糖基化簇蛋白在冠状动脉疾病中的研究进展

冠状动脉疾病是全球性的健康问题,临床上对降低冠状动脉疾病发病率和死亡率的手段有限。簇蛋白作为糖基化蛋白,以不同形式的糖基化变体参与冠状动脉疾病相关的炎症、氧化应激、补体反应、细胞凋亡等机制的调节,协调多种细胞因子发挥心血管相关作用。在冠状动脉疾病及相关疾病的发生发展中,血清及不同组织细胞内糖基化簇蛋白的水平及糖基化程度发生改变。了解冠状动脉疾病中糖基化簇蛋白的作用,有助于揭示疾病发展的病理机制,干预不同病理机制下簇蛋白糖基化过程,可能为未来干预治疗提供新的靶点。

2型糖尿病与簇蛋白基因关联的初步研究

目的探讨2型糖尿病(T2DM)与簇蛋白(Glu)基因多态性的关联。方法聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)和DNA测序技术分析62例T2DM患者及60例正常对照者的Glu基因外显子2和外显子5基因多态性。结果Glu基因外显子2发现1个多态位点:1963(+A);外显子5发现3个多态位点:(1)7476(-A),(2)7534(-C),(3)7521C→T。结论Glu基因外显子2和外显子5多态性在2型糖尿病组和正常对照组多态性位点基因频率分布差异有统计学意义。因此,Clu基因外显子2和外显子5多态性可能与T2DM易感性有关联。

簇蛋白在前列腺上皮细胞凋亡中的表达和作用

目的探讨簇蛋白在前列腺上皮细胞凋亡过程中的表达和作用,及与转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)的关系。方法取10只实验犬,分别于去势前及去势后近期(<15d)和去势后远期(>15d)取前列腺组织制成石蜡切片,通过免疫组织化学检测前列腺组织中簇蛋白的表达及其表达部位,同时检测TGF-β1的表达。结果去势后近期(<15d)与去势前的簇蛋白表达有显著性的差异,去势后远期(>15d)与去势前簇蛋白的表达没有显著性差异;TGF-β1的表达也是如此。结论簇蛋白的表达与前列腺上皮细胞凋亡有关,和TGF-β1表达存在一定的相关性。

分泌型簇蛋白在肺动脉高压大鼠中的表达变化

目的探讨分泌型簇蛋白(secretory clusterin,sCLU)在野百合碱(monocrotaline,MCT)诱导肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)大鼠肺组织和血浆中的表达变化。方法 30只♂Sprague Dawley(SD)大鼠随机分为对照组(n=6)和MCT组(n=24),MCT组给予腹腔注射60 mg·kg-1MCT,对照组(n=6)注射同体积的生理盐水。分别检测注射MCT后1、2、3、4周大鼠肺组织中sCLU的mRNA和蛋白质水平的表达变化、sCLU在肺血管中的定位情况及血浆中sCLU浓度的变化。结果 sCLU的mRNA和蛋白表达在MCT组大鼠肺组织中呈时间依赖性的明显升高,并且其主要定位于重构肺小动脉的胞质及细胞外基质中;sCLU的血浆浓度随PAH的进展而逐渐升高,且其与肺血流动力学指标及右室肥厚指数均呈正相关。结论 sCLU在MCT诱导PAH大鼠的肺组织和血浆中表达明显升高,它可能在肺血管重构过程中发挥着重要的作用,并可能是反应PAH严重程度的生物标志物。

关于簇蛋白(clusterin)和前列腺干细胞功能的关系研究

目的明确簇蛋白(clusterin)和前列腺干细胞功能的关系。方法取10只实验犬,分别于去势前及去势后近期(<15d)、去势后远期(>15d)取前列腺组织制成石蜡切片。通过双标免疫组化检测前列腺组织中clusterin的表达及其表达部位。结果去势前后clusterin在前列腺基底细胞中的表达没有显著性的差异。结论Clusterin在前列腺基底细胞中不存在表达。

