矩阵热转移技术鉴定有机酸类代谢物的结合蛋白质

有机酸类代谢物在表观遗传、肿瘤发生和发展以及细胞内信号转导等方面发挥着重要作用,对这类代谢物在体内的结合蛋白质进行鉴定,将有助于从分子学层面理解和揭示它们的功能。本研究采用矩阵热转移技术(mTSA),在HeLa细胞裂解液中系统鉴定了3种有机酸类代谢物(琥珀酸、富马酸和乳酸)的结合蛋白质。首先,向细胞裂解液中加入一系列不同浓度的琥珀酸、富马酸或乳酸,在52℃下加热3 min,离心并收集上清蛋白质,进行酶解及后续质谱分析。在数据非依赖性采集(DIA)模式下,本研究在琥珀酸、富马酸和乳酸的mTSA实验中分别鉴定到5870、5744和5816个蛋白质;通过对蛋白质热稳定性的显著性差异值(p)和皮尔森相关系数平方值(R^(2))进行考察,该研究鉴定到了多个高可信度的有机酸类代谢物结合蛋白质。此外本研究发现,虽然富马酸和琥珀酸均能够与α-酮戊二酸依赖的双加氧酶(FTO)结合,但琥珀酸是FTO更强的竞争性抑制剂。除此之外,本研究还鉴定到了两个先前未曾报道过的乳酸结合蛋白质,即鸟氨酸转氨酶(OAT)和3-巯基丙酮酸硫转移酶(MPST),并通过溶剂诱导沉淀技术(SIP)和两种数据检验方法证明了其可信度;同时,OAT和MPST的发现有助于揭示乳酸在氨基酸合成和细胞内氧化还原平衡调节方面的重要作用。

高效液相色谱-串联质谱法测定鲤鱼中硝基呋喃类代谢物的不确定度评估

为应对自治区水产品中硝基呋喃类代谢物残留检测的能力验证工作,保证基于国标方法的科学准确。通过建立数学模型对鲤鱼中硝基呋喃类代谢物含量进行检测,同时对不确定度进行评估。结果表明在6类主要不确定来源分量当中,随机效应、标准溶液配制和加标回收为本实验不确定度的主要来源。经评定在K=2情况下鲤鱼中硝基呋喃类代谢物检测含量为:AHD(5.157±0.6310μg/kg),AMOZ(4.813±0.4877μg/kg),AOZ(5.165±0.6159μg/kg),SEM(4.974±0.7616μg/kg)。

基于轨道阱高分辨质谱技术建立水产品中硝基呋喃类代谢物的快速筛查方法

本文采用超高效液相色谱-四极杆/轨道阱高分辨质谱法,建立了水产品中4种硝基呋喃类代谢物的快速筛查方法,同时建立质谱数据库,摆脱标准品依赖,实现高通量筛查。硝基呋喃类代谢物在50℃下进行衍生化反应,以Hypersil GOLD色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.9μm)实现分离,采用全扫描自动触发二级扫描模式(Full MS/dd MS 2)对呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因和呋喃西林进行测定。方法的线性范围为1~100 ng/mL,相关系数大于0.99,检出限为0.5μg/kg,回收率在62.5%~113.3%,相对标准偏差在2.6%~13.5%。所建立方法前处理速度快、灵敏度高、重现性好,可用于水产品中硝基呋喃类代谢物的快速筛查。

超高效液相色谱串联质谱法测定海参中硝基呋喃类代谢物残留量

目的:建立一种快速、准确、高效的超高效液相色谱串联质谱检测海参中硝基呋喃类代谢物残留量的方法。方法:采用40℃水浴中超声1 h,45℃气浴中衍生5 h,pH值7.0~7.5条件进行样品前处理,以2 mmol·L^(-1)乙酸铵的0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,超高效液相色谱串联质谱测定。结果:4种硝基呋喃类代谢物在0.5~20.0 ng·mL^(-1)线性关系良好,加标平均回收率在97.3%~103.6%,方法检出限为0.5μg·kg^(-1),定量限为1.0μg·kg^(-1)。结论:该方法可用于市售海参中硝基呋喃类代谢物残留量的快速检测。

