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拟南芥中一个类似钙调素蛋白的基因结构及其缺磷、缺钾诱导表达 被引量:3
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作者 段瑞君 易可可 吴平 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期520-526,共7页
通过拟南芥芯片杂交分析发现推测的钙调素基因(GenBankaccessionNo.At1g76650)与低磷胁迫有关。对该基因的结构研究确认了该基因编码一个含有三个EF-hand结构域的类似钙调素的蛋白,Northern检测表明该基因在缺钾、缺磷条件下诱导表达,... 通过拟南芥芯片杂交分析发现推测的钙调素基因(GenBankaccessionNo.At1g76650)与低磷胁迫有关。对该基因的结构研究确认了该基因编码一个含有三个EF-hand结构域的类似钙调素的蛋白,Northern检测表明该基因在缺钾、缺磷条件下诱导表达,但在缺氮、高盐等胁迫条件下不受影响。经RT-PCR和启动子融合GUS转基因植株的组织化学染色分析,表明该基因在拟南芥中为全株表达,但各器官中表达丰度不尽相同。 展开更多
关键词 拟南芥 类似钙调素蛋白的基因 磷或钾缺乏
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黄淮麦区小麦中类燕麦蛋白的分类、等位基因及质量评价
2
作者 晁岳恩 李文旭 +3 位作者 王沙沙 王亚欢 汪庆昌 黄超 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1238-1244,共7页
类燕麦蛋白(ALPs,avenin-like proteins)是一类富含半胱氨酸残基的非典型面筋蛋白,对小麦面团强度具有重要作用。为明确ALPs在黄淮麦区小麦品种中的表达类型、等位基因数量及可能的面粉品质效应,本研究以黄淮麦区的40个栽培品种为研究对... 类燕麦蛋白(ALPs,avenin-like proteins)是一类富含半胱氨酸残基的非典型面筋蛋白,对小麦面团强度具有重要作用。为明确ALPs在黄淮麦区小麦品种中的表达类型、等位基因数量及可能的面粉品质效应,本研究以黄淮麦区的40个栽培品种为研究对象,选取灌浆中期的籽粒并根据品质不同分别组成2个混合池进行转录组测序。结果表明,在40个品种的转录产物中,鉴定到14个ALPs基因和24个ALPs的等位基因;14个ALPs基因在4AL、7DS和7AS染色体分别有5个、5个和4个。聚类分析表明,14个ALPs蛋白可以分为A、B两个大类,细分为A1、A2、B1、B2和B3五个亚类。ALP基因的表达水平在强筋群体和中筋群体间存在差异,两个A类ALPs基因在强筋群体中显著上调表达,B3亚类ALP显著下调。面粉品质效应评估表明,14个ALPs对面团强度性状的贡献存在差异,但除B1亚类外,其他所有蛋白对面筋强度贡献值都不低于高分子麦谷蛋白,推测ALPs可能也是影响中国黄淮麦区面团强度的重要蛋白类型。 展开更多
关键词 小麦 燕麦类似蛋白 面团强度 等位基因
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钙调素基因(HcCaM7)及其蛋白乙酰化修饰参与红麻响应非生物胁迫的作用
3
作者 黄震 吴启境 +10 位作者 陈灿妮 吴霞 曹珊 张辉 岳娇 胡亚丽 罗登杰 李赟 廖长君 李茹 陈鹏 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期402-413,共12页
钙调素是一类钙依赖性调节蛋白,参与植物的生长发育、抗逆胁迫等多种生物学过程。本课题组前期通过蛋白质乙酰化修饰组学研究发现,红麻钙调素蛋白7的乙酰化修饰参与了红麻花粉的发育调控。为研究其参与抗逆性的机制,本研究以红麻保持系... 钙调素是一类钙依赖性调节蛋白,参与植物的生长发育、抗逆胁迫等多种生物学过程。本课题组前期通过蛋白质乙酰化修饰组学研究发现,红麻钙调素蛋白7的乙酰化修饰参与了红麻花粉的发育调控。