促红细胞生成素类似结构对大鼠心肌缺血损伤的保护作用及对心肌蛋白激酶丝氨酸/苏氨酸激酶表达的影响

目的研究促红细胞生成素类似结构[促红细胞生成素B螺旋结构表面缩氨酸(pHBP)]对大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤的影响及蛋白激酶丝氨酸/苏氨酸激酶(p44/p42 MAPK)表达。方法 80只大鼠随机分为四组:假手术组(n=20)、I/R组(n=20)、I/R+促红细胞生成素(rhEPO)组(n=20)和I/R+pHBP组(n=20)。采用垫扎球囊结扎冠状动脉方法制作心肌缺血再灌注动物模型,I/R+rhEPO组和I/R+pHBP组分别于缺血再灌注后5 min经尾静脉注射rhEPO(3000 U/kg)、pHBP(1μg/kg),I/R组及假手术组给予等体积生理盐水,检测血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量,采用TTC染色确定梗死面积。术后3、24 h,Western blot法检测细胞外信号调节的p44/p42 MAPK表达。结果与I/R组心肌梗死面积[(18.45±1.24)%]比较,I/R+rhEPO组[(12.32±1.27)%]、I/R+pHBP组[(11.64±2.32)%]心肌梗死面积下降,差异有统计学意义(P<0.05);与I/R组血清LDH[(3012.24±175.21)U/L]及CK-MB[(216.02±15.24)U/L]比较,I/R+rhEPO组和I/R+pHBP组的血清LDH及CK-MB[(2433.24±116.32)、(2511.12±98.72)、(128.16±17.52)、(121.31±21.43)U/L]均下降,差异有统计学意义(P<0.05);制模3 h,与I/R组比较,I/R+pHBP组p44/42 MAPK蛋白表达明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);制模24 h,与I/R组比较,I/R+rhEPO组p44/42 MAPK蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P>0.05)。结论 pHBP在大鼠心肌缺血损伤中具有心脏保护作用,其保护机制可能与其抑制心肌细胞凋亡有关。

类似结构物对筛选L-异亮氨酸育种是工业化稳产高产的关键

异亮氨酸氧肟酸(I le-Hx C6H14N2O2)是L-异亮氨酸类似结构物,化合物分子结构相类似。它具有抑制细胞生长作用,又是L-异亮氨生产菌的代谢产物。由于菌种本身的代谢调节作用,这些物质在生物体内的浓度过高时,就会抑制菌种继续积累反馈抑制,要育成生产目的氨基酸。

氯胺酮结构类似物的质谱特征研究

氯胺酮结构类似物属于苯环利定类新精神活性物质,具有与氯胺酮类似的镇痛和“分离麻醉”等作用。本文采用气相色谱-静电场轨道阱质谱(GC-Orbitrap-MS)法和超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-QTOF-MS)法分析氯胺酮及乙基去甲氯胺酮(NENK)、2-(3-甲氧基苯基)-2-乙氨基环己酮(MXE)、2-苯基-2-甲氨基环己酮(DCK)、氟胺酮(2-FDCK)、2-(乙氨基)-2-苯基环己-1-酮(2-oxo-PCE)、2-(甲氨基)-2-(邻甲苯基)环己-1-酮(2-MDCK)、2-(2-氟苯基)-2-(甲氨基)环己-1-酮(2-FXE)、2-(2-溴苯基)-2-(甲氨基)环己-1-酮(2-BDCK)、2-(乙氨基)-2-(噻吩-2-基)环己-1-酮(tiletamine)、2-(乙氨基)-2-(邻甲苯基)环己-1-酮(deoxymethoxetamine)等10种结构类似物,采集了电子轰击离子化(EI)和电喷雾离子化-碰撞诱导解离(ESI-CID)模式下的高分辨质谱信息,推测了各碎片离子的结构和裂解途径。氯胺酮结构类似物在EI模式下主要生成丢失CO、C_(2)H_(5)·、C_(3)H_(7)·、C_(4)H_(9)·、C5H_(11)·、C_(6)H_(13)·后的碎片离子;在ESI-CID模式下主要生成丢失H_(2)O、CH_(3)NH_(2)或C_(2)H_(5)NH_(2)、CO、C_(4)H_(6)、C_(2)H_(4)O后的碎片离子。本研究总结了氯胺酮结构类似物的质谱特征,可为鉴定该类物质和新的氯胺酮结构类似物提供参考。

