米汤炮制天麻工艺的优化及抗炎作用

优选米汤制天麻的炮制工艺,并考察其对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的小胶质细胞(BV-2)炎症反应的作用。采用高效液相色谱法检测天麻提取物中天麻素、对羟基苯甲醇、巴利森苷E、巴利森苷B、巴利森苷C、巴利森苷A的含量,以六种成分含量为评价指标,以米汤与水体积比、煮制时间、干燥温度为单因素变量,在单因素的基础上,通过三个指标综合考虑,设计正交试验,优化米汤制天麻的制备工艺,并比较6种成分在不同炮制品中的含量。脂多糖诱导的神经炎症细胞模型,CCK-8法测定天麻炮制品提取物对BV2细胞存活率的影响;ELISA法检测细胞培养上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β的释放水平;Western blot法检测TLR4、MYD88、P65、INOS、COX-2、IL-1β蛋白的表达变化。结果表明,煮制时间和米汤与水体积比对试验结果有显著(P<0.05)影响,米汤制天麻的炮制工艺:米汤与水体积比为1:3,煮制25 min,75℃烘干。米汤制品中6种成分含量综合评分高于蒸制制品。天麻提取物对LPS诱导BV2细胞损伤具有不同程度的保护作用。与正常对照组比较,LPS组TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌显著上升(P<0.001),与LPS组,两种炮制品均可抑制TNF-α(P<0.05)、IL-1β(P<0.05,P<0.001)、IL-6(P<0.05,P<0.001)的释放。Western blot结果显示,与LPS组比较,两种炮制品可能显著抑制LPS诱导的TLR4/MYD88/NF-κB信号通路的激活,减少TLR4(P<0.01)、MYD88(P<0.01,P<0.05)、P65(P<0.01)、INOS(P<0.05)、COX-2(P<0.05,P<0.001)、IL-1β(P<0.001)蛋白的表达。优选的米汤制天麻工艺操作简便,稳定可行;天麻炮制品可能通过抑制TLR4/MYD88/NF-κB信号通路,而降低炎症因子的表达。