橡胶树未授粉胚珠愈伤组织乳管细胞的鉴定及分化研究

乳管是橡胶树合成和贮存胶乳的场所。目前尚不清楚橡胶树未授粉胚珠来源的愈伤组织是否存在乳管细胞及其分化情况。本研究通过组织化学法、免疫组织化学法、分子生物学法证实未授粉胚珠愈伤组织中存在乳管细胞。RT-PCR结果显示,小橡胶粒子蛋白(SRPP)、橡胶延伸因子(REF)基因均能从未授粉胚珠愈伤组织cDNA中扩增出,Blast比对发现,它们的序列与已知的橡胶树树皮胶乳表达的基因序列相一致,进一步证实未授粉胚珠愈伤组织存在乳管细胞,且其功能与树皮乳管细胞相似。培养基中添加低浓度的茉莉酸(JA)能促进未授粉胚珠愈伤组织乳管细胞分化,而高浓度的JA会抑制其分化,JA浓度以1 mg/L效果最佳。橡胶树未授粉胚珠愈伤组织乳管细胞分化依赖于基因型。本研究结果为橡胶树未授粉胚珠愈伤组织可作为研究乳管分化机制的模型提供实验依据,对促进乳管分化机制研究具有一定意义。

茉莉酸甲酯对橡胶树花药愈伤乳管细胞分化的影响

橡胶树老化的愈伤组织存在乳管细胞。茉莉酸甲酯(MeJA)与茉莉酸(JA)同属茉莉酸类物质(JAs),但MeJA对橡胶树愈伤乳管细胞分化的效果尚不清楚。系统研究MeJA对橡胶树愈伤乳管细胞分化的效果,结果发现,低浓度的MeJA(0~1 mg/L)对花药愈伤组织的生长影响不明显,而高浓度的MeJA(2~3 mg/L)会抑制愈伤组织生长,且MeJA浓度与愈伤组织生长呈负相关关系。组织化学制片结果显示,低浓度的MeJA能显著提高愈伤乳管细胞发生频率,其中浓度为1 mg/L效果最佳;而高浓度的MeJA则会降低其发生频率。荧光定量PCR结果显示,培养基中添加MeJA后SRPP、REF、CPT等与橡胶生物合成相关的重要基因的表达量在愈伤组织中变化趋势与愈伤乳管细胞发生频率的变化趋势基本一致,进一步证实MeJA能促进愈伤乳管细胞分化。透射电镜观察发现愈伤乳管细胞内含有橡胶粒子、黄色体等细胞器。研究结果对促进橡胶树愈伤组织在乳管分化研究中的应用,以及开发新型橡胶树增产刺激剂,促进橡胶树天然橡胶的生产具有一定意义。

手术联合免疫靶向治疗对肝胆管细胞癌患者预后的影响

目的探讨手术联合免疫靶向治疗对肝胆管细胞癌患者预后的影响。方法将某院2019年1月~2021年12月200例肝胆管细胞癌患者分组,按照简单随机数字表法分为对照组(n=100)和观察组(n=100),对照组在基础治疗7 d后联合免疫靶向治疗,观察组在超声引导下射频消融术治疗1周后联合免疫靶向治疗。比较两组患者的临床疗效、体液免疫指标、细胞免疫指标、肿瘤标志物水平。结果观察组的总缓解率为87.00%,高于对照组的75.00%(P<0.05);与治疗前相比,治疗后对照组的免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)水平均降低,治疗后观察组的IgA、IgM、IgG水平均上升,且观察组高于对照组(P<0.05);与治疗前相比,治疗后对照组的CD3^(+)CD56^(+)NK、CD4、CD3、CD4/CD8水平均降低,治疗后对照组的CD8水平升高;治疗后观察组的CD3^(+)CD56^(+)NK、CD4、CD3、CD4/CD8水平均升高,且观察组高于对照组;治疗后观察组的CD8水平降低,且观察组低于对照组(P<0.05);与治疗前相比,治疗后两组的糖类抗原199(CA199)、癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)水平均降低,且观察组低于对照组(P<0.05)。结论超声引导下射频消融术联合免疫靶向治疗对肝胆管细胞癌患者具有良好的临床疗效,可明显改善患者的免疫功能,降低肿瘤标志物水平,预后较好。