食品中一种新型伐地那非结构类似物的筛查与定量测定

采用液相色谱-四极杆飞行时间高分辨质谱在压片糖果中发现一种与伐地那非结构类似的化合物。依据高分辨质谱碎片离子推测该伐地那非结构类似物的分子结构及裂解规律,结合红外光谱和核磁共振谱分析鉴定,确定该化合物为丙氧基伐地那非。高效液相色谱-串联质谱外标法定量分析表明,丙氧基伐地那非在1.0~100 ng/mL质量浓度范围内线性关系良好,相关系数(r^(2))为0.9992,方法检出限为0.02 mg/kg,定量下限为0.05 mg/kg,在压片糖果、保健酒及蜂蜜酱基质中3个加标水平下的平均回收率为76.5%~104%,相对标准偏差(RSD)为1.6%~5.1%。采用该方法测定实际样品,发现5批次糖果(含压片糖果)和3批次保健酒为阳性样品。该方法具有快速、准确、灵敏度高等优点,可作为非法添加伐地那非结构类似物的有效筛查方法。

1-甲基环丙烯及其结构类似物处理对寒富苹果贮藏品质的影响

研究1-甲基环丙烯(1-MCP)及其结构类似物1-戊基环丙烯(1-PentCP)和1-辛基环丙烯(1-OCP)在常温(20℃±1℃)条件下对寒富苹果果实生理及贮藏品质的影响。结果表明:与对照相比1-MCP及其结构类似物处理均不同程度抑制苹果贮藏期间的呼吸强度、乙烯释放量,保持苹果硬度,延缓酸度下降的速度,并且抑制果实软化相关酶纤维素酶和多聚半乳糖醛酸酶的活性。1-MCP及其结构类似物处理可延缓寒富苹果采后的成熟衰老保持较好的品质。1-MCP及其结构类似物处理间无明显的差异。

抗蛋氨酸结构类似物突变株的筛选

以北京棒杆菌AS1.299经诱变后获得的高产蛋氨酸突变株N3-10作为出发菌株,依次采用蛋氨酸结构类似物亮氨酸、原亮氨酸和乙硫氨酸平板对诱变后的突变株进行筛选,得到蛋氨酸高产菌株依次为L3,LN7和E31.结果表明,亮氨酸对突变株N3-10的抑制质量浓度为8 g/L,原亮氨酸对突变株L3的抑制质量浓度为3 g/L,乙硫氨酸对LN7突变株的抑制质量浓度为3 g/L,经紫外诱变和3种蛋氨酸结构类似物的筛选,最终获得蛋氨酸产量最高突变株E31,产量为1.479 g/L,比出发菌株N3-10蛋氨酸产量高0.379 g/L.经5次传代,产量稳定.

高产辅酶Q_(10)结构类似物抗性突变株的选育

以土壤杆菌(Agrobacteriumsp.)TLY-4为出发菌株,采用70%致死剂量的NTG进行诱变处理,通过筛选抗辅酶Q10结构类似物维生素K3突变株,定向选育到了两株辅酶Q10高产突变株,编号为R-122和R-015,其摇瓶发酵72h时的辅酶Q10产量分别为57.3 mg/L和59.9 mg/L,较出发菌株提高了35.7%和41.6%。通过连续传代实验,表明突变株高产辅酶Q10的遗传性状稳定。实验以有机溶剂DMF和吐温-80共同增溶的方法,解决了维生素K3在培养基中易析出的问题,并确定了平板培养基中维生素K3的最小抑菌浓度为0.15 mg/mL。

