人脂联素球状域-胰升糖素样肽-1类似肽融合蛋白表达载体的构建

目的获得含人脂联素球状域-胰升糖素样肽-1类似肽融合蛋白的表达载体。方法构建含人脂联素球状域-胰升糖素样肽-1类似肽融合基因的原核表达载体,其中人脂联素球状域-胰升糖素样肽-1类似肽融合基因由接头序列连接而成,该接头序列编码产物为富含甘氨酸的短肽。结果通过基因的扩增、重组等构建了人脂联素球状域-胰升糖素样肽-1类似肽融合基因的原核表达载体。结论获得了人脂联素球状域-胰升糖素样肽-1类似肽融合蛋白的原核表达载体,为进一步进行脂联素球状域-胰升糖素样肽-1类似肽融合蛋白的表达及纯化,建立表达具有生物活性的脂联素球状域-胰升糖素样肽-1类似肽融合蛋白的方法,提供前期研究。

牛血红蛋白源抗菌肽P3及其类似肽的生物信息学分析

为研究牛血红蛋白源抗菌肽P3及其类似肽(JH-0、JH-1、JH-2、JH-3)的生物学功能,本研究利用在线软件分析了抗菌肽P3及其类似肽的生物信息学特性,发现这5个抗菌肽均带正电荷,等电点均大于8.00,均为疏水蛋白,定位于细胞外,不含有跨膜区、信号肽序列和糖基化位点,P3和JH-2的二级结构为α-螺旋+β-折叠,JH-3为100%的α-螺旋,JH-0和JH-1为无规则卷曲结构,P3、JH-2和JH-3在第13位氨基酸即苏氨酸(Thr,T)有一个糖基化位点。根据分析结果推测抗菌肽P3及其类似肽可作用于细胞壁或细胞膜,从而使菌体死亡。

胰高血糖素样肽-1类似物研发进展

目的总结胰高血糖素样肽-1(GLP-1)类似物的研发进展。方法检索PubMed和Web of Science数据库自建库起至2024年2月20日的GLP-1类似物相关文献,从研发概况、单分子多靶点GLP-1受体激动剂(GLP-1RA)、除治疗糖尿病外的其他适应证及其药物研发新趋势方面,总结GLP-1类似物的研发进展。结果与结论GLP-1类似物的研发经历了从短效到长效,从注射剂到口服剂,并扩展到多靶点治疗的过程。目前,多靶点GLP-1RA包括GLP-1R/葡萄糖依赖性促胰岛素释放多肽受体、GLP-1R/胰高血糖素受体(GCGR)、GLP-1R/GLP-2R、GLP-1R/胰淀素3受体(AMY3R)、GLP-1R/成纤维细胞生长因子21受体(FGF-21R)等双靶点激动剂,以及GLPR/GLP-1R/GCGR、GLP-1R/GCGR/FGF-21R等三靶点激动剂。GLP-1类似物展现了在2型糖尿病、超重、肥胖症、心血管疾病、多囊卵巢综合征、非酒精性脂肪性肝炎、慢性肾脏病等疾病治疗的巨大潜力,疗效优于单靶点的双靶点和三靶点GLP-1RA是近年来研发的重点。GLP-1类似物的重组腺相关病毒载体基因治疗为研发新趋势,其现阶段存在的安全性、依从性等问题和可供参考的解决方法也一并被提出。

血红蛋白源抗菌肽hemocidins研究进展

血红蛋白及其降解片段在人和动物体内有着多种多样的生理功能。血红蛋白降解后产生的具有抗菌活性的片段被称为hemocidins。hemocidins是一类重要的内源性抗菌肽,其来源宿主广泛、抗菌谱广。根据抗菌肽的构效关系,计算机辅助设计的hemocidins类似肽也具有较好的抗菌活性。文章主要对hemocidins及其类似肽的抗菌活性和抗菌机制进行了简要综述,以期为深入研究和开发hemocidins及其类似肽提供一些参考,进而为防治人与动物病原菌感染提供理论依据。