为研究其参与抗逆性的机制,本研究以红麻保持系P3B双核期的花药为材料,使用PCR法克隆了钙调素基因HcCaM7,最大开放阅读框(open reading frame,ORF)为450 bp,其由149个氨基酸组成,编码相对分子质量16.85 kD的蛋白;亚细胞定位结果显示,HcCaM7蛋白的表达主要定位在细胞质和细胞膜中;利用病毒诱导的基因沉默技术沉默HcCaM7基因,导致红麻沉默植株的生长受到抑制;进一步在体外采用基因密码子扩展技术对发生乙酰化修饰氨基酸位点进行突变,成功获得具有体外乙酰化修饰位点的蛋白HcCaM7mut,并成功诱导表达了无乙酰化修饰的蛋白HcCaM7,结果表明HcCaM7蛋白发生乙酰化修饰后可以显著促进NADK(NAD激酶)活性;用点板法检测含有HcCaM7蛋白和HcCaM7mut蛋白的重组菌在盐(400 mmol L^(-1)和500 mmol L^(-1)NaCl)、干旱(400 mmol L^(-1)和600 mmol L^(-1)甘露醇)、重金属(30 mmol L^(-1)和50μmol L^(-1)CdCl2)及低温胁迫后(利用液氮反复冻融模拟)在LB固体培养基上的存活率发现,含有HcCaM7蛋白的重组菌存活率显著高于空载对照菌,而含有乙酰化修饰的HcCaM7mut蛋白的重组菌存活率进一步提升,表明HcCaM7蛋白能够提高大肠杆菌对非生物胁迫的耐受性,并且乙酰化修饰后效果更佳。因此,HcCaM7基因可以调控红麻生长发育和响应非生物胁迫,乙酰化修饰可以促进HcCaM7蛋白发挥作用。 展开更多
关键词 红麻 钙调素蛋白7 蛋白乙酰化修饰 病毒诱导的基因沉默 基因密码子扩展技术 非生物胁迫
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栉孔扇贝钙调素类似蛋白基因的克隆及其与钙调素基因表达特征的比较分析 被引量:6
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作者 林亚 李世国 +1 位作者 谢莉萍 张荣庆 《水产科学》 CAS 北大核心 2014年第11期692-701,共10页
软体动物碳酸钙贝壳的形成过程涉及到Ca2+的吸收、转运、贮藏、分泌和沉积等,与钙代谢这一高度受控的复杂生理过程紧密相关。本研究以栉孔扇贝转录组测序结果为基础,通过RACE技术,从栉孔扇贝外套膜中克隆得到钙调素类似蛋白的cDNA序列,... 软体动物碳酸钙贝壳的形成过程涉及到Ca2+的吸收、转运、贮藏、分泌和沉积等,与钙代谢这一高度受控的复杂生理过程紧密相关。本研究以栉孔扇贝转录组测序结果为基础,通过RACE技术,从栉孔扇贝外套膜中克隆得到钙调素类似蛋白的cDNA序列,全长863bp,编码149个氨基酸,相应蛋白质的预测分子量约为17.0ku,理论等电点为4.03。钙调素类似蛋白具有4个可能的EF-hand Ca2+结合结构域,属于EF-hand钙结合蛋白家族,其氨基酸序列与栉孔扇贝钙调素钙调素的相似度为66%。半定量RT-PCR检测显示,钙调素类似蛋白基因在外套膜中特异性高表达,预示其可能参与贝壳的矿化过程。实时定量PCR检测显示,钙调素类似蛋白基因的表达水平随环境中Ca2+浓度的升高呈先升后降趋势,表明钙调素类似蛋白与外套膜中的钙代谢过程密切相关;在贝壳缺刻损伤后的再生过程中,钙调素类似蛋白基因表达量显著上升,暗示其积极参与到了贝壳的再生过程中。上述结果为进一步阐明钙调素类似蛋白基因的功能及其在栉孔扇贝生物矿化过程中的作用提供可能的理论依据。 展开更多
关键词 栉孔扇贝 钙调素类似蛋白 生物矿化 钙代谢 钙调素
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过表达钙调素类似蛋白基因CML25-like诱导黄瓜单性结实的研究 被引量:6
5
作者 刘嘉斐 张璐 +4 位作者 孟永娇 段莉莉 罗雨薇 李季 陈劲枫 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期421-429,共9页
[目的]钙调素类似蛋白(calmodulin-like protein,CML)是一类含有EF-hand结构域的钙受体蛋白,与植物细胞的分裂及形态建成密切相关。本文基于前期克隆的一个黄瓜果实特异性表达基因CML25-like,研究其调控单性结实的机制。[方法]采用RT-q... [目的]钙调素类似蛋白(calmodulin-like protein,CML)是一类含有EF-hand结构域的钙受体蛋白,与植物细胞的分裂及形态建成密切相关。本文基于前期克隆的一个黄瓜果实特异性表达基因CML25-like,研究其调控单性结实的机制。[方法]采用RT-qPCR方法研究CML25-like表达的时空特点;构建植物表达载体pLP100-35S-CML25-like,利用农杆菌介导子叶节法转化黄瓜自交系CCMC,并研究转基因植株的表达特点;观察转基因植株的表型,采用RT-qPCR方法检测其坐果期激素相关基因的表达变化。[结果]CML25-like在黄瓜幼叶和雌花中表达量最高,在雄花中表达量最低,而且CML25-like在果实发育过程中上调表达,在果实败育过程中下调表达;性状统计发现过表达CML25-like植株的单性结实率最高可达到98.25%,比对照CCMC提高了86%,而且单性结实果实与对照授粉果实的长度和横径均无明显差异。RT-qPCR检测结果显示,在转基因植株坐果期22个激素相关基因中有16个显著上调表达。[结论]CML25-like基因的活跃表达与果实发育密切相关,而且CML25-like能够诱导黄瓜单性结实,促进果实膨大,推测CML25-like通过上调弱单性结实黄瓜子房中激素相关基因表达而诱导单性结实。 展开更多