动物源性食品中硝基呋喃类代谢物残留量检测方法的验证

本文对《动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物残留量检测方法 高效液相色谱/串联质谱法》(GB/T 21311—2007)进行方法验证。结果表明,1-氨基-乙内酰脲、5-吗啉甲基-3-氨基-2-噁唑烷基酮、3-氨基-2-噁唑酮、氨基脲这4种硝基呋喃类代谢物在0.50~20.00 ng·mL^(-1)浓度范围内(内标浓度10 ng·mL^(-1))有良好的线性关系,相关系数> 0.99,平均回收率在98.6%~102.0%,相对标准偏差在0%~1.140%。该方法的灵敏度均满足标准方法中规定的要求。

高效液相色谱法检测水产品中硝基呋喃类代谢物残留量

建立了水产品中硝基呋喃类代谢物残留量测定的样品处理方法和高效液相色谱分析方法。样品经酸解、2-氯苯甲醛衍生后用乙酸乙酯萃取、SPE柱净化,经高效液相-紫外检测器测定。本方法4种硝基呋喃类代谢物的定量限均为1.0μg/kg,在5.0～500μg/L质量浓度范围内,4种硝基呋喃类代谢物的工作曲线均呈良好线性,在2个添加浓度水平的平均回收率为76%～102%,相对标准偏差均小于10%(n=6)。该方法适用于定性定量水产品中硝基呋喃类代谢物的残留分析。

高效液相色谱-串联质谱法检测水产品中硝基呋喃类代谢物的优化研究

研究了利用高效液相色谱-串联质谱法（LC—MS／MS）检测水产品中残留的5-吗啉甲基-3-氨基-2-嗯唑烷基酮（AMOZ）、氨基脲（SEM）、1-氨基-2-内酸脲（AHD）和3-氨基-2-噁唑烷基酮（AOZ）等4种硝基呋喃类代谢物，优化了前处理方法及液相色谱条件。硝基呋喃类代谢物经衍生化后，调节样品pH至7．0～7．5，加入8mL乙酸乙酯，离心并转移上清液，氮气吹干后，用乙腈-0．1％的甲酸水（5／95，V/V）溶液定容，4℃高速离心后上机测定。采用梯度洗脱法，4种代谢物在C18柱中分离良好。该法有效地提高硝基呋喃类代谢物的检测效率，且检测结果准确，适用于批量水产品的检测。

液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法快速测定水产品中硝基呋喃类代谢物

硝基呋喃类药物是人工合成的具有5-硝基呋喃基本结构的广谱抗菌药物,对光敏感,代谢快速,原药及其在动物体内残留的代谢产物有致畸、致突变和致癌的危险.出于安全性考虑,欧美等发达国家及我国先后颁布了禁止使用该类兽药的禁令.目前对硝基呋喃类代谢物的检测,

液相色谱串联电喷雾质谱检测中溶剂对硝基呋喃类代谢物响应的影响

通过对比不同溶剂对液相色谱串联电喷雾质谱检测硝基呋喃类代谢物灵敏度的影响,以筛选最佳的流动相和上机溶液。Q1扫描时,AHD在负离子模式下有最高的响应强度。正离子模式检测时,甲醇中添加0.1%的氨水,4种化合物均能获得令人满意的灵敏度。用液相色谱串联正电离电喷雾质谱检测时,以甲醇和0.1%的氨水作为流动相,上机溶液中也添加0.1%的氨水,灵敏度高,杂质干扰少,准确度好,能够较好地满足鱼、虾、蟹等复杂样品基质中痕量硝基呋喃类代谢物残留检测的需要。

液相色谱-串联质谱法测定贝类组织中硝基呋喃类代谢物残留量

建立了液相色谱-串联质谱法测定贝类产品中硝基呋喃类代谢物残留量的分析方法.贝类组织中残留的硝基呋喃类蛋白结合态代谢物在酸性条件下水解,用2-硝基苯甲醛衍生化,经乙酸乙酯液-液萃取、浓缩及基质分散固相萃取和超滤净化后,采用液相色谱串联质谱仪测定,以电喷雾离子源正离子扫描模式进行质谱分析,内标法定量.硝基呋喃类代谢物在0.5—20μg·L^(-1)范围内线性关系良好,相关系数R2>0.999.4种硝基呋喃类代谢物添加水平为1.00,2.50、10.0μg·kg^(-1)时,平均回收率在90.1%—99.5%之间,批内和批间变异系数均<15%.4种硝基呋喃类代谢物的检出限均为0.50μg·kg^(-1).本方法灵敏、高效、简单、重现性好,满足贝类产品中硝基呋喃类代谢物残留量的检测要求.