参麦对氧化损伤的肾小管细胞的代谢影响

目的探讨参麦注射液(SMI)对H2O2导致的肾小管细胞氧化性损伤的有氧代谢的影响。方法建立H2O2致鼠肾小管细胞损伤模型,用组织化学方法显示培养小管细胞琥珀酸脱氢酶(SDH)和乳酸脱氢酶(LDH)。结果参麦注射液和泛醌都具有减轻氧化性损伤肾小管细胞SDH及LDH活性丧失的作用,与模型组比较有显著性差异(P<0.01),且参麦注射液对未损伤的小管细胞有明显的保护作用(P<0.01)。结论参麦注射液对H2O2所致的小管细胞氧化性损伤具有明显的保护作用,能保护有氧代谢关键酶的活性,能提高其有氧代谢功能。

肝脏炎性假瘤误诊为肝胆管细胞癌1例

肝脏炎性假瘤（inflammtory pseudotumor of the liver,IPL）是一种少见的肝脏炎性瘤样结节为病理特征的良性占位病变,极易误诊。本文回顾分析IPL误诊1例,现报告如下。 1病例资料 1.1主诉患者,男性,63岁,因“查体发现肝脏占位3天”收入院。

三七总皂甙对IL-1α诱导大鼠肾小管细胞转分化的影响

目的研究三七总皂甙 (PNS)能否通过阻断IL 1α诱导的肾小管上皮细胞转分化及减少细胞外基质分泌 ,防治肾间质纤维化的发生。方法体外培养正常大鼠肾小管上皮细胞 (NRK5 2E) ,应用倒置相差显微镜及扫描电镜观察NRK5 2E细胞形态学变化 ;流式细胞技术及免疫组织化学方法检测α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)表达 ;ELISA法定量检测细胞上清液中纤维连接蛋白 (FN)水平。结果IL 1α可诱导肾小管上皮肌纤维母细胞转分化 (TEMT) ,细胞肥大、拉长呈梭形 ,α SMA表达明显增强 ,FN分泌增加 (P <0 0 5 )。加入不同浓度PNS后 ,细胞形态接近正常肾小管上皮细胞形态 ,α SMA表达、FN分泌均较IL 1α诱导组明显抑制 (P <0 0 5 )。这些作用呈剂量依赖性抑制 (P <0 0 5 )。单独加入不同剂量PNS肾小管细胞无明显变化。结论IL 1α可诱导肾小管上皮细胞肌纤维母细胞转分化 ,并可促进细胞外基质成分FN的沉积 ;PNS能抑制IL 1α诱导的NRK5 2E细胞转分化及细胞外基质分泌 。

Smad7基因转染拮抗TGF-β_1对培养肾小管细胞的影响

目的 探讨Smad7基因转染对TGF β1 诱导的小管细胞生长阻滞 ,细胞凋亡和FN分泌的影响。方法 采用Tfx 5 0脂质体将小鼠Smad7转染入原代培养的肾小管细胞 ,用MTT法观测小管细胞的增殖、流式细胞仪观测其细胞周期的变化 ;ELISA法测定小管细胞FN的分泌。结果 培养基添加TGF β1 ( 10ng ml) 48h后 ,小管细胞增殖能力明显下降 ,停滞于G1 期的细胞数增多 ,细胞分泌的FN量也明显增高 ,相反 ,Smad7基因转染后可明显拮抗TGF β1 对小管细胞的上述作用。结论 Smad7基因转染可明显拮抗TGF β1 对小管细胞的影响 。

家兔肾脏内髓集合管细胞的分离与原代培养

目的 :为了分离、培养肾脏内髓集合管 (IMCD)细胞。方法 :本文采用胶原酶消化和低渗溶解等步骤分离家兔肾脏加IMCD细胞 ;分离的细胞置DMEM /F1 2培养基、37℃、5 %CO2 的空气环境中培养 ;经透射电镜和角蛋白抗体免疫细胞化学等鉴定。结果 :几乎所有的培养细胞均被染为棕黄色 ;电镜观察培养的细胞核大 ,呈圆形或椭圆形。胞浆少 ,细胞器少见。细胞膜表面存在许多短而粗的微绒毛。与天然的IMCD细胞的形态和免疫细胞化学特征相符。结论 :本文培养的细胞为家兔肾脏IMCD细胞。