一株产吴茱萸碱结构类似物的内生真菌的筛选和初步鉴定

目的筛选产吴茱萸碱结构类似物的内生真菌。方法采用平板分离法对湖南新晃、湘乡、娄底,贵州铜仁,江西万载和浙江温州等地的吴茱萸内生真菌进行分离纯化。采用TLC、LC-MS等分析技术对产吴茱萸碱、吴茱萸次碱及其结构类似物等成分的内生菌进行分析。结果从6个吴茱萸产区共分离到31种内生真菌。分别从吴茱萸的叶、茎和果实中分离到不同的内生真菌,表现为组织特异性,且在不同产地的内生真菌的种类和优势种群存在明显的差异,即具有地域特异性;通过筛选找到了5株产吴茱萸碱和吴茱萸次碱类似成分的内生真菌,该成分可能为去氢吴茱萸碱。并对其中的1株内生真菌进行了形态学鉴定和ITS序列分析,初步判断该菌属子囊菌纲。结论从吴茱萸内生真菌中分离得到1株产去氢吴茱萸碱的子囊菌,为去氢吴茱萸碱的资源开发开辟了新途径。

以抗结构类似物筛选高产L-赖氨酸酵母突变株

以啤酒酵母（Saccharomycescerevisiae)I菌株为出发菌株，经紫外线处理后，在含2.0mg/L的5-（2-氨基乙基）－L一半胱氨酸（AEC）的平板上获得18株生长良好的抗性突变林，编号为I－1～18，其中Ⅰ-Ⅱ株抗AEC达10～15mg／L，是出发株抗性最高浓度的10倍左右，并且Ⅰ—11株的L-赖氨酸含量（重量与重量比，100％）较出发株提高3.89％。以Ⅰ－11株作亚硝酸诱变处理，在含30～120mg／LAEC的培养基上又获得18株抗性突变株，其中Ⅰ11－L和Ⅰ11－MAEC的耐受浓度可达1300mg/L，其赖氨酸的含量较Ⅰ菌株的提高了27．42％和40．28％。

白花前胡丙素C-3′和C-4′反式结构类似物的半合成

目的 对白花前胡丙素 [(+) praeruptorinA]进行结构修饰 ,半合成C 3′和C 4′反式结构类似物 ,寻找活性化合物。方法 首先从白花前胡 (Peucedanumpraeruptorum)根中分离得到白花前胡丙素 ,从白花前胡丙素出发 ,运用碱水解及各种酰化反应 ,半合成各种结构修饰产物。结果 首次合成了 1 7个白花前胡丙素C 3′和C 4′反式结构类似物 ,通过IR ,1 HNMR ,MS等方法确定它们的结构。结论 1 7个化合物均为新化合物 ,其中一些新化合物有显著的钙离子拮抗活性 ,首次证明C 3′和C 4′反式结构的这类化合物同样具有活性。

基于结构类似物的交叉反应性制备高灵敏度玉米赤霉醇单克隆抗体

【目的】获取高灵敏度的玉米赤霉醇(zearalanol,ZAL)单克隆抗体,为提高玉米赤霉醇免疫学检测方法灵敏度研究奠定基础。【方法】利用ZAL的结构类似物玉米赤霉酮(zearalanone, ZAN)制备人工完全抗原。肟化改造ZAN得到ZAN-O;碳二亚胺(EDC)法把ZAN-O分别连接到牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)上制备出ZAN-O-BSA和ZAN-O-OVA。ZAN-O-BSA免疫小鼠,免疫剂量为50μg蛋白/只鼠。选取血清效价高、灵敏度好的小鼠进行细胞融合。阳性杂交瘤筛选过程中,利用ZAL替代ZAN作为阻断剂,筛选能分泌抗ZAL单克隆抗体的杂交瘤细胞。体内诱生腹水法来批量制备ZAL单抗,并对单抗的免疫学性能进行了鉴定。【结果】通过细胞融合,阳性杂交瘤筛选得到了1株能分泌抗ZAL单克隆抗体的杂交瘤细胞,命名为12B10A7,其分泌的ZAL单抗灵敏度(半数抑制浓度, IC50)为577 pg·mL^-1,亲和力常数Ka=6.21×10^7 L·moL^-1,与结构类似物β-玉米赤霉醇(β-zearalanol,β-ZAL)、α-玉米赤霉烯醇(α-zearalenol,α-ZEL)、β-玉米赤霉烯醇(β-zearalenol,β-ZEL)、玉米赤霉酮、玉米赤霉烯酮(zearalenone, ZEN)分别有43.06%、15.51%、15.22%、77.65%及9.79%的交叉反应率,而与其他霉菌毒素及载体蛋白交叉反应率均<0.06%。【结论】基于抗体交叉反应特性,利用ZAN制备人工抗原,得到了ZAL的单克隆抗体,所制备的单克隆抗体亲和力高,灵敏度好,特异性强。