关键词 黄瓜 钙调素类似蛋白 单性结实 激素相关基因
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胭脂花及小报春钙调素类似蛋白基因CML19的克隆与表达分析 被引量:1
6
作者 司未佳 卢婉佩 +3 位作者 刘颖 王佳 程堂仁 潘会堂 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期603-612,共10页
CML是一类重要的Ca^(2+)响应蛋白,为了研究CML蛋白对报春花自交不亲和性的影响,该研究从胭脂花和小报春转录组数据中分别筛选出PmCML19和PfCML19基因,并对这2个基因进行全长克隆、生物信息学分析以及基因亚细胞定位和表达模式分析。结... CML是一类重要的Ca^(2+)响应蛋白,为了研究CML蛋白对报春花自交不亲和性的影响,该研究从胭脂花和小报春转录组数据中分别筛选出PmCML19和PfCML19基因,并对这2个基因进行全长克隆、生物信息学分析以及基因亚细胞定位和表达模式分析。结果发现:(1)PmCML19和PfCML19基因全长均为435 bp,所编码蛋白的氨基酸相似度达80.56%,均为酸性亲水性蛋白,包含4个EF手性结构;同源分析表明, PmCML19和PfCML19的亲缘关系与中华猕猴桃AcCML19最近,而拟南芥家族中的AtCML40与这2个蛋白的氨基酸序列相似度分别为44%和46%。(2)亚细胞定位结果表明,PmCML19和PfCML19基因在细胞核和细胞膜上均表达。(3)实时荧光定量PCR结果表明,PmCML19和PfCML19基因在花药中的表达量均高于雌蕊;在胭脂花和小报春亲和授粉组合的雌蕊中具有较高的表达量,而在不亲和授粉组合的雌蕊中表达量显著降低。研究推测,胭脂花和小报春CML19基因与报春花的自交不亲和性密切相关,为进一步研究异型自交不亲和遗传机制提供了新思路。 展开更多
关键词 报春花属 钙调素类似蛋白 自交不亲和 生物信息学分析
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新疆无苞芥类钙调素蛋白基因OpCML13的克隆与分析 被引量:8
7
作者 赵云霞 魏艳玲 黄先忠 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期431-437,共7页
通过对无苞芥幼苗cDNA文库的随机克隆测序分析,获得1条与拟南芥编码类钙调素13(calmodulin-likel3,CMLl3)高度相似的EST(GenBank登录号为JZl52285)。利用RT-PCR技术从无苞芥cDNA中克隆了该基因,命名为OpCMLl3,该基因开放阅读框... 通过对无苞芥幼苗cDNA文库的随机克隆测序分析,获得1条与拟南芥编码类钙调素13(calmodulin-likel3,CMLl3)高度相似的EST(GenBank登录号为JZl52285)。利用RT-PCR技术从无苞芥cDNA中克隆了该基因,命名为OpCMLl3,该基因开放阅读框(ORF)为447bp,编码148个氨基酸。生物信息学分析表明,OpCMLl3蛋白的二级结构含有4个ca^2+结合基序(EF-hands)结构,是一个亲水蛋白,无信号肽,无跨膜区域,为非跨膜蛋白;同源建模发现该蛋白包含8个α-螺旋结构和10个β-转角。系统进化树分析表明,OpCMLl3编码产物与拟南芥AtCMLl3和AtCMI。14进化关系较近,属于同一进化分支。半定量RTPCR结果显示,OpCMLl3基因在无苞芥的不同组织中都有表达,在根中表达量最高;高盐胁迫处理6~24h,OpCMLl3基因的表达明显增强,随后逐渐恢复正常表达水平;低温、干旱和ABA处理6h后基因表达明显上调,并且一直保持较高的表达水平。研究表明,OpCMLl3基因在无苞芥逆境胁迫中可能起着重要作用。 展开更多
关键词 无苞芥 钙调素蛋白13 基因表达 抗逆
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桑树钙调素蛋白基因MCaM-3的克隆及序列分析与诱导表达 被引量:3
8
作者 方荣俊 扈冬青 +6 位作者 杜伟 赵卫国 潘刚 张林 刘利 杨永华 程嘉翎 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期711-717,共7页