巴西橡胶树乳管细胞HbSKP1基因克隆及原核表达

SKP1蛋白是茉莉酸信号途径关键环节之一的SCFCOI1复合体的成员,在CUL1和COI1之间起连接作用。本文采用RT-PCR和RACE技术,从巴西橡胶树无性系热研7-33-97的胶乳中克隆了HbSKP1基因。该基因全长778bp,含一个543bp的开放阅读框,编码180个氨基酸。生物信息学分析表明,推导的HbSKP1氨基酸序列含有SKP1家族特征性的Skp1-POZ和Skp1结构域。HbSKP1与蓖麻、毛果杨、拟南芥、油棕、啤酒花、苜蓿的SKP1类蛋白的氨基酸序列同源性分别为64%、61%、47%、47%、47%和47%。原核表达了HbSKP1-His(6)融合蛋白。本研究为进一步鉴定乳管细胞中茉莉酸途径核心环节SCFCOI1复合体打下良好基础。

巴西橡胶树乳管细胞HbWRKY1基因克隆及表达分析

采用PCR和RACE技术,从巴西橡胶树无性系热研7-33-97的乳管细胞中克隆了WRKY转录因子家族的一个成员HbWRKY1。该基因全长为1755 bp,含有1个1440 bp阅读框,编码479个氨基酸。生物信息学分析表明,HbWRKY1含有2个WRKY结构域和C2H2锌指结构基序,与蓖麻、杨树、葡萄、黄瓜、拟南芥的WRKY成员的氨基酸序列同源性分别为64.14%、60.04%、42.54%、40.61%和35.4%,属于Ⅰ类WRKY家族成员。实时荧光定量PCR分析表明,割胶和乙烯显著上调HbWRKY1基因的表达,但茉莉酸和机械伤害对HbWRKY1的表达没有明显影响,表明HbWRKY1可能在乙烯信号途径对防卫蛋白的调节中起重要作用。

川芎嗪对大鼠肾小管细胞钙转运的影响

用Ｐｅｒｃｏｌｌ密度梯度离心法分离大鼠肾皮质远曲小管细胞（ＤＴＣ）和近曲小管细胞（ＰＴＣ）．应用放射性同位素￣（４５）Ｃａ示踪技术观察川芎嗪对Ｃａ￣（２＋）跨膜转运的影响，并且采用蛋白质竞争结合法检测了胞膜腺苷酸环化酶活性及细胞内环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）含量。结果表明川芎嗪明显抑制ＰＴＣ和ＤＴＣ细胞￣（４５）Ｃａ的摄取，但对￣（４５）Ｃａ的外排无明显影响。川芎嗪对ＰＴＣ和ＯＴＣ胞膜腺苷酸环化酶活性无影响，但使细胞内ｃＡＭＰ含量显著降低。结果提示川芎嗪影响肾小管细胞钙的摄取，其机理可能与其诱导其它物质使细胞内ＣＡＭＰ水平降低有关。

橡胶树乳管细胞GPPS基因的克隆与表达分析

【目的】克隆橡胶树乳管细胞短链异戊烯基合酶(GPPS)基因,分析其表达特性和编码蛋白的相互作用,为解析该类基因在天然橡胶和萜类合成中的作用提供理论参考。【方法】采用逆转录PCR(RT-PCR)和cDNA末端快速克隆(RACE)从橡胶树乳管细胞胶乳中克隆GPPS基因(HbGPPS1和HbGPPS2),利用生物信息学分析其编码蛋白的特性;采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测HbGPPS1和HbGPPS2在树皮和胶乳中的组织表达特异性、在不同橡胶树品系中的表达模式及其对割胶和外源茉莉酸甲酯(MeJA)处理的响应模式,并在原核细胞中进行表达分析;通过酵母双杂交技术检测HbGPPS1和HbGPPS2蛋白的相互作用关系。【结果】从橡胶树乳管细胞乳胶中克隆获得HbGPPS1和HbGPPS2基因,其中HbGPPS1基因编码框长度为1248 bp,编码415个氨基酸,蛋白分子量为45.9 kD,理论等电点为6.77;HbGPPS2基因编码框长度为1239 bp,编码412个氨基酸,蛋白分子量为45.6 kD,理论等电点为6.77。二者的核苷酸序列相似性为89%,且编码蛋白均含有2个典型的异戊烯基转移酶活性结构域DDXXD(D),定位于叶绿体和线粒体。HbGPPS1蛋白自身及其与HbGPPS2蛋白均能形成较弱相互作用的二聚体。qRT-PCR检测结果显示,HbGPPS1和HbGPPS2基因在胶乳中的表达量高于树皮,但均以HbGPPS2基因表达量较高,表明二者表达存在组织特异性。经MeJA处理后橡胶树胶乳中HbGPPS1和HbGPPS2基因表达量较对照高,即外源MeJA可促进内源茉莉酸的合成,激活乳管细胞内的茉莉酸信号从而上调HbGPPS1和HbGPPS2基因表达。在5个橡胶树栽培品系中,HbGPPS2基因的表达量均明显高于HbGPPS1基因,且与PR107、热研7-20-59、RRIM600和热研7-33-97干胶含量趋势一致,但二者仅在热研8-79和热研7-33-97的表达模式存在差异。HbGPPS2基因能在大肠杆菌中成功表达。【结论】HbGPPS2基因可能是乳管细胞中参与天然橡胶和萜类合成的主效基因,而HbGPPS1基因可能是功能冗余基因。HbGPPS2和HbGPPS1基因在不同橡胶树品系中的表达模式与各品系干胶含量呈正相关,可用作为干胶含量评估的筛选标记。