分散固相萃取净化-液相色谱-质谱联用测定水产苗种中硝基呋喃类代谢物残留量

建立分散固相萃取净化-液相色谱-质谱法测定水产苗种中氨基脲、5-甲基吗啉-3-氨基-2-噁唑烷基酮、3-氨基-2-噁唑烷基酮、1-氨基-2-内酰脲,4种硝基呋喃类代谢物残留量的方法。样品经甲醇-水(8:1,v/v)溶液洗涤后,盐酸溶液水解,以2-硝基苯甲醛作为衍生化试剂,乙酸乙酯萃取,浓缩,分散固相萃取净化,采用液相色谱-质谱仪、多反应监测扫描模式检测和同位素内标定量。4种硝基呋喃类代谢物在0.5~20 μg/L范围内线性相关系数大于0.997,检出限0.1 μg/kg,回收率90.5%~104.5%,相对标准偏差1.56%~8.08%。本方法灵敏、高效、简单、重复性好,满足硝基呋喃类代谢物的检测要求。

高效液相色谱-串联质谱法测定动物源性食品中硝基呋喃类代谢物残留量

依次用甲醇、乙醇和乙醚溶剂提取,使动物源性样品中呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃它酮、呋喃妥因等4种硝基呋喃类游离态代谢物进入提取液,而结合态代谢物保留在残渣中。在酸性条件下用2硝基苯甲醛分别衍生游离态和结合态代谢物,经乙酸乙酯提取浓缩后,用液相色谱-四极杆串联质谱仪定性,用同位素内标法定量。检出限均为0.3μg/kg。在0.3、1.0和5.0μg/kg3个浓度水平上进行加标回收试验,回收率为85.2%～112.5%,相对标准偏差均不大于6.3%(n=6)。

LC-MS-MS检测蜂花粉中硝基呋喃类代谢物

建立蜂花粉中硝基呋喃类代谢物液相色谱-串联质谱检测方法。样品经高氯酸酸化后,固相萃取净化、衍生、乙酸乙酯提取,串联质谱进样分析。在1.0、2.0、5.0μg/kg这3个添加水平下,硝基呋喃类代谢物的平均回收率范围为89.5%～100.9%,日内相对标准偏差小于10%,日间相对标准偏差小于15%。在0.5～20ng/mL范围内呈良好的线性(r>0.99),检测限为0.25μg/kg,定量限为1.0μg/kg。该检测方法简单,选择性好,抗干扰能力强,适用于蜂花粉中硝基呋喃类代谢物的分析确证。

HPLC-MS/MS技术在中华绒螯蟹硝基呋喃类代谢物残留量检测中的应用

建立了中华绒螯蟹中硝基呋喃类代谢物残留量的液相色谱—串联质谱检测方法.取均质后的中华绒螯蟹可食部分样品,用盐酸水解组织中蛋白结合代谢物,经2-硝基苯甲醛37℃过夜衍生化,调节pH值至约7.0～7.4后,用乙酸乙酯提取,正己烷净化.选用电喷雾离子源,在正离子、多反应监测方式模式下进行定性,以同位素内标法进行定量.方法的检出限为0.5μg.kg-1,工作曲线的线性范围为1.25～50.0μg.L-1.在添加浓度为0.5～10.0μg.kg-1的范围内,AMOZ、SEM、AHD和AOZ的回收率分别在92.8%～106%、84.5%～94.6%、80.6%～98.6%和88.4%～105%之间,相对标准偏差均小于10%.

液相色谱-串联质谱法检测水产品中硝基呋喃类代谢物

目的：建立硝基呋喃类药物（呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林和呋喃妥因）代谢物的液相色谱-串联质谱分析方法。方法：硝基呋喃类代谢物经过二硝基苯甲醛衍生化,用乙酸乙酯提取后经液相色谱分离,电喷雾串联质谱法进行检测。结果：4种硝基呋喃代谢物的定量线性范围均为1～50 ng/ml,线性关系良好（r〉0.99）,水产品中的定量检测限均为0.5μg/kg,回收率在88.0%～94.3%范围内,相对标准偏差在10.4%以下。结论：本法专属性强,灵敏度和准确度高,可作为分析水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的有效手段。