钙调素蛋白(calmodulin CaM)作为真核生物细胞内的多功能Ca2+结合蛋白,在调节植物的生长发育、环境适应性和抗逆性方面具有重要作用。利用桑树表达序列标签(expressed sequence tags,ESTs)克隆了一个编码桑树CaM基因的全长cDNA序列,命名... 钙调素蛋白(calmodulin CaM)作为真核生物细胞内的多功能Ca2+结合蛋白,在调节植物的生长发育、环境适应性和抗逆性方面具有重要作用。利用桑树表达序列标签(expressed sequence tags,ESTs)克隆了一个编码桑树CaM基因的全长cDNA序列,命名为MCaM-3(GenBank登录号:GQ303247)。序列分析表明,MCaM-3全长951bp,存在143 bp的5′端非翻译序列(5′-UTR)和358 bp的3′端非翻译序列(3′-UTR),其开放读码框(ORF)长450bp,编码149个氨基酸,预测蛋白质分子质量为16.85 kD,等电点为3.95。用在线软件SMART分析显示,MCaM-3蛋白含有4个Ca2+结合基序(EFh)结构域,可以结合Ca2+。同源分析表明,CaM基因在桑树与拟南芥、杨树、大豆、小麦、水稻、玉米各物种间具有很高的保守性。基于桑树和其它19个物种CaM基因的系统进化分析表明,桑树与蓖麻、烟草、大黄、樱桃的亲缘关系较近。半定量RT-PCR检测表明,与正常生长环境相比,MCaM-3基因mRNA的转录水平在低温、干旱、盐胁迫条件下均显著提高,初步推测MCaM-3基因与桑树的抗逆性有一定关联。 展开更多
关键词 桑树 钙调素蛋白基因 基因克隆 序列分析 Ca2+结合基序 逆境胁迫 诱导表达
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一个水稻钙调素结合蛋白基因OsCaMBP的克隆及表达分析 被引量:2
9
作者 万佳 况浩池 +5 位作者 谢必武 陈静 张琦 徐永菊 高晓玲 徐正君 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期243-248,共6页
通过荧光差异显示和RT-PCR技术,克隆到一个新的水稻钙调素结合蛋白基因OsCaMBP。序列分析表明,该基因cDNA序列全长2094bp,编码一个具有569个氨基酸残基的多肽,推测分子量为63.2kD;在OsCaMBP蛋白的N端存在IQ钙调素结合构象,与其... 通过荧光差异显示和RT-PCR技术,克隆到一个新的水稻钙调素结合蛋白基因OsCaMBP。序列分析表明,该基因cDNA序列全长2094bp,编码一个具有569个氨基酸残基的多肽,推测分子量为63.2kD;在OsCaMBP蛋白的N端存在IQ钙调素结合构象,与其他植物中的钙调素结合蛋白的相似性介于38.25%-47.28%。在热激处理15min、30min、1h或2h后,该基因在水稻的叶、根和叶鞘中表达量急剧增加;此外,该基因表达量也受低温调控而增加。 展开更多
关键词 水稻 钙调素结合蛋白 荧光差异显示 基因克隆 表达
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拟南芥钙调素结合蛋白基因启动子的克隆及表达 被引量:2
10
作者 万东莉 李瑞丽 +4 位作者 邹博 高阳 万永青 王瑞刚 李国婧 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期17-22,共6页
采用PCR技术从拟南芥中克隆了SCBP60g基因的启动子,并与GUS报告基因融合构建重组表达载体,转化野生型拟南芥,对获得的转基因株系进行GUS组织染色,从基因调控水平上探讨其在功能方面的差异。结果显示:SCBP60g基因的启动子能指导GUS报告... 采用PCR技术从拟南芥中克隆了SCBP60g基因的启动子,并与GUS报告基因融合构建重组表达载体,转化野生型拟南芥,对获得的转基因株系进行GUS组织染色,从基因调控水平上探讨其在功能方面的差异。结果显示:SCBP60g基因的启动子能指导GUS报告基因在拟南芥的根、茎、叶和花中表达,并且在这些部位的维管束表达较强。这种表达方式与LCBP60g基因的启动子指导的GUS基因组织化学染色有差异,表明这个启动子的表达调控具有一定的特异性。 展开更多
关键词 拟南芥 启动子 钙调素结合蛋白 CBP60g GUS报告基因
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烟草幼苗两种钙调素结合蛋白激酶的活性调节及基因表达 被引量:3
11
作者 华玮 李荣俊 +1 位作者 梁述平 吕应堂 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期305-310,共6页
