昆虫类免疫球蛋白结构和功能研究进展

类免疫球蛋白是在无脊椎动物体内发现的唯一的免疫球蛋白家族成员,它对鳞翅目昆虫自身的免疫起着重要的作用。已有研究表明:类免疫球蛋白只存在于鳞翅目昆虫体内,有可溶性和不溶性两种存在方式,在昆虫体内分别具有不同的功能。可溶性类免疫球蛋白通过一些酶和蛋白的作用对入侵昆虫的细菌和病毒进行免疫防御,而不溶性类免疫球蛋白(即以膜结合蛋白的形式出现)对细胞和细胞黏着以及病毒和细菌入侵细胞有着延缓作用。

家蚕类免疫球蛋白(hemolin)基因的克隆及表达特征和抗菌活性研究

Hemolin是昆虫的一种重要先天性免疫蛋白,属于免疫球蛋白超家族。克隆了家蚕hemolin基因,其序列全长5 100bp,含有5个外显子和4个内含子,基因cDNA编码含410个氨基酸的蛋白质,预测蛋白的分子质量约44.79 kD,pI 5.12。对该基因表达规律和生物学活性的结果研究表明:该基因只在家蚕蛹期脂肪体内特异性转录和表达,并能够被细菌和病毒诱导在幼虫期表达;该基因体外表达获得的重组蛋白具有抗菌生物学活性,能够有效抑制苏云金芽孢杆菌等的生长,由此暗示家蚕Hemolin蛋白可能在蚕体抵御病毒与细菌的感染过程中发挥重要作用。

用KTA explorer 10蛋白纯化系统分离纯化家蚕类免疫球蛋白

类免疫球蛋白(Hemolin)是昆虫的先天性免疫蛋白。为了获取纯度高、具有天然活性的家蚕Hemolin,将被家蚕核型多角体病毒(BmNPV)感染的家蚕蛹进行匀浆处理,离心后对上清液进行DEAE弱阴离子交换层析,进而利用Superdex 200凝胶过滤层析获得家蚕Hemolin的初级纯化产物,经质谱鉴定验证后再利用Superdex 75凝胶过滤层析对初级产物做进一步分离纯化。获得的纯化产物采用SDS-PAGE和Western blot检测到单一的大小约45 kD的蛋白质条带。采用该层析技术与条件能有效制备出纯度较高的具有天然活性的家蚕Hemolin。

椭圆背角无齿蚌(Anodonta woodiana elliptica Heude)血清类免疫球蛋白的初步研究

采用免疫消浊法 ,检测出健康椭圆背角无齿蚌血清中存在着 3种类哺乳动物免疫球蛋白分子 测定了手术创伤前后及不同pH值的水体中类免球蛋白的含量 ,发现 3种类免疫球蛋白分子在损伤后含量均有明显升高 ;环境pH值对类免疫球蛋白基本无影响 .运用硫酸铵沉淀和柱层析法分离纯化了类IgM蛋白 ,并分析了部分性质 .作者认为 。

茶尺蠖类免疫球蛋白基因EoHML的克隆和表达分析

类免疫球蛋白(Hemolin)是一种鳞翅目昆虫特有的免疫相关蛋白,也是唯一的无脊椎动物免疫球蛋白家族成员。本实验应用RACE技术获得了茶尺蠖(Ectropis obliqua Prout)类免疫球蛋白基因的全长c DNA序列,命名为Eo HML(Gen Bank登录号:KM885983),并分析了相关生物信息学特性,检测了病毒感染后基因的表达水平。结果表明,Eo HML基因序列全长1 772 bp,包含1 239 bp的开放阅读框,编码412个氨基酸,预测蛋白分子量大小为45.8 k D,等电点(p I)为8.297,属于典型的分泌型蛋白,且具有昆虫Hemolin基因保守的4个Ig功能区和2个N-glycosylation位点。系统进化分析表明,该蛋白与目前已知的类免疫球蛋白氨基酸序列的亲缘关系都较远,与烟草天蛾(Manduca sexta)类免疫球蛋白氨基酸序列相似度最高,为53%。荧光定量检测结果表明,茶尺蠖核型多角体病毒(Eo NPV)感染茶尺蠖幼虫后该基因表达量显著升高,最高表达量是正常对照的36.5倍,表明茶尺蠖Eo HML基因可能参与了茶尺蠖对Eo NPV的免疫代谢反应。

四十八式太极拳和益气养肺功对人体血清四类免疫球蛋白含量及其影响的研究

本研究以男女各30名为研究对象,男、女各分为两组,每组15人安排每日练习四十八式太极拳或益气养肺功1小时,共练两个月.发现IgG、IgA、IgM、IgE四类免疫球蛋白含量的变化值,均在正常值之内,表明通过各自的练习,均有助于促使人体体液免疫水平的正常化.但练四十八式太极拳和练益气养肺功相比,后者效果略优于前者.