血清维生素D、糖类抗原125及高迁移率簇蛋白B1水平与子宫内膜异位症患者临床分期的相关性分析

目的探讨血清维生素D(VitD)、糖类抗原125(CA125)及高迁移率簇蛋白B1(HMGB1)水平变化与子宫内膜异位症(EMS)的关系。方法选取2018年12月至2019年12月我院收治的70例EMS患者作为研究对象(观察组),并纳入同期40例健康体检者为对照组。比较两组基线资料及VitD、CA125、HMGB1水平差异,评估不同病理类型、不同R-AFS分期EMS患者血清VitD、CA125、HMGB1表达差异,ROC曲线分析三个检测指标评估EMS患者临床分期的价值。结果观察组VitD低于对照组,CA125、HMGB1高于对照组(P<0.05);腹膜型、混合型VitD、CA125、HMGB1水平比较差异无统计学意义(P>0.05);卵巢型CA125、HMGB1水平高于腹膜型、混合型(P<0.05),VitD水平低于腹膜型、混合型(P<0.05);观察组不同分期VitD水平比较Ⅳ期<Ⅲ期<Ⅰ~Ⅱ期(P<0.05),CA125、HMGB1水平比较Ⅳ期>Ⅲ期>Ⅰ~Ⅱ期(P<0.05);相关分析VitD与R-AFS分期呈负相关(P<0.05),CA125、HMGB1均与R-AFS分期呈正相关(P<0.05);ROC曲线VitD、CA125、HMGB1均是评估EMD临床分期的有效指标(P<0.05),三项指标并联评估具有更高评估效能。结论血清VitD、CA125、HMGB1与EMS发生发展关系密切,监测其水平变化对临床诊治有积极意义。

尼美舒利辅助全膝置换术治疗膝骨关节炎的疗效及对高迁移率簇蛋白B1、钙结合蛋白(S100A12)的短期影响

目的探讨尼美舒利辅助全膝置换术治疗膝骨关节炎的治疗效果及其对病人关节液高迁移率簇蛋白B1(HMGB1)、钙结合蛋白S100A12的影响。方法选取2016年2月至2018年11月在天门市第一人民医院接受治疗的96例膝骨关节炎病人作为研究对象,应用随机数字表法分为对照组48例和联合组48例。两组病人均行人工全膝关节置换术治疗,联合组病人同时给予尼美舒利片口服,0.1克/次,2次/天。评价并比较两组病人的治疗效果和治疗前后的膝关节美国特种外科医院功能评分(HSS)、关节活动度、视觉模拟评分(VAS),检测并比较两组病人治疗前后血清白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素1(IL-6)、C反应蛋白(CRP)及关节液HMGB1、S100A12水平变化情况。结果术后末次随访评价两组病人的疗效,对照组治疗总有效率为79.17%(38/48),联合组为93.75%(45/48),联合组治疗总有效率显著高于对照组(P<0.05);治疗前两组病人膝关节VAS评分、膝关节HSS评分、膝关节活动度三项指标比较均差异无统计学意义(P>0.05),治疗后相比手术前,两组病人的膝关节HSS评分显著升高,膝关节活动度显著增加,VAS评分显著减小,且治疗后联合组与对照组膝关节三项指标比较均差异有统计学意义[(93.05±7.20)比(82.63±7.96)分,(2.48±0.51)比(4.34±0.85)分,(107.62±8.80)°比(102.82±10.39)°](P<0.05);治疗前两组病人的血清IL-1、IL-6、CRP和关节液HMGB1、S100A12比较均差异有统计学意义(P>0.05),治疗后血清IL-1、IL-6、CRP和关节液HMGB1、S100A12较治疗前均显著降低,且治疗后联合组与对照组血清炎性指标和关节液HMGB1、S100A12比较差异有统计学意义[(73.39±8.95)比(89.74±9.82)ng/L,(109.65±26.33)比(173.40±33.71)ng/L,(8.72±4.46)比(14.50±7.72)mg/L,(3.85±1.16)比(5.33±1.97)ρg/mL,(8.26±4.12)比(11.09±5.88)ng/mL](P<0.05)。结论尼美舒利辅助全膝关节置换术治疗膝骨关节炎可进一步提高手术治疗的疗效,有助于显著改善病人的临床症状和膝关节功能,降低血清炎性因子水平和关节液HMGB1、S100A12水平,关节液HMGB1、S100A12检测可为膝骨关节炎的临床治疗提供参考。