在体外条件下,烟草两种钙调素结合蛋白激酶(NtCBK1与NtCBK2)自磷酸化活性的最适pH分别是7.5和8;Mg2+离子浓度对两种激酶自磷酸化活性影响比Na+离子大。Northern杂交结果显示:两基因在花和叶中都有大量表达,但在根和茎中NtCBK1的表达量... 在体外条件下,烟草两种钙调素结合蛋白激酶(NtCBK1与NtCBK2)自磷酸化活性的最适pH分别是7.5和8;Mg2+离子浓度对两种激酶自磷酸化活性影响比Na+离子大。Northern杂交结果显示:两基因在花和叶中都有大量表达,但在根和茎中NtCBK1的表达量明显多于NtCBK2;高盐处理会引起NtCBK1基因表达量升高,而高温、低温和干旱处理对该基因表达没有影响,说明NtCBK1参与植物体内盐诱导的信号转导。 展开更多
关键词 钙调素结合蛋白激酶 自磷酸化 基因表达 NORTHERN杂交
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桃钙调磷酸酶B类似蛋白基因家族鉴定与分析 被引量:2
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作者 张杰伟 吴婷 +2 位作者 任飞 谢华 魏建华 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第3期511-516,共6页
为了研究桃钙调磷酸酶B类似蛋白(CBLs)基因家族在桃中如何发挥作用。利用桃基因组数据库,通过生物信息学手段,鉴定桃CBL家族基因的基因结构、染色体定位和编码蛋白,通过序列比对进行进化和分类分析。结果表明,桃基因组中含有8个CBL家族... 为了研究桃钙调磷酸酶B类似蛋白(CBLs)基因家族在桃中如何发挥作用。利用桃基因组数据库,通过生物信息学手段,鉴定桃CBL家族基因的基因结构、染色体定位和编码蛋白,通过序列比对进行进化和分类分析。结果表明,桃基因组中含有8个CBL家族基因,分布于桃的5条染色体上。MEME和Pfam保守结构域分析显示,桃CBL蛋白均含有4个保守的EF结构域。进化树分析表明CBLs可分为4个亚家族。TMHMM 2.0Server分析显示仅PpCBL1含有1个跨膜区。PlantsPFeatureScan分析显示PpCBL2、3和5均含有1个N-豆蔻酰化位点。NetPhos 2.0 Server结果显示PpCBLs存在着大量的丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)及酪氨酸(Tyr)潜在磷酸化位点。以上结果将为今后揭示桃CBL的功能提供重要的理论基础。 展开更多
关键词 钙调磷酸酶B类似蛋白 基因家族 进化分析 序列特征
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锌转运蛋白-8及转录因子7类似物-2基因多态性与中国南方汉族人2型糖尿病的相关性 被引量:3
13
作者 马聪 盛宏光 马晶晶 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1086-1091,共6页
目的研究锌转运蛋白-8基因(SLC30A8)多态性位点rs13266634及转录因子7类似物-2基因(TCF7L2)多态性位点rs11196218与2型糖尿病(T2DM)以及相关代谢指标的关系。方法T2DM患者(T2DM组)259例,健康者(NC组)200名,均来自上海及周边地区。应用... 目的研究锌转运蛋白-8基因(SLC30A8)多态性位点rs13266634及转录因子7类似物-2基因(TCF7L2)多态性位点rs11196218与2型糖尿病(T2DM)以及相关代谢指标的关系。方法T2DM患者(T2DM组)259例,健康者(NC组)200名,均来自上海及周边地区。应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术判断标本基因型,同时进行人体测量学及代谢指标的检测,并分别采用稳态模型评估胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及胰岛B细胞分泌功能指数(HOMA-B)评估胰岛素抵抗和胰岛B细胞功能。结果①T2DM组中,rs13266634的C等位基因频率和CC基因型频率分别为57.3%和33.6%,均显著高于NC组的45.4%和17.2%(P值均<0.05)。②C等位基因携带者患T2DM的风险是T等位基因携带者的1.59倍(OR=1.59,95%CI为1.19~2.11,x^2=9.831,P=0.002)。与TT基因型相比,CC基因型患T2DM的风险增加2.63倍(OR=2.63,95%CI为1.42~4.87,x^2=9.69,P=0.002)。③T2DM组与NC组的TCF7L2(rs11196218)基因型及等位基因频率的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。④T2DM组中,CC基因型的HOMA-B显著低于TT基因型(P=0.002)。结论SLC30A8基因rs13266634多态性位点的C等位基因可能是中国人T2DM的风险等位基因,而TCF7L2基因rs11196218单核苷酸多态性可能与T2DM的遗传易感性无关。 展开更多