卡铂的空间结构类似物丙二酸银 (Ⅰ)的合成及其抗肿瘤活性(英文)

合成了三种与卡铂空间结构类似的丙二酸银 (Ⅰ)的化合物 :〔Ag2 (CH2 (CO2 ) 2 )〕n(1) ,〔Ag2 { (CH2 ) 4C(CO2 ) 2 ) }〕n(2 )和〔Ag2 {CH3CHCH2 C(CO2 ) 2 }〕n(3) ,并评价了它们对几种人类肿瘤细胞株的体外细胞毒性。所合成的化合物对实验用的几种肿瘤细胞株有强烈的毒性作用 ,而对正常人肝细胞的毒性作用则较弱 ,与肿瘤细胞株对比差异显著 (P <0 0 5 )。虽然其作用机理还不清楚 ,但参照对铂类抗肿瘤药物的研究 。

重组人碱性成纤维细胞生长因子结构类似物在大肠杆菌中的高效稳定表达研究(英文)

目的:用基因工程的方法获得高效稳定表达的重组人碱性成纤维细胞生长因子结构类似物。方法:利用定点突变技术,将天然hbFGF的第78与96位半胱氨酸替换为丝氨酸,通过载体pET-3c ,突变基因被克隆并转化至大肠杆菌BL21( DE3) plysS,IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析蛋白表达结果。结果:纯化后突变蛋白的可溶性成分大幅度增加,而二聚体与多聚体显著减少至纯化后总蛋白的8 %以下。MTT法的结果表明,结构类似物蛋白具有良好的生物学活性。这种新的结构类似物蛋白能较好地替代天然hbFGF在临床上的使用。结论:在不影响生物学活性的条件下,对个别氨基酸残基进行突变以获得新的结构类似物的方法,能够有效提高外源蛋白在大肠杆菌中表达的稳定性及可溶性。

类似性结构组合的实验研究

在国外研究使用点击映射 (one shotmapping)的基础上 ,本研究在一个实验中从新的角度使用了点击映射的方法探讨了关于类似性的一种观点 :类似性判断与差异性判断不是一种对立的镜像关系 ;研究结果表明 。

NADPH结构类似物对一氧化氮合成酶电子传递过程的影响

一氧化氮（NO）可作为信使和细胞因子参与血压调节、神经信息传递及抗感染防御等重要功能。生物体内NO主要由一氧化氮合成酶（NOS）以左旋精氨酸为底物，在还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH），黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD），黄素单核苷酸（FMN），四氢生物蝶呤等因子辅助下生成。在NO合成过程中，电子由NADPH，经FAD、FMN功能域，传递到氧化酶域。

NADPH结构类似物对FMN电子传递性质影响的研究

研究了NADPH结构类似物稳定黄素单核苷酸(FMN)功能域屏蔽状态的作用机理.以野生型一氧化氮合成酶还原酶(nNOSr)、突变体nNOSrF1395S、突变体nNOSrR1400E为对象,研究了NADPH结构类似物:2'-AMP、2',5'-ADP、硫代-NADP+、3-乙酰吡啶-NADP+对FMN域的屏蔽和去屏蔽两种状态的影响,证实了烟碱基团对电子传递过程的影响.