人参二醇组皂甙减轻肾缺血再灌流性兔血清致伤肾小管细胞的作用及机制

目的 :用培养的人肾小管细胞 ,观察人参二醇组皂甙 (PDS)减轻急性缺血再灌流肾损伤性兔血清(SIR)对小管细胞的损伤作用 ,并探讨其机制。方法 :用夹闭法致兔肾缺血并提取缺血血清和对照血清 ,测定血清中的MDA、NO含量和SOD活力。不同的培养基 (普通培养基、对照血清、缺血血清以及缺血血清加PDS)分别与肾小管细胞共培养 96h ,生化法测定培养液或细胞中MDA和NO含量以及SOD、LDH、Na+ -K+ -ATP酶和Ca2 + -ATP酶活力。结果 :(1)SIR中MDA和NO含量较SC的高 ,而SOD活力则降低 ;(2 )SIR可使培养液中MDA含量、细胞内的NO含量、LDH活力显著升高 ,使细胞内的SOD、Na+ -K+ -ATP酶和Ca2 + -ATP酶活力明显降低 ,而PDS则可抑制SIR的这些效应的发挥。结论 :PDS具有减轻急性肾缺血再灌流性兔血清致肾小管细胞损伤的作用。其机制可能同增强SOD活力、减轻氧自由基和NO等的细胞毒性作用、增强ATP酶活性以维持生物膜结构和功能的完整性等作用有关。

乙烯利刺激对橡胶树乳管细胞活性氧代谢的影响

研究了质量分数分别为1%,5%和10%的乙烯利刺激中龄橡胶无性系RRIM600,胶乳中活性氧产生速率及清除系统的变化。结果表明:高浓度乙烯利刺激后乳管中H2O2含量和活性氧产生速率提高,CAT,ASA-POD活性下降;而低浓度乙烯利刺激后乳管中H2O2含量和活性氧产生速率略有下降,CAT,ASA-POD活性则有不同程度的加强。

外源性谷胱甘肽对肾小管细胞氧化应激的影响

目的观察外源性谷胱甘肽对肾小管上皮细胞氧化应激性损伤的作用。方法利用离体培养肾小管细胞建立氧化应激性损伤的模型,观察小管细胞形态结构的改变及细胞存活率、乳酸脱氢酶(lactated dehy-drogenase,LDH)释放量、脂质过氧化产物丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量的变化。结果H2O2所致肾小管细胞损伤,表现为细胞存活率降低,LDH释放增加,细胞的脂质过氧化产物MDA含量增加。还原型谷胱甘肽能提高细胞存活率,降低LDH释放,减轻脂质过氧化反应。结论H2O2可导致肾小管氧化应激性损伤,外源性给予还原型谷胱甘肽对损伤的肾小管上皮细胞有保护作用。

颈管细胞及化生细胞在宫颈液基细胞学检查中的临床价值

目的探讨颈管细胞(EC)和化生细胞(MSC)在宫颈病变筛查中的临床价值。方法将28 952份液基细胞学标本按颈管细胞和化生细胞存在状态分为EC(+)/MSC(+)、EC(+)or MSC(+)及EC(-)/MSC(-)等3组,比较各组液基标本的满意率和细胞学异常的检出率。结果细胞学异常总检出率为3.54%,其中低级别上皮内瘤变(LSIL)、高级别上皮内瘤变(HSIL)及宫颈鳞癌(SCC)检出率分别为1.11%、0.36%、0.02%;细胞学异常总检出率在EC(+)/MSC(+)组最高(7.82%),其次是EC(+)or MSC(+)组(5.21%),EC(-)/MSC(-)组检出率最低(1.28%),差异具有统计学意义(P<0.01)。EC(+)/MSC(+)组液基标本满意率(细胞量>40%)达89.77%,EC(+)or MSC(+)组次之(77.67%),EC(-)/MSC(-)组为70.42%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论液基细胞学检查标本中颈管细胞及化生细胞存在与否对液基标本质量和宫颈细胞学异常的总检出率有影响。

