米曲霉FleA基因的原核表达及纯化

目的研究米曲霉FleA基因克隆菌株的构建及米曲霉凝集素(Aspergillus oryzae lectin, AOL)蛋白表达。方法培养米曲霉RIB40,TRIzol法提取米曲霉RNA,用反转录试剂盒合成FleA全基因,设计引物扩增FleA基因,并将此片段与PJET克隆质粒连接构建克隆菌株,经双酶切筛选出阳性克隆菌株送去测序,将序列正确的克隆菌与表达载体pET-28a(+)分别经过双酶切后连接,转化到宿主菌E.coil BL21,IPTG诱导AOL目的蛋白表达,SDS-PAGE检测分析。结果 PCR成功扩增获得FleA基因,大小约950 bp,成功连接至PJET克隆载体后,经双酶切回收后又与pET-28a(+)成功连接,经过IPTG诱导后SDS-PAGE检测结果显示目的基因成功表达。结论该研究成功构建了米曲霉FleA基因,获得了表达蛋白,为今后结构和功能研究奠定了一定的基础。