的白假丝酵母菌中,在5%CO_(2)培养条件下的酵母细胞出芽率更高(孵育2h,出芽率78.0%),芽管长度更长。结论脑心浸液肉汤可以代替人血清作为芽管试验的诱导剂,人血清(5%CO_(2))可以促进芽管的生成以及延伸芽管的长度。