关键词 单核苷酸多态性 锌转运蛋白-8基因 转录因子7类似物-2基因 2型糖尿病
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Ras蛋白激活物类似物-1基因在胃癌细胞株中的表达及生物学意义 被引量:2
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作者 杨晓薇 陈洪 +3 位作者 孔波 张慧 王智 刘洋 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2011年第1期38-41,45,共5页
目的:研究Ras蛋白激活物类似物-1基因(Ras protein activator like-1,RASAL1)在正常胃黏膜上皮细胞、胃癌细胞株中的表达情况及其生物学意义。方法:采用RT-PCR和Western blot分别检测高分化胃腺癌细胞株MKN-28、中分化胃腺癌细胞株SGC-7... 目的:研究Ras蛋白激活物类似物-1基因(Ras protein activator like-1,RASAL1)在正常胃黏膜上皮细胞、胃癌细胞株中的表达情况及其生物学意义。方法:采用RT-PCR和Western blot分别检测高分化胃腺癌细胞株MKN-28、中分化胃腺癌细胞株SGC-7901、低分化胃腺癌细胞株BGC-823和正常胃黏膜上皮细胞株GES-1中RASAL1基因在mRNA水平和蛋白水平的表达,应用基因测序法检测上述3种胃癌细胞株中K-Ras基因第一外显子第12密码子点突变情况,并分析其意义。结果:RT-PCR和Westernblot检测结果显示,与正常胃黏膜上皮细胞相比,在3种不同分化胃腺癌细胞株中,RASAL1基因的表达在mRNA水平和蛋白水平均下调(P<0.05),分化程度越低表达下调越明显;测序结果表明3种胃腺癌细胞株中均未发现K-Ras基因第一外显子第12密码子点突变。结论:RASAL1基因在含野生型K-Ras的胃癌细胞中呈低表达状态,其表达水平与胃癌的恶性程度有一定的关系。 展开更多
关键词 Ras蛋白激活物类似物-1 胃癌细胞株 基因表达 点突变
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miRNA-219介导氯胺酮引起的N2a细胞中精神分裂症断裂基因1及钙/钙调素依赖性蛋白激酶2γ的变化 被引量:1
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作者 杨春 石金云 +4 位作者 王楠 李晓敏 周志强 杨建军 徐建国 《临床麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1097-1099,共3页
目的观察miRNA-219介导氯胺酮引起的N2a细胞中精神分裂症断裂基因1(DISC1)及钙/钙调素依赖性蛋白激酶2γ(CaMK2γ)的变化,探讨氯胺酮诱发精神分裂症样不良反应的相关机制。方法采用随机数字表法将N2a细胞分为三组,分别加入DMEM培养液(C... 目的观察miRNA-219介导氯胺酮引起的N2a细胞中精神分裂症断裂基因1(DISC1)及钙/钙调素依赖性蛋白激酶2γ(CaMK2γ)的变化,探讨氯胺酮诱发精神分裂症样不良反应的相关机制。方法采用随机数字表法将N2a细胞分为三组,分别加入DMEM培养液(C组),1μmol/L氯胺酮(K组),1μmol/L氯胺酮+anti-miRNA-219转染(KA组)培养。定量分析miRNA-219,检测DISC1和CaMK2γ。结果与C组相比,K组miRNA-219及DISC1表达显著下调,CaMK2γ显著上调(P<0.01);与K组相比,KA组miRNA-219及DISC1表达显著上调,CaMK2γ显著下调(P<0.01)。结论 miRNA-219下调可介导氯胺酮引起的N2a细胞中DISC1下调及CaMK2γ上调。 展开更多
关键词 氯胺酮 miRNA-219 精神分裂症断裂基因1 钙调素依赖性蛋白激酶2γ 精神 分裂症
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桃钙调磷酸酶B类似蛋白互作蛋白激酶基因家族鉴定与分析
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作者 张杰伟 杨育峰 +2 位作者 任飞 谢华 魏建华 《科学技术与工程》 北大核心 2016年第24期127-131,共5页