达格列净联合胰高糖素样肽-1类似物在糖尿病伴慢性心衰中的治疗效果观察

目的:探究达格列净联合胰高糖素样肽-1(GLP-1)类似物对糖尿病合并慢性心力衰竭患者血糖波动及心室重构的影响。方法:将90例糖尿病合并慢性心力衰竭患者随机分为2组。对照组患者给予GLP-1类似物治疗,研究组患者给予达格列净联合GLP-1类似物治疗,比较两组疗效、血糖波动及心室重构情况。结果:与对照组相比,研究组疗效总有效率较高(P<0.05);治疗前后患者糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹血糖(FPG)、餐后2h血糖(2hPG)水平、血糖波动幅度(LAGE)、日间血糖平均绝对差(MODD)、餐后血糖波动幅度(PPGE)、血糖水平标准差(SDBG)、左心室重构指数(LVRI)、左心室质量指数(LVMI)、左心室舒张末内径(LVEDD)及左心室射血分数(LVEF)差值比较,研究组均大于对照组(P<0.05)。结论:达格列净联合GLP-1类似物能够减少糖尿病合并慢性心力衰竭血糖波动,改善心室重构情况。

RGD肽类似物RGDPe抑制血小板活性的体外实验

目的为寻找活性高的肽类血小板聚集抑制剂，我们合成了ＲＧＤ（Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ）肽类似物－ＲＧＤＰｅ（Ａｃ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ６Ｈ５），以验证其体外抗血小板聚集活性。方法以人血为标本，采用比浊法测定血小板聚集和同位素标记方法测定其竞争性抑制１２５Ｉ标记的纤维蛋白原（Ｆｇｎ）与血小板糖蛋白（ＧＰ）Ⅱｂ／Ⅲａ结合的能力，并与Ｓｉｇｍａ公司合成的ＲＧＤＳ（阳性对照）和生理盐水（阴性对照）比较。结果ＲＧＤＰｅ抑制１２５Ｉ－Ｆｇｎ与活化血小板ＧＰⅡｂ／Ⅲａ结合的ＩＣ５０＝３．６４±０．５５×１０－５Ｍ（ＲＧＤＳ：６．０３±１．２４×１０－５Ｍ），抗ＡＤＰ诱导的血小板聚集ＩＣ５０＝７６．４２±５５．４２μＭ（ＲＧＤＳ：１１４．６７±４０．５５μＭ）。结论ＲＧＤＰｅ有较强的抑制血小板聚集活性，可能在体内有预防血栓形成功效。

合成水蛭素羧端肽段及其类似物的抗凝活性

水蛭素Ｃ端肽段为抗凝的活性部位〔１〕．为了进行构效关系的研究，构建Ｃ端肽段类似物的化学库，首先利用同步多中心合成技术合成了７种水蛭素Ｃ端类似物．经ＨＰＬＣ制备纯化，纯度在９６％以上．电喷雾质谱确认了合成肽的分子量．用新鲜人血浆，进行了凝血酶原激酶时间（ＡＰＴＴ）、凝血酶时间（ＴＴ）及凝血酶原时间（ＰＴ）测定．显示水蛭素羧端２０个氨基酸残基肽片是抗凝活性必需的基本骨架．其中应当包含封闭凝血酶催化位点和阴离子结合位点的特异结合序列以及保持两者间多功能性的连接桥．

APP5肽类似物165对老年性痴呆模型大鼠行为学及PSD95和Shank 1表达的影响

目的观察5肽类似物165对老年性痴呆(Alzhei mer disease,AD)模型大鼠学习记忆能力及突触后致密区蛋白95(postsynaptic density95,PSD95)和骨架蛋白Shank1表达的影响。方法将45只大鼠随机分为正常对照组、模型组和5肽类似物165治疗组,模型组和治疗组大鼠按体重3mg/kg行双侧侧脑室链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)注射,第3天重复注射建立AD模型,对照组以人工脑脊液代替STZ。术后21d治疗组按体重0.34mg/(kg.d)给予APP5肽类似物165灌胃干预,其余两组以蒸馏水代替。3周后应用Morris水迷宫、免疫组织化学和Western blotting方法检测大鼠的学习记忆能力及PSD95和Shank1的表达。结果5肽类似物165治疗组大鼠的平均游泳时间较模型组明显缩短(P<0.01),且海马PSD95和Shank1阳性神经细胞数及PSD95和Shank1蛋白表达较模型组明显增加(P<0.05)。结论5肽类似物165可显著提高大鼠学习记忆能力,增加大鼠海马PSD95和Shank1表达,表明其对突触功能和可塑性具改善作用。