铁硫簇结合蛋白1的磁感应能力

目的探究铁硫簇结合蛋白1(ISCA1)磁场刺激后对细胞钙内流的影响。方法(1)制备携带ISCA1基因的质粒、携带Magneto 2.0序列的质粒和空载质粒,且3种质粒均携带mCherry基因,包装成慢病毒感染HEK293A细胞,荧光显微镜观察慢病毒感染效率。(2)免疫共沉淀技术检测ISCA1与隐花色素1(CRY1)和CRY2蛋白之间的结合。(3)在磁场(40 mT,0.1 Hz,90%占空比)条件下,活细胞钙成像技术检测高表达ISCA1或Magneto 2.0细胞的钙内流。结果(1)在HEK293A细胞中观察到红色荧光,表明慢病毒转染成功。(2)外源ISCA1蛋白与内源CRY1或CRY2蛋白不结合。(3)与加磁前相比,加磁后Magneto 2.0组细胞的绿色荧光强度增加(1.8±0.5)倍(P<0.05),即发生显著的钙内流;而ISCA1组及细胞对照组细胞的绿色荧光强度与加磁前相比无显著差异。结论外源高表达ISCA1的细胞在此磁场条件刺激后未引起细胞钙内流,无明显磁感应性。

微波辅助快速合成卵清蛋白金纳米簇检测苦味酸

本文采用微波加热法快速合成了卵清蛋白金纳米簇荧光探针(OVA-Au NCs)并应用于检测苦味酸(PA)。该探针在350 nm波长激发下,能发射红色荧光,最大发射荧光峰为680 nm,Stokes位移高达330 nm,可有效消除共振散射光的干扰。该合成方法与水热法相比,步骤简单快速,仅用50 s即可完成。由于PA的吸收光谱与OVA-Au NCs的激发光谱有较大范围的重叠,基于内滤效应(IFE) PA可选择性猝灭OVA-Au NCs的荧光,据此建立了检测苦味酸的新方法。在最佳实验条件下,在20~240μmol/L范围内,检测体系的荧光猝灭效率ΔF/F0与PA的浓度具有良好的线性关系,r为0.9985,检测限为6.4μmol/L。该方法简便、快速、准确,易于实现实时监测。

大豆蛋白金纳米簇“关—开”型荧光探针检测炭疽杆菌生物标志物DPA

炭疽杆菌是高致病性病原微生物,引起的炭疽病在我国属于乙类传染病,因此建立操作简便、灵敏准确的炭疽杆菌检测方法对预防和控制炭疽传播,维护公共卫生安全至关重要。该研究创新性地提出以绿色材料大豆蛋白为保护剂和还原剂,采用微波加热法合成了一种具有强烈红色荧光发射的大豆蛋白金纳米簇(SPI-AuNCs)。采用TEM、 UV-Vis、 FL、 XPS、 FTIR等方法表征了SPI-AuNCs的成功合成和部分特殊性能。结果表明SPI-AuNCs呈球形,粒径大小在1.8~3.2 nm范围内,平均粒径为2.65 nm,在500~550 nm范围内未出现表面等离子体共振峰;SPI-AuNCs的最大激发波长为370 nm,最大发射波长为680 nm。SPI-AuNCs的表面官能团主要有—NH、—COOH、—OH、—SH等官能团,元素的组成主要包括C、 N、 O、 S、 Au元素。根据Cu^(2+)与SPI-AuNCs表面基团通过配位作用形成非荧光复合物,使荧光猝灭;而2,6-吡啶二羧酸(DPA)与Cu^(2+)具有更高的亲和力,可将Cu^(2+)从SPI-AuNCs表面竞争下来,使荧光恢复,据此建立了一种荧光“关-开”策略检测DPA的新方法。在最佳实验条件下,荧光恢复率(ΔF/F_(1))与DPA的浓度在1.15~70.0μmol·L^(-1)范围内呈良好的线性关系,线性方程为ΔF/F_(1)=0.011c+0.131,相关系数r=0.991,方法检出限为0.34μmol·L^(-1)。同时,通过加标回收实验研究了湖水和牛奶样品中DPA,得到加标回收率在97.3%~103.6%,表明了该方法在环境和食品样本DPA的检测中具有很大的应用潜力,可以为环境监测和食品安全提供方法学支持。

