重组类丝状蛋白在大肠杆菌中的表达及其溶液态结构分析

利用基因重组技术表达了具有[(GVPGV)2GG(GAGAGS)3AS]n一级结构的类丝状蛋白质(BcEn),该蛋白是把源于弹性蛋白的氨基酸序列GVPGV插入到蚕丝蛋白的结晶序列GAGAGS中,以期利用该弹性片段来调控类丝状蛋白质材料高级结构的形成以及结晶程度,从而达到控制材料性能的目的。利用园二色CD光谱对BcEn在溶液状态下的结构进行了初步分析,结果显示在对BcEn具有良好溶解性的氟有机物水合六氟丙酮中,其结构的形成依赖于BcEn分子量的大小,分子量越大越易形成比较稳定的α-螺旋结构。

三角帆蚌类丝状基质蛋白基因silkmaxin的克隆及其在贝壳和珍珠生物矿化中的作用

贝壳基质蛋白指导了珍珠形成过程中碳酸钙的成核、晶体生长和晶型选择等关键 过程。为进一步研究珍珠形成的分子机理,本实验使用RACE-PCR技术克隆得到一个新 的贝壳基质蛋白基因,并命名为silkmaxin。组织表达分析和原位杂交分析表明,该蛋白 于外套膜缘膜部外上表皮组织特异性表达,证明silkmaxin基因所编码的蛋白属于珍珠层 基质蛋白。silkmaxin基质蛋白氨基酸序列富含甘氨酸(Gly,33.0%)和丝氨酸(Ser, 10.4%),蛋白结构由β-折叠构成,类似丝状蛋白结构。分析珍珠形成早期珍珠囊中该蛋 白基因的表达发现,silkmaxin基因在珍珠囊内碳酸钙沉积物从无序到有序的转变过程中 起了重要作用。通过RNA干扰实验可知,贝壳基质蛋白是珍珠层文石小片正常生长不可 缺少的因子,当silkmaxin基因表达被抑制,文石小片的成核、大小和形状均发生了改变。