钙调磷酸酶B类似蛋白互作蛋白激酶(CIPKs)在植物生长发育和抗逆过程中发挥着重要作用。为了对桃中CIPK家族基因进行系统分析,利用桃基因组数据库,通过生物信息学手段,鉴定桃CIPK家族基因的基因结构、染色体定位和编码蛋白,通过序列比对... 钙调磷酸酶B类似蛋白互作蛋白激酶(CIPKs)在植物生长发育和抗逆过程中发挥着重要作用。为了对桃中CIPK家族基因进行系统分析,利用桃基因组数据库,通过生物信息学手段,鉴定桃CIPK家族基因的基因结构、染色体定位和编码蛋白,通过序列比对进行进化和分类分析。结果表明,桃基因组中含有18个CIPK基因,分布于桃的6条染色体上。MEME和Pfam保守结构域分析显示,桃CIPK蛋白均含有2个保守的PKinase和NAF结构域。进化树分析表明CIPKs可分为2个亚家族。Net Phos 2.0 Server结果显示Pp CIPKs存在着大量的丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)及酪氨酸(Tyr)潜在磷酸化位点。以上结果将为今后揭示桃CIPK蛋白的功能提供重要的理论基础。 展开更多
关键词 钙调磷酸酶B类似蛋白互作蛋白激酶 基因家族 进化分析
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巨型辐花海葵荧光蛋白类似物基因的原核表达比较
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作者 涂洪斌 朱俊杰 +3 位作者 杨文利 姜孝玉 陈慧萍 徐安龙 《广州医学院学报》 2005年第3期1-6,共6页
目的:探讨巨型辐花海葵荧光蛋白类似物基因hmGFP的生物学特性及应用的可能性。方法:构建了hmGFP的两个原核表达载体并进行诱导表达。结果:低温下hmGFP获得了功能性表达而发光。深入比较了重组巨型辐花海葵荧光蛋白类似物基因hmGFP在两... 目的:探讨巨型辐花海葵荧光蛋白类似物基因hmGFP的生物学特性及应用的可能性。方法:构建了hmGFP的两个原核表达载体并进行诱导表达。结果:低温下hmGFP获得了功能性表达而发光。深入比较了重组巨型辐花海葵荧光蛋白类似物基因hmGFP在两个表达体系中的表达差异,其中pETTRX-hmGFP的重组蛋白表达水平和可溶性均比pET21b-hmGFP高。结论:对pETTRX-hmGFP的表达条件进行了优化,为下一步hmGFP成熟重组蛋白的纯化及其荧光波谱分析奠定了良好基础。 展开更多
关键词 巨型辐花海葵 荧光蛋白类似基因 原核表达
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白藜芦醇在调控二硫键氧化还原酶类似蛋白基因表达中的作用 被引量:1
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作者 杨文静 方启晨 +3 位作者 张菁 任伟 宋倩倩 贾伟平 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期765-769,共5页
目的探讨白藜芦醇对二硫键氧化还原酶类似蛋白(DsbA-L)基因转录的影响。方法将25μmol/L白藜芦醇加入HepG2细胞和3T3-L1细胞,干预24h后收获细胞,用于后续实验提取RNA和蛋白;以二甲基亚砜(DMSO)处理组作为对照。采用实时荧光定量聚合酶... 目的探讨白藜芦醇对二硫键氧化还原酶类似蛋白(DsbA-L)基因转录的影响。方法将25μmol/L白藜芦醇加入HepG2细胞和3T3-L1细胞,干预24h后收获细胞,用于后续实验提取RNA和蛋白;以二甲基亚砜(DMSO)处理组作为对照。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和Western印迹法检测3T3-L1细胞和HepG2细胞DsbA-L mRNA和蛋白表达水平。以荧光素酶报告基因实验分析白藜芦醇对DsbA-L基因启动子活性的影响。采用电泳迁移率变动分析法(EMSA)检测白藜芦醇对转录因子Sp1与DsbA-L基因内含子1区域Sp1结合位点的结合能力的影响。采用Western印迹法检测Sp1蛋白表达水平。结果在3T3-L1细胞和HepG2细胞中,白藜芦醇处理组DsbA-L蛋白和DsbA-L mRNA的表达水平均显著高于DMSO对照组(P值均<0.05)。白藜芦醇处理组的DsbA-L基因启动子报告基因质粒p(-186to+432)Luc的相对荧光素酶活性显著高于DMSO对照组(P<0.05);与包含该Sp1结合位点的DsbA-L基因启动子报告基因质粒p(-186to+432)Luc相比,不包含该Sp1结合位点的两个报告基因质粒,Sp1位点缺失突变的p(-186to+432)Luc mut和3’端部分缺失的p(-186to+391)Luc在白藜芦醇干预后的相对荧光素酶活性与DMSO对照组的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。与DMSO对照组相比,白藜芦醇处理后转录因子Sp1与DsbA-L基因内含子区DNA特异结合形成的DNA-Sp1复合物的条带灰度减弱。白藜芦醇处理后3T3-L1细胞和HepG2细胞中Sp1的蛋白表达均显著低于DMSO对照组(P值均<0.05)。结论白藜芦醇通过抑制Sp1表达,上调DsbA-L基因的转录,从而促进DsbA-L蛋白的表达。 展开更多