赖氨酸结构类似物对6种食用菌的抑制作用(英文)

观察了赖氨酸结构类似物S-(2-氨基乙基)-2’半胱氨酸(AEC)对杏鲍菇、金针菇单核菌丝、虎奶菇、榆黄蘑、姬松茸和白色茶树菇6种食用菌菌丝生长的影响。将这6种食用菌丝接种在基础培养基的固体斜面上,培养基中分别添加0,4.7,9.4,18.8,37.5,75,150,300,600和1 200 mg/L的AEC,第10天测定其菌丝生长速度。结果是AEC对杏鲍菇、金针菇单核菌丝、虎奶菇、榆黄蘑、姬松茸和白色茶树菇菌丝生长的半抑制浓度(IC50)分别为1158.8 mg/L,24.8 mg/L,21.7 mg/L,159.4 mg/L,361.8 mg/L和5 754.1 mg/L,且其差异显著。试验结果表明食用菌赖氨酸合成途径中关键酶对终产物的敏感性有明显的不同,可为食用菌的高赖氨酸品种选育奠定基础。

用于育种的结构类似物的计算机辅助选择

借助于计算机,对已成功地用于菌种筛选的一些结构类似物及它们对应的化合物的三维空间结构的相似性和使用效果,分别进行了测试和比较.介绍了使用ACDlabs软件包为菌种选育选用合适的结构类似物的方法.

功能性老年乳粉中300种非法添加药物及其类似物的液相色谱-高分辨质谱分析

随着老龄化进程不断加剧,各类声称保健功能的老年乳粉不断涌现,一些生产企业通过非法添加化学药物来实现产品声称的显著功效,危害消费者健康。现有标准方法需要按照功能声称分类别进行检测,不仅耗费人力物力,还严重制约了日常监管工作对未知风险物质的侦查能力。本工作应用QuEChERS净化结合具有Zeno SWATH®全息式数据非依赖型采集定量(data-independent acquisition,DIA)技术的超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱,建立了适用于功能性老年乳粉中300种非法添加化学药物的高通量筛查定量分析方法及未知结构类似物识别策略。针对乳粉基质特点开发了QuEChERS净化流程,通过Kinetex F5色谱柱(100 mm×3.0 mm,2.6μm)分离,以5 mmol/L甲酸铵水溶液(含0.1%(v/v)甲酸)和甲醇-乙腈(1∶1,v/v)作为流动相进行梯度洗脱。从线性范围、灵敏度、基质效应、精密度和准确度等方面对定量分析方法进行验证。在建立300种已知药物定性筛查数据库的基础上,应用电子激活解离(electron-activated dissociation,EAD)碎裂技术,获得丰富的二级质谱裂解碎片信息,通过归属分析对未知风险物质进行鉴别和确证。所有已知目标药物在相应浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数>0.99,检出限(LOD)和LOQ分别在0.04~2.7和0.2~8.0μg/kg范围内。3个水平下的平均加标回收率为73.1%~125.2%,相对标准偏差(RSD)≤14.8%。将该方法应用于60份实际样品中非法添加物质的检测,在两份样品中分别检出苯乙双胍及西地那非药物,并成功识别出一种安非他明结构类似物乙非他明。该方法简便、灵敏、准确,对于功能性乳粉的日常监督执法工作具有实际应用价值。

枯草芽孢杆菌抗脯氨酸结构类似物突变株的筛选及突变株proBA基因的克隆和序列分析

利用亚硝基胍对枯草芽孢杆菌 9315 1进行诱变处理 ,获得了耐NaCl浓度达 14 %的突变株 ,同时发现该突变株也是一个抗脯氨酸反馈抑制突变菌株。其胞内自由脯氨酸的含量随着盐浓度的提高显著增加 ,说明其对渗透压的耐受能力与胞内自由脯氨酸的含量紧密相关。利用PCR方法克隆突变株的proBA基因 ,得到一个约 2 3kb的DNA片段 ,序列分析表明该片段含有一完整的proB基因和部分proA基因。与野生菌株的proB基因相比 ,突变株proB基因中有3个碱基发生了改变 ,其中一个碱基的变化 (从起始密码子开始第 781位由T→A)导致了一个氨基酸发生改变 (Ser→Thr) ,另外两个碱基变化为沉默位点突变。将该proB基因转入大肠杆菌脯氨酸营养缺陷型菌株 ,能够与其功能互补。同时对部分proA基因序列分析发现 ,其与proB基因头尾重叠 ,在proA基因起始密码子上游第 14个碱基处有一个类似于SD的序列 ,其所编码的氨基酸序列与枯草芽孢杆菌 16 8的同源性为 77%