胰高血糖素样肽1类似物对2型糖尿病大鼠肾脏功能及超微结构的影响

目的·观察胰高血糖素样肽1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)类似物对2型糖尿病大鼠肾功能及肾脏超微结构的影响。方法·28只SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组(正常对照组和糖尿病对照组)和GLP-1类似物艾塞那肽(Exenatide)干预组(正常干预组和糖尿病干预组)。观察Exenatide干预对大鼠糖脂代谢指标、肾功能指标及肾脏超微结构的影响。结果·Exenatide干预组大鼠空腹血糖、空腹胰岛素、胰岛素敏感指数、胰岛素抵抗指数、血脂、24 h尿微量蛋白、血清肌酐、血清尿素氮等指标均显著优于相应对照组。透射电子显微镜观察发现糖尿病对照组大鼠肾小球系膜细胞增生,基膜明显增厚;而糖尿病干预组肾小球系膜细胞增生不明显,基膜轻度增厚。结论·GLP-1类似物对糖尿病大鼠的肾脏具有保护作用,可能与其改善肾脏超微结构有关。

APP5肽类似物P165和罗格列酮对SH-SY5Y细胞IRS-1和p-CREB表达的影响

目的观察APP5肽类似物P165和罗格列酮(rosiglitazone)对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)损伤人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞后,胰岛素信号通路相关因子IRS-1和p-CREB表达水平的影响。方法将人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞分为对照组、STZ损伤模型组(STZ 0.8 mmol/L)、罗格列酮保护组(STZ 0.8 mmol/L+罗格列酮20μmol/L),APP5肽类似物P165保护组(STZ 0.8 mmol/L+P165 30μmol/L),进行细胞形态观察,IRS-1和p-CREB免疫细胞荧光染色观察,采用image-pro plus图像分析软件测定平均吸光度值。结果与对照组相比,STZ损伤组细胞生长分裂减慢、突起缩短,细胞胞体皱缩,IRS-1和p-CREB免疫荧光染色强度减弱;与STZ损伤组相比,罗格列酮组和P165组突起伸展,细胞形态和细胞胞体皱缩现象明显改善,细胞出现强荧光染色。平均吸光度值测定结果显示:与对照组相比,STZ损伤组IRS-1和p-CREB平均吸光度值降低(P<0.008),与STZ损伤组相比,P165组和罗格列酮组平均吸光度值有所上升,差异均有统计学意义(P<0.008)。结论 APP5肽类似物P165和罗格列酮可能通过增加IRS-1、p-CREB的表达来改善STZ对于SH-SY5Y细胞的损伤,从而达到保护神经元的作用。

APP5肽类似物P165对链脲佐菌素双侧侧脑室注射大鼠海马神经元突触的保护作用

目的观察APP5肽类似物P165对双侧侧脑室注射链脲佐菌素(STZ)大鼠海马神经元突触相关蛋白表达的影响。方法雄性Wistar大鼠45只,随机分为对照组、模型组和治疗组。模型组、治疗组大鼠脑室注射STZ制作痴呆模型,3周后,治疗组以APP5肽类似物P165灌胃治疗,用药4周后,采用Morris水迷宫进行行为学测试;免疫组织化学染色及Western blotting方法观察突触素、α-突触核蛋白和突触后致密区-95蛋白(PSD-95)的表达;电镜观察海马CA1区超微结构改变。结果模型组游泳时间显著长于对照组和治疗组。免疫组织化学染色及Westernblotting均显示模型组海马内突触素、PSD-95蛋白表达与对照组和治疗组相比显著减少,而α-突触核蛋白显著增多。电镜观察可见模型组海马CA1区神经元出现退行性改变,神经毡内突触结构异常。结论脑室注射STZ可影响大鼠海马突触相关蛋白的表达,引起海马神经元和突触的超微结构病变,导致大鼠学习记忆能力减退。APP5肽类似物P165可影响突触蛋白的表达,改善突触功能,有助于恢复大鼠的学习、记忆能力。