关键词 白藜芦醇 二硫键氧化还原酶类似蛋白基因 启动子 SP1
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沙田柚钙调素结合蛋白(CaMBP)基因的鉴定与序列分析
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作者 罗琼 谭鸿妮 +2 位作者 黄仕莉 刘华英 秦新民 《自然科学》 2017年第2期203-210,共8页
利用高通量测序对沙田柚自交和异交花柱进行转录组测序,通过差异分析得到了沙田柚钙调素结合蛋白(CaMBP)基因序列。采用生物信息学方法,对其编码的蛋白质从序列特征、理化性质、跨膜结构域、高级结构以及功能域等方面进行了预测和分析... 利用高通量测序对沙田柚自交和异交花柱进行转录组测序,通过差异分析得到了沙田柚钙调素结合蛋白(CaMBP)基因序列。采用生物信息学方法,对其编码的蛋白质从序列特征、理化性质、跨膜结构域、高级结构以及功能域等方面进行了预测和分析。结果表明该基因全长为1616 bp,开放阅读框(ORF)全长为1368 bp,编码455个氨基酸,编码蛋白质的分子量为50.11 KDa,理论等电点为5.33。该蛋白质含有一个与钙调素结合蛋白相同的保守结构域。氨基酸序列比对结果显示,其编码的蛋白质与克莱门柚(Citrus clementina)的钙调结合蛋白相似性较高,相似度约为98%。这些分析结果可为今后深入研究该蛋白的结构特征和功能提供参考。 展开更多
关键词 沙田柚 钙调素结合蛋白基因 序列分析
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钙-钙调素对小麦hsp26基因表达的影响 被引量:7
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作者 刘宏涛 赵和 +2 位作者 李冰 孙大业 周人纲 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2001年第7期766-768,共3页
The treatment of wheat ( Triticum aestivum L.) seedlings with CaCl 2 increased mRNA levels of hsp26 gene at 37 ℃ for 1 h, while that with Ca 2+ chelator EGTA decreased the expression of the hsp26 gene. The expressi... The treatment of wheat ( Triticum aestivum L.) seedlings with CaCl 2 increased mRNA levels of hsp26 gene at 37 ℃ for 1 h, while that with Ca 2+ chelator EGTA decreased the expression of the hsp26 gene. The expression of the wheat calmodulin gene CaM12 is rapidly upregulated in wheat seedlings by heat shock at 37 ℃. The heatinduced upregulation of CaM12 occurred earlier than that of the hsp26 gene did. Calmodulin antagonist N6aminohexyl5chloro1naphthalenesulfonamid (W7) inhibited the expression of the hsp26 gene in wheat seedlings at 37 ℃ for 1 h. These results implied that the calciumcalmodulin is probably involved in the signal transduction of the hsp26 gene expression induced by heat shock. 展开更多
关键词 热激蛋白 钙-钙调素 基因表达 小麦
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