磷酸弗林酸性簇分选蛋白2对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥大的影响及其机制

目的探究磷酸弗林酸性簇分选蛋白2(PACS-2)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌肥大的影响及其机制。方法剪取并消化出生1~2 d的SD大鼠乳鼠的心脏组织,采用差速贴壁法获取乳鼠心肌细胞(NRCMs),原代培养24 h。以浓度为1.5μmol/L的AngⅡ处理NRCMs 0、3、6、12、24 h,采用Western blot方法检测细胞中FUN14域蛋白1(FUNDC1)、PACS-2、三磷酸肌醇受体蛋白(IP3R)的表达水平,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测细胞中心钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)mRNA的表达水平。将NRCMs分为A~C组,A组使用无血清培养基培养,B、C组分别转染si-NC和si-PACS-2,采用Western blot方法检测各组细胞中PACS-2蛋白的表达水平。将NRCMs分为D~G组,D组使用无血清培养基培养,E组以浓度0.15μmol/L的AngⅡ培养,F、G组分别转染si-NC、si-PACS-2后再以浓度0.15μmol/L的AngⅡ培养,采用TRITC-鬼笔环肽染色技术检测各组心肌细胞表面积,RT-qPCR检测各组细胞ANP、BNP、β-MHC mRNA的表达水平,以Fluo-4,AM探针检测各组细胞胞质Ca^(2+)的水平。将NRCMs分为H~K组,H组使用无血清培养基培养,I、J组分别转染si-NC、si-PACS-2,K组转染si-PACS-2并且以浓度1μmol/L的钙调蛋白(CaM)拮抗剂处理后,采用RT-qPCR方法检测各组细胞ANP、BNP、β-MHC mRNA的表达水平。结果以浓度1.5μmol/L的AngⅡ处理NRCMs 0、3、6、12、24 h,NRCMs中ANP、BNP、β-MHC mRNA的表达水平呈时间依赖性上调(F=25.73~58.30,P<0.05),并且处理第24小时时相较于第0小时时均显著上调(t=5.35~37.50,P<0.05)。以浓度1.5μmol/L的AngⅡ处理NRCMs 0、3、6、12、24 h,NRCMs中IP3R、PACS-2以及FUNDC1蛋白的表达水平均呈时间依赖性下调(F=5.37~9.07,P<0.05),并且处理第24小时时相较于第0小时时显著下调(t=6.55~7.42,P<0.05)。与B组相比,C组NRCMs中PACS-2蛋白的表达水平显著下调(t=5.92,P<0.05)。与F组相比,G组NRCMs中心肌细胞表面积增大,ANP、BNP、β-MHC mRNA的表达水平及胞质Ca^(2+)水平均上调(t=3.50~26.60,P<0.05)。与J组相比,K组NRCMs中ANP、BNP、β-MHC mRNA表达水平均显著下调(t=3.27~5.13,P<0.05)。结论敲低PACS-2可增加NRCMs中胞质Ca^(^(2+))水平,并且可能以Ca^(^(2+))-CaM依赖的方式加重AngⅡ诱导的心肌肥大的发生。