呼吸性酸碱失衡家兔肾脏内髓集合管细胞单层H^+/K^+交换功能及cH-K-ATP酶mRNA表达的实验研究

为了研究呼吸性酸碱失衡时内髓集合管 (IMCD)细胞病理生理学改变 ,分别以 3%CO2 和 10 %CO2 模拟慢性呼碱和慢性呼酸家兔肾脏IMCD细胞培养模型 ,对照组用 5 %CO2 。荧光探针法测定IMCD细胞H+ /K+ 交换功能 ,原位杂交和RT PCR检测IMCD细胞cH K ATP酶mRNA表达。结果显示 ,呼酸组H+ /K+ 交换显著高于对照组 (P <0 0 5 ) ,呼酸组cH K ATP酶mRNA原位杂交积分光密度和RT PCR积分光密度比值均非常显著地高于对照组 (P <0 0 1) ;而这三项指标 ,对照组与呼碱组之间差异均无显著性意义 (P >0 0 5 )。提示慢性呼酸显著增加IMCD细胞H+ /K+ 交换和cH K ATP酶mRNA表达 ,慢性呼碱有抑制和下调趋势 ,但差异无显著性意义 。

高糖对人肾近端小管细胞TGF-β mRNA表达的影响

目的 观察高糖对人近端肾小管细胞 (HPTC)转化生化因子 (TGF β)mRNA表达的影响以及血管紧张素Ⅱ (ATⅡ )受体 1拮抗剂Irbesartan(Irb)对其干预作用。方法 无血清培养HPTC后 ,(1)用不同浓度葡萄糖 (5 5、2 2 2、30、4 0mmol/L)培养 4 8h ,(2 )用高糖 (2 2 2mmol/L)培养 6、12、2 4、4 8、72h ,(3)高糖培养液中加入不同浓度的Irb(10 -3 、10 -5、10 -7mol/L)作用 4 8h ;采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术测定HPTC表达TGF βmRNA的水平变化。 结果 高糖能促进HPTCTGF βmRNA的表达 ,且呈浓度和时间依赖性。Irb能部分降低高糖诱导HPTCTGF βmRNA的表达 ,且呈剂量依赖性。结论 高糖可刺激肾小管细胞表达TGF β增加 。

声敏剂联合超声聚焦刀治疗肝胆管细胞癌1例

1病案摘要 患者女性,40岁,澳大利亚人。2009年12月无明显诱因出现上腹部隐痛,B超发现肝内多发占位性病变,穿刺活检病理结果提示：中、高分化腺癌。CA199〉1200U/ml,CEA58μg/L,AFP 3μg/L。诊断为肝内胆管细胞癌。

肝细胞肝癌和肝胆管细胞癌的超声鉴别价值

目的探讨超声鉴别肝细胞肝癌和肝胆管细胞癌的应用价值。方法回顾性分析经手术病理证实的肝脏恶性肿瘤98例患者,临床表现为不同程度无诱因乏力、腹胀、右上腹隐痛不适或黄疸,应用彩色多普勒超声诊断仪,观测肝内胆管走行以及门静脉有无癌栓、腹腔有无积液和淋巴结肿大等,形态、大小、位置、内部及边缘回声,肿瘤的边界及包膜,彩色血流信号显示、以及肿块及周边血流动力学改变、门静脉血流、肝动脉血流改变等特征。结果肝细胞肝癌共77例,其诊断准确率为91%,彩色多普勒超声显示阻力指数大于0.75,肝动脉供血为主,肿块内部血供丰富;肝胆管细胞癌21例,诊断准确率为76%,超声表现为,肿块内部血供不丰富,肿块无明显边界,肝内不规则的不均匀低回声区,无包膜。肝细胞癌患者超声诊断率高于肝胆管细胞癌患者,肝细胞癌单发与多发差异并不明显,而肝胆管细胞癌主要以单发为主。肝细胞癌组合并甲胎蛋白升高、肝硬化以及HBs Ag升高显著高于肝胆管细胞癌组,而肝胆管细胞癌组合并结石以及化脓性感染的比例高于肝细胞癌组,两组差异具有统计学意义(P<0.05)。结论超声对肝细胞肝癌和肝胆管细胞癌的诊断准确率高,是诊断和鉴别诊断肝癌的重要技术。