类风湿关节炎患者免疫球蛋白变化及相关因素分析

目的研究类风湿关节炎(RA)患者血清免疫球蛋白(Ig)的变化及与实验室指标相关性。方法选取100例RA患者病历资料,统计其IgM、IgG、IgA值,并与白细胞计数(WBC)、红细胞计数(RBC)、血红蛋白(HB)、血小板计数(PLT)、前白蛋白(PA)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLO)、C3、C4及红细胞沉降率(ESR)、超敏C反应蛋白(CRP)等实验室指标进行相关性分析。结果 (1)RA患者免疫球蛋白IgG异常率最高(40%),其次为IgA(17%),IgM(7%),IgG异常率高于IgA(P<0.05),IgG、IgA同时升高占12%,IgG、IgM同时升高占2%,IgG、IgM、IgA同时升高的占1%。(2)与免疫球蛋白正常组比较,免疫球蛋白升高RA患者Hb、PA与ALB是降低的,TP与GLO以及ESR显著上升;与免疫球蛋白正常组比较,免疫球蛋白下降RA患者类风湿因子(RF)明显升高(P<0.05);(3)相关性分析显示,RA患者IgG与WBC、HB、PA呈负相关,与ALB、GLO、抗链球菌溶血素O(ASO)和ESR呈正相关;IgA与GLO、ASO与ESR呈正相关;IgM与HB、ALB呈负相关,与GLO、RF和ESR呈正相关(P<0.05)。结论 RA的发病过程中以IgG异常为主,并且与RA患者的贫血,炎症严重程度有一定的关系。

反复呼吸道感染患儿免疫球蛋白及IgG亚类的水平

目的:探讨反复呼吸道感染(RRTI)与免疫球蛋白、IgG亚类的关系,为治疗RRTI提供理论依据。方法:采用免疫散射比浊法,检测28例RRTI患儿IgG、IgA、IgM及IgG亚类水平并与对照组比较。结果:RRTI患儿血清IgG、IgA水平与对照组相比差异无显著性,血清IgM水平与对照组相比明显降低(t=-2.524,P<0.05);RRTI组血清IgG2和IgG4水平比对照组明显降低(t=-2.107,-2.72;P<0.05或P<0.01)。结论:RRTI患儿存在一定程度的免疫功能紊乱,检测血清总免疫球蛋白和IgG亚类可提高RRTI的诊断率。

有机镉染毒对小鼠免疫球蛋白及其亚类水平的影响

为研究有机镉化合物对体液免疫功能的影响。有机镉组采用分离纯化的镉金属硫蛋白 (CdMT)作为受试物给予低、中、高剂量 (Cd2 +0 2、0 5、1 0mg kg) ,无机镉组给予CdCl2 (Cd2 +0 5mg kg) ,BALB c小鼠经灌胃染毒 2周和 4周 ,检测血清中免疫球蛋白 (Ig)及其亚类的水平。结果显示染毒 4周后与对照组和脱金属硫蛋白 (Apo MT)组比较 ,CdCl2 组血清IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgA、IgM和IgLλ各指标均显著性降低 (P <0 0 5 ) ;CdMT组IgG2a和IgG2b明显降低 (P <0 0 5 ) ,但无剂量 反应关系 ,其余指标未见显著性差异 (P >0 0 5 )。结果表明有机镉CdMT可诱导体液免疫功能抑制 ,但明显轻于无机镉作用 。

儿童反复呼吸道感染与血清免疫球蛋白G亚类及IgA亚类缺陷

目的 探讨儿童反复呼吸道感染 (RRTI)的病因。方法 采用径向免疫扩散法检测血清免疫球蛋白 (Ig)G亚类、IgA亚类和T细胞亚群的变化。选择RRTI患儿 42例与同年龄的健康儿童以配对方式进行对照观察。结果 RRTI组检出IgG亚类缺陷 2 0例 ,占 47.6 2 % ,以IgG2 和IgG4 缺陷为主 ;IgA亚类缺陷 17例 ,占40 .47% ,以IgA1缺陷为主 ;CD+ 3 、CD+ 4细胞及CD+ 4/CD+ 8显著低于对照组 ,P均 <0 .0 0 1。结论 IgG。

类风湿关节炎患者CD4^+、CD8^+T细胞及免疫球蛋白的检测及分析

目的探讨类风湿性患者血清中CD4+、CD8+T细胞状态及免疫球蛋白的变化来分析RA的免疫学发病机制,为RA的临床治疗提供理论依据。方法采用四色流式细胞术(multis color flow cytometry),分析RA患者CD4+、CD8+T细胞状态;采用免疫速率比浊法检测患者的免疫球蛋白水平。结果与健康对照相比,RA患者外周血CD4+T细胞百分率显著升高(P<0.01),CD8+T细胞百分率则无明显变化(P>0.05),CD4+/CD8+比例明显升高(P<0.05),患者血清免疫球蛋白IGG、IGA、IGM水平显著高于健康对照组(P<0.01)。结论类风湿关节炎患者细胞免疫和体液免疫功能紊乱。

静脉注射免疫球蛋白对川崎病患儿T淋巴细胞亚群水平的影响

【目的】探讨静脉注射免疫球蛋白对川崎病(KD)患儿治疗前后T淋巴细胞亚群水平的影响。【方法】选取2018年10月至2020年10月本院收治96例KD患儿,根据KD患儿发病3个月后冠