参与丝状真菌次级代谢Zn(Ⅱ)2Cys6锌簇蛋白转录因子的生物信息学分析

本研究根据在GenBank中已登录的扩展青霉(Penicillium expansum)中棒曲霉素簇转录因子PePatL、棒曲霉菌(Aspergillus clavatus)中棒曲霉素簇转录因子PatL、构巢曲霉(A. nidulans)中柄曲霉素转录因子AFLR、黄曲霉(A. flavus)中黄曲霉毒素转录因子AFLR、长毛柄孢壳菌(Podospora comata)中黑色素转录因子Cmr1p、轮状镰刀霉菌(Fusarium verticillioides)中富马菌素转录因子Fum21p、烟曲霉菌(As-pergillus fumigatus)中神经胶质毒素转录因子GliZ、紫红曲霉(Monascus purpureus)中橘霉素转录因子CtnR等8个参与丝状真菌次级代谢的Zn(Ⅱ)2Cys6锌簇蛋白转录因子,应用生物信息学软件预测了其保守结构域、疏水性、蛋白跨膜、亚细胞定位、二级结构、三级结构和蛋白相互作用网络等。结果显示:它们均具有保守区域为CX2CX6CX6CX2CX6C的锌指结构,且N-端都存在保守的GAL4域,富含丝氨酸(Ser),无明显跨膜结构域,无信号肽,为定位于细胞核的亲水性不稳定蛋白,属于非分泌型蛋白。蛋白序列在多个氨基酸位点均存在不同程度的磷酸化,其中丝氨酸发生磷酸化程度相对最高,在不同位置的磷酸化水平也不同。它们的二级结构均主要以无规则卷曲为主,三级结构也较为相似。蛋白相互作用网络预测8个转录因子的活性可以通过与其他全局性转录因子或蛋白间的相互作用进行调节。本研究的结果将为进一步研究丝状真菌次级代谢转录因子在次级代谢产物生物合成过程中的生物学功能提供一定的基础。

电离辐射对不同放射敏感性细胞中高迁移率簇蛋白B1的诱导表达作用

目的 探讨电离辐射对已建立的宫颈癌放射抗拒细胞对比模型中高迁移率簇蛋白B1（HMGB1）和mRNA诱导表达的差异性，分析HMGB1对宫颈癌放射敏感性调控的可能性。方法人宫颈癌细胞系HeLa重复照射12次后，传代培养调整细胞状态至细胞增殖稳定，筛选得抗拒细胞系HeLaR。以2、5、10 Gy X射线分别照射亲代HeLa和HeLaR细胞，于照射后0、0.5、2、4、6、12、18、24、36、48 h收集细胞，提取蛋白质和RNA，采用Western blot和实时荧光定量PCR法分别检测样本中HMGB1蛋白和mRNA的表达情况。结果 在蛋白水平，2、5、10 Gy X射线照射后，HeLaR细胞在48 h内均表现为HMGB1表达量下降，在48 h达到未照射水平，后有增加趋势，与照射后0 h比较，2、5、10 Gy照射后6-36 h各时间点，差异具有统计学意义（t=3.574-9.754，P 〈 0.05）；相反，HeLa细胞在照射后6 h，其HMGB1表达逐渐增多，尤其在5和10 Gy表现明显，与照射后0 h比较，2 Gy照射后6、12、48 h（t=3.945-4.864，P 〈 0.05）、5 Gy照射后6、36、48 h（t=-2.875-3.295，P 〈 0.05）及10 Gy照射后36、48 h（t=-4.480、-4.517，P 〈 0.05），差异具有统计学意义。在mRNA水平其趋势与蛋白水平基本一致。结论 不同剂量X射线照射后可诱导人宫颈癌细胞中HMGB1的表达变化，且其变化在人宫颈癌放射敏感细胞及放射抗拒细胞中不同。HMGB1可能参与人宫颈癌放射抗拒机制。