APP5肽类似物P165及罗格列酮对Ⅲ型糖尿病大鼠学习记忆功能的影响

目的研究APP5肽类似物P165及罗格列酮对Ⅲ型糖尿病大鼠学习记忆功能的影响。方法将Sprague Dawley(SD)大鼠68只按抽签法随机分为正常对照组,Ⅲ型糖尿病模型组,模型+P165组和模型+罗格列酮组,每组17只。采用双侧脑室注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)的方法,剂量为3 mg/kg,建立Ⅲ型糖尿病模型。成模后给予P165及罗格列酮灌胃治疗4周,进行水迷宫实验。每2周测量大鼠体质量,造模前和取材前检测空腹血糖。应用ELISA方法检测大鼠血清胰岛素、胰高血糖素、胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)。结果水迷宫实验结果显示,与对照组相比,模型组大鼠逃避潜伏期明显延长(P<0.01);与模型组相比,模型+P165组及模型+罗格列酮组大鼠逃避潜伏期明显缩短(P<0.05)。大鼠血清检测结果可见,与对照组相比,模型组大鼠血清IGF-1水平明显降低(P<0.05),而与模型组相比,模型+P165组大鼠血清IGF-1显著增高(P<0.01)。各组动物治疗前后体质量和血糖、胰岛素、胰高血糖素之间差异无统计学意义。结论Ⅲ型糖尿病大鼠存在学习记忆功能障碍,应用P165治疗可以提高大鼠血清IGF-1的水平,改善大鼠的学习记忆功能,但不影响血糖及其调节激素水平。

APP5肽类似物165对链脲佐菌素损伤SH-SY5Y细胞的保护作用

目的探讨体外APP5肽类似物165(下称P165)对链脲佐菌素(STZ)损伤SH-SY5Y细胞的保护作用。方法STZ0.8mmol/L作用于SH-SY5Y细胞的损伤模型。通过测定噻唑蓝(MTT)代谢率、乳酸脱氢酸(LDH)漏出率,瑞氏染色观察细胞形态,Western blot检测相关蛋白,观察P165的保护作用。结果与正常对照组细胞的MTT代谢率(1.00±0.01)和LDH漏出率(201.56±47.54)比较,STZ损伤组细胞MTT代谢率降低(0.84±0.01),LDH漏出率升高(317.83±76.95),差异有统计学意义(P<0.05),细胞胞体面积缩小,胰岛素信号通路相关蛋白IRS-1、PI3K表达减少;P16530μmol/L组细胞MTT代谢率升高(0.91±0.01),LDH漏出率降低(228.53±35.65),细胞形态恢复正常,胰岛素信号通路相关蛋白IRS-1、PI3K表达恢复正常。结论体外STZ与SH-SY5Y细胞共孵育,可能影响胰岛素/胰岛素受体信号转导系统对细胞的促生长作用,而P165可能通过激活该信号通路逆转这种损伤,可作为一种神经营养因子起到保护作用。

链脲佐菌素对大鼠海马p-CREB表达的影响及APP5肽类似物165的治疗作用

目的探讨链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)对大鼠海马磷酸化环磷腺苷反应成分结合蛋白(phosphatedcylinc AMP response element binding protein,p-CREB)表达的影响以及APP5肽类似物165的治疗作用。方法将42只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和APP5肽类似物165治疗组。将STZ溶解于人工脑脊液,新鲜配制成浓度为25mg/mL,分别于第1、3天按体重3mg/kg行双侧脑室注射。APP5肽治疗组于3周后开始行APP5肽类似物165灌胃,连续4周。对照组和模型组则以等量生理盐水灌胃。4周后取脑组织海马行免疫组织化学染色和Western-blotting检测p-CREB。结果模型组p-CREB阳性神经细胞数(137.44±22.62)较对照组(27.33±9.91)明显增多(P<0.05),胞质淡染;APP5肽治疗组p-CREB阳性神经元数目(29.78±10.72)与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。模型组海马p-CREB表达多于对照组和APP5肽治疗组,APP5肽治疗组与对照组接近。结论脑室注射小剂量STZ可使海马p-CREB阳性神经元表达增多,而APP5肽类似物165可使p-CREB阳性神经元表达恢复至正常水平。

人胰高血糖素样肽-1类似物基因治疗对STZ诱导糖尿病大鼠的拮抗作用

目的观察人胰高血糖素样肽-1(hGLP-1)类似物基因对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠的拮抗作用。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组、空载体对照组及基因治疗拮抗组,每组10只。应用小剂量、多次给药的方式诱导糖尿病大鼠模型,观察hGLP-1类似物基因对大鼠血糖、血清胰岛素及胆固醇水平的影响。借助荧光显微镜观察绿色荧光蛋白在不同组织中的表达情况;采用免疫组化分析胰岛细胞中胰岛素的表达水平。结果与糖尿病模型组和空载体对照组比较,基因治疗拮抗组糖尿病大鼠血糖水平下降、血清胰岛素水平升高、血清胆固醇水平下降。胰岛素免疫组化分析证实,胰岛细胞中胰岛素得以表达,基因治疗可使受损的胰岛细胞功能恢复。结论 hGLP-1类似物基因治疗对STZ诱导的糖尿病症状具有拮抗作用,改善糖尿病大鼠血糖、血清胰岛素和血脂水平。

