低盐固态工艺条件下米曲霉3.042和米曲霉RIB40酿造酱油发酵性能的比较

探讨了在低盐固态酱油酿造工艺下,我国广泛应用的米曲霉3.042和日本的米曲霉RIB40在发酵性能方面的差异。对比了两株米曲霉种曲孢子数、大曲制备工艺、发酵过程中理化指标、有机酸含量以及酱油风味物质方面的不同。研究发现米曲霉3.042具有产孢快、生长迅速的特点。通过跟踪测定蛋白酶活、纤维素酶活和糖化酶活,确定了两株米曲霉的最佳收曲时间均为36h。同时发现米曲霉RIB40的糖化酶活很高(3208.939U/g干基,36h)。理化指标的变化情况表明:采用两株米曲霉制曲酿造酱油均达到了特级酱油标准。在有机酸方面,米曲霉RIB40酱醅的乳酸和乙酸的含量具有一定优势,这有利于酱油良好口感的形成。风味物质的检测结果表明:米曲霉RIB40酿造酱油中醇类物质具有优势,而米曲霉3.042在酯类物质方面具有优势。在实际生产中,可以根据产品需要选择合适的菌株。

米曲霉(Aspergillus oryzae)RIB40全长cDNA文库的构建

【目的】构建米曲霉RIB40的全长cDNA表达文库,为米曲霉功能基因的开发以及次生代谢产物合成途径相关基因的筛选与克隆奠定基础。【方法】采用RNAiso法从米曲霉RIB40菌体中提取总RNA。选用PolyATract mRNA Isolation System Ⅲ试剂盒分离纯化mRNA。以5μg mRNA为模板,按照ZAP-cDNA Synthesis Kit试剂盒说明书要求合成单、双链cDNA,使用CHROMA SPIN-400柱离心层析纯化后连接于Uni-ZAP XR表达载体上,体外包装后转染Escherichia coli XL1-Blue宿主菌。【结果】构建了米曲霉RIB40的全长cDNA文库,初级文库滴度约为2.96×106 CFU/mL,重组率约为97.8%,插入片段平均长度大于1.5 kb,达到一个高质量cDNA文库的要求。文库扩增后,滴度达到3.4×1010 CFU/mL。【结论】米曲霉RIB40全长cDNA表达文库的成功构建,将会对米曲霉基础生物学研究及相关基因的筛选与克隆奠定基础。