隐花色素蛋白和铁硫簇蛋白相互作用及其在褐飞虱发育与生殖中的作用

【目的】在真核生物中验证隐花色素蛋白(Cryptochrome)/铁硫簇蛋白(Iron-sulfur cluster assembly1)的相互作用,研究2种蛋白在褐飞虱Nilaparvata lugens发育和生殖过程中的作用,为二者在磁感受机制中的协同作用及磁场对昆虫生理状态的调控机制提供依据和新的研究方向。【方法】通过酵母双杂交系统对褐飞虱Ⅰ型隐花色素蛋白/Ⅱ隐花色素蛋白与铁硫簇蛋白的相互作用进行验证。在褐飞虱3龄若虫和羽化第1天成虫中建立Ⅰ型隐花色素蛋白和铁硫簇蛋白基因RNAi(RNA interference)沉默模型,并采用RT-qPCR检测2个基因沉默效率,统计沉默虫体的若虫历期和产卵量。【结果】褐飞虱Ⅰ型隐花色素蛋白与铁硫簇蛋白存在相互作用,而Ⅱ隐花色素蛋白与铁硫簇蛋白不存在相互作用。褐飞虱3龄若虫和羽化第1天成虫中成功建立Ⅰ型隐花色素蛋白和铁硫簇蛋白基因RNAi沉默模型,在注射dsRNA后第2天、第4天和第6天时,2个基因的沉默效率均能达到70%以上。Ⅰ型隐花色素蛋白和铁硫簇蛋白基因沉默虫体的若虫历期无明显变化,但是产卵量受到显著性抑制。【结论】褐飞虱Ⅰ型隐花色素蛋白和铁硫簇蛋白存在相互作用,二者在褐飞虱生殖过程中发挥重要作用。

巴西橡胶树铁硫簇支架蛋白cDNA的克隆与分析

"死皮"是指橡胶树(Hevea brasiliensis)产排胶过程中出现的一种割线症状,主要表现为割线局部或全部不排胶。为揭示"死皮"发生的分子机理,本课题组构建了死皮植株与健康植株的差减文库,从中筛选到一条在死皮植株中下调表达的基因片段,其编码的蛋白与铁硫簇支架蛋白的相似性非常高。为深入研究ISU在橡胶树"死皮"中的生物学功能,本研究对其cDNA序列进行了克隆和分析。通过ESTs序列拼接和RT-PCR,获得一条532 bp的cDNA序列(命名为HbISU1,GenBank登陆号为HM640242),该序列包含一完整的开放读码框,编码166个氨基酸,理论分子量为17.92 ku,等电点为8.99。同源序列比对表明,铁硫簇支架蛋白在不同生物中非常保守,HbISU1与蓖麻(Ricinus communis)、拟南芥(Arabidopsis thaliana)、水稻(Oryza sativa)、莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)中相关蛋白的相似性都在75%以上,与大肠杆菌(Escherichia coli)ISCU的相似性也超过50%。HbISU1含有一个IscU和NifU类蛋白所特有的保守结构域,线粒体定位,无跨膜结构域,可能是一个线粒体基质蛋白。

排除视网膜特异性表达簇样蛋白1基因变异与中国高度近视人群的相关性

目的 筛查视网膜特异性表达簇样蛋白 1( clusterin- like protein 1,CL UL 1)基因编码区域变异与中国高度近视人群的相关性。方法 采用 PCR- SSCP检测 2 0 4例中国人高度近视先证者 CL U L1基因所有编码外显子及两侧序列有无突变 ;对有突变的外显子区域进行克隆测序。结果 仅发现 1例患者在 CL U L1基因外显子 2的密码子 10第 3个核苷酸 GT G→ GT T杂合同义突变 ,没有氨基酸的改变 ( Val10 Val)。CL UL1基因其余外显子无突变和多态现象。结论 初步排除位于 18p11.3D18S6 3～ D18S5 2 0 .8c M范围内视网膜特异表达的 CL U L 1基因与中国高度近视人群的相关性 ;CL UL