GLP-1类似物利拉鲁肽研究进展

胰高糖素样肽-1类似物(GLP-1类似物)利拉鲁肽是一种全新作用机制的降糖药物,具有降低体重、降低收缩压、改善胰岛细胞功能。本文对利拉鲁肽国内外近期文献进行分析,从其药理作用特点、临床研究、安全性和耐受性等方面阐述其研究进展。其长期应用疗效如何以及能否延缓糖尿病的进展仍需要进一步的研究。

胰高糖素样肽1类似物治疗糖尿病的研究进展

胰高糖素样肽1(GLP-1)是一种肠肽类激素,GLP-1不仅可促进胰岛素合成和分泌、抑制B细胞凋亡、促进B细胞增殖、抑制胰高糖素分泌;还可降低食欲,延缓胃排空;GLP-1对心血管功能产生有益作用。人GLP-1类似物适用于二甲双胍、磺脲类和(或)胰岛素增敏剂控制血糖仍不满意的2型糖尿病患者。在1型糖尿病中,GLP-1对空腹血糖的作用,取决于患者血糖、胰升糖素水平及残存胰岛B细胞功能。GLP-1能改善餐后血糖的波动,根据患者残存B细胞功能的多少,其作用机制可能有差别。

人胰高血糖素样肽-1类似物基因治疗对糖尿病大鼠机体代谢的影响

目的观察人胰高血糖素样肽-1(hGLP-1)类似物基因(2×Val2-hGLP-1)对糖尿病大鼠模型机体代谢的影响。方法建立糖尿病大鼠模型,尾静脉注射携带hGLP-1类似物基因的重组表达载体(pIRES2-EGFP/Val2-hGLP-1),观察30d,期间测定相关指标。结果治疗后糖尿病大鼠体重、进食及饮水量改善明显(P<0.01)。治疗15d后,血糖水平由(27.06±1.73)mmol/L降至(17.57±2.17)mmol/L(P<0.01),血清胰岛素水平由(5.53±0.79)mIU/L升高至(9.88±0.96)mIU/L(P<0.01)。总胆固醇水平降低(P<0.05或P<0.01)。hGLP-1蛋白在胰腺、肝、肾、肌肉组织中表达。结论 hGLP-1类似物基因可导入糖尿病大鼠体内并成功表达,基因治疗降低大鼠血糖,血脂水平,改善大鼠的机体代谢。

胰高糖素样肽-1类似物对2型糖尿病大鼠心脏超微结构的影响

目的探讨胰高糖素样肽-1(GLP-1)类似物对2型糖尿病大鼠心脏超微结构的影响。方法将28只无特定病原体(SPF)级雄性SD大鼠随机分为4组:正常对照组(C组)6例基础饲料喂养;正常对照+Exenatide干预组(C+E组)6例基础饲料喂养;2型糖尿病组(D组)8例高脂饲料喂养;2型糖尿病+Exenatide干预组(D+E组)8例高脂饲料喂养。采用透射电镜观察4组大鼠心脏超微结构的变化。结果 D组心肌纤维排列紊乱,线粒体肿胀、空泡变性,而D+E组干预8周后,心肌细胞结构较清楚,线粒体无明显肿胀。结论 GLP-1类似物能有效改善糖尿病大鼠心肌细胞线粒体和肌纤维的结构及功能紊乱,从而使心肌缺血和心功能得到保护,抑制心肌细胞凋亡。

两种^(125)I标记的神经紧张肽类似物的动物体内分布

采用氯胺T法对神经紧张肽类似物NT1和NT2进行125I标记,并观察了125I-NT1和125I-NT2在正常小鼠和荷人结肠癌裸鼠体内的分布。结果显示,125I-NT1和125I-NT2标记率分别为68%和76%,经Sep-Pak-C18反相柱分离后,放化纯度>98%;两种125I标记的NT类似物血液清除较快,部分由肝、肾脏排泄,体内分布基本一致,对肿瘤具有相似的靶向性。这说明两种NT类似物N端Arg和Lys互换对其体内的分布特性没有明显影响。与125I-NT1相比,125I-NT2在体内的清除速度更快,在胃中更稳定,其T/NT也更高,更适于作进一步研究。