鸡蛋中硝基呋喃类代谢物残留的UPLC-MS/MS检测方法研究

为建立鸡蛋中硝基呋喃类代谢物（AOZ、AMOZ、AHD和SEM）残留检测的超高效液相色谱-串联质谱方法（UPLC-MS/MS）,采用内标法定量,样品在酸性条件下衍生化后,弱碱性条件下用乙酸乙酯提取后,用正己烷去除脂肪,高速离心去除蛋白质等杂质,上机测试。液相色谱条件：色谱柱为BEH C18（50 mm×2.1 mm,1.7μm）,流动相为甲醇＋10 mmol/L乙酸铵水溶液,梯度洗脱,流速为0.3m L/min,柱温为30℃,进样量为10μL。质谱条件：电喷雾离子源（ESI＋）,多反应监测（MRM）方式进行采集。结果表明：硝基呋喃类代谢物在0.5～20 ng/mL浓度范围内均呈现良好的线性关系,相关系数（R2）均大于0.990。鸡蛋中四种代谢物的检测限均为0.25 ng/g,定量限均为0.5 ng/g。在0.5、1和5 ng/g三个添加浓度平均回收率为79.1%～109.4%,批内和批间RSD均小于20%。该方法具有简便快捷、灵敏度高、定性准确等特点。

“类代谢物”作为药物库设计和选择的标准

目前药物筛选库受限于预测"类药物"或"类先导物"理想药动学和结构标码的生物物理性质。然而,近来调查表明,为了进入细胞,多数药物需要溶质载体以正常转运自然产生的中间代谢物,很多药物还可能发生相似的相互作用。人代谢物组日益全面的概述使人们可以对"类代谢物"概念进行评价。我们利用有关的化学信息学分子标码空间比较了已知药物和库化合物与天然代谢物(内源分子)的相似性,其中,已知药物比多数库化合物与这些内源分子更类似。

水产品中硝基呋喃类代谢物残留快速检测产品质量分析和评价

为推动现场快速检测产品在水产品药物残留监管领域的应用,对3种市售的用于检测水产品中3-氨基-2-恶唑烷酮(AOZ)、氨基脲(SEM)、3-氨基-5-吗琳代甲基-2-恶唑烷酮(AMOZ)、1-氨基-乙丙酰脲(AHD)4种硝基呋喃类代谢物残留的国产胶体金快速检测产品的假阳性率、假阴性率、检出率及稳定性等指标进行验证。验证结果显示,有1种产品能100%准确检测出84个鱼糜样品中是否残留AOZ、SEM、AMOZ、AHD,且2个不同批次产品的检测结果一致;另外2种产品出现假阳性结果,且2个不同批号间产品的稳定性有差异。快速检测产品作为质量安全监管工具,在投入使用前,有必要对其最低检出限、假阳性率、假阴性率、稳定性等参数进行验证。

固相萃取液相色谱串联质谱测定水产品中硝基呋喃类代谢物残留研究

建立了一种快速、灵敏、同时定性和定量的超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS)来测定水产品中4种硝基呋喃类代谢物(AMOZ、AHD、AOZ和SEM)残留。样品采用乙酸乙酯提取,正己烷脱脂,采用HLB固相萃取柱净化。色谱分离柱选用BEHC18(1.7μm,50mm×2.1mm)色谱柱,流动相选用酸化的乙酸铵水溶液/甲醇,0.2mL/min梯度洗脱。在电喷雾-多反应监测正离子模式下,进行定量定性分析。线性范围在0.5～200ng/mL之间,r2≥0.998。以标准加入法计算回收率和相对标准偏差,在2、20、100μg/kg3个添加水平,平均回收率在76.3%～90.3%之间,相对标准偏差低于15%,最低检测限和定量限分别为0.25μg/kg和0.5μg/kg。

超高效液相色谱-串联质谱法测定烤鳗中硝基呋喃类代谢物残留量

目的：建立用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS-MS）测定烤鳗中3-氨基-2-唑烷基酮（AOZ）、5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮（AMOZ）、氨基脲（SEM）和1-氨基-2-内酰脲（AHD）4种硝基呋喃类代谢物的定性、定量分析方法。方法：先用甲醇/水（1：1）混洗烤鳗肉组织,去掉大量杂质,用0.25 mol/L盐酸水解组织中蛋白结合代谢物,经2-硝基苯甲醛衍生化,乙酸乙酯提取后,采用电喷雾电离,正离子扫描,多反应监测（MRM）模式检测,内标法定量。结果：4种硝基呋喃代谢物的定量限均能达到0.5μg/kg。在0.5-10 ng/g浓度范围内,4种硝基呋喃类代谢物的工作曲线均呈良好线性,相关系数r〉0.99,回收率为77%-111%,相对标准偏差在7.52%-16.59%。结论：本方 法快速、简便、准确、灵敏度高且经济,适用于烤鳗中硝基呋喃类代谢物的确证和定量分析。