桑黄Zn(Ⅱ)2Cys6锌簇蛋白转录因子及其在不同碳氮源条件下的表达

Zn(Ⅱ)2Cys6锌簇蛋白转录因子(C6zinc)在真菌次生代谢产物合成中发挥重要作用。本研究首先利用本地BLAST,从桑黄Sanghuangporussanghuang全基因组中获得Zn(Ⅱ)2Cys6锌簇蛋白转录因子编码基因,并利用生物信息学手段分析编码蛋白保守结构域、一级结构及二级结构,构建蛋白系统发育树,最后利用半定量PCR对它们在不同碳源和氮源培养条件下的表达情况进行检测。结果显示:从桑黄基因组中分析获得的11个Zn(Ⅱ)2Cys6锌簇蛋白均具有Cy6型锌指基序,属于GAL4型锌簇蛋白转录因子;它们均为不稳定亲水性蛋白,具磷酸化修饰位点,糖基化修饰位点较少或没有,定位于细胞核中;其二级结构主要以无规卷曲和α螺旋为主;系统发育树分析结果显示,桑黄Zn(Ⅱ)2Cys6锌簇蛋白分为2个大分支,其中Ⅰ类分支转录因子的保守结构域分布于蛋白N-端,Ⅱ类分支转录因子的保守结构域则分布于蛋白C-端;11个桑黄Zn(Ⅱ)2Cys6锌簇蛋白转录因子在不同培养基培养的菌丝体中呈现差异化表达,其中,肌醇培养基和乳糖培养基能够有效促进大部分锌簇蛋白转录因子的表达;另外,基因簇分析显示桑黄锌簇蛋白SHCZ4可能是NRPS-PKS杂合基因簇体系的途经特异性转录因子。该结果将为桑黄次生代谢产物合成调控相关转录因子的研究以及潜在次生代谢相关基因簇的挖掘提供参考依据。

阻断细胞外高迁移率簇蛋白B1抑制阿霉素诱导的小鼠心肌损伤

探讨阻断细胞外高迁移率簇蛋白B1(HMGB1)功能对阿霉素诱导型心肌损伤的预防作用及其机制。HMGB1阻断剂甘草甜素于阿霉素造模前1 h及造模后每天按10 mg/只的剂量腹腔注射,第14天结束实验。利用超声心动和血流动力学检测心脏功能,免疫组化和天狼猩红染色观察心脏局部炎症及胶原沉积情况,免疫共沉淀和免疫共聚焦显微镜分析HMGB1与TLR2相互作用,Immunoblot检测HMGB1、MyD88、p65NF-κB及phospho-p65NF-κB蛋白含量。结果表明,与正常对照组相比,阿霉素处理引起HMGB1表达明显增加。阻断HMGB1抑制阿霉素引起的心功能失调、炎症反应及心肌纤维化。甘草甜素抑制HMGB1与TLR2相互作用以及TLR2下游信号激活。以上结果提示,阻断HMGB1通过抑制TLR2信号通路,可以改善阿霉素诱导的心肌损伤。

金针菇三个锌簇转录因子鉴定与表达分析

采用生物信息学方法对金针菇(Flammulina filiformis)3个锌簇转录因子的基本性质、锌簇域和分子进化进行分析,并利用荧光定量PCR研究其在菌丝、原基、菌柄和菌盖中的表达模式。结果表明,Fvzcp1、Fvzcp2和Fvzcp3分布在不同染色体片段重叠群,分别含有9、14、10个外显子,编码序列(codingsequence,CDS)长度分别为2553、2634、1743bp,对应蛋白质FVZCP1、FVZCP2和FVZCP3的相对分子质量分别为93763.19、98333.89、64251.26,理论等电点分别为7.10、6.54、6.64,均为不稳定的疏水性蛋白质,亚细胞定位于细胞核;FVZCP1、FVZCP2和FVZCP3均具有典型的锌簇域,且其锌簇域类型不同。就表达量而言,与菌丝相比,Fvzcp1在原基和菌盖中较高,Fvzcp2在原基和菌柄中较高,Fvzcp3仅在菌柄中较高;3个基因在菌柄伸长区的表达量均显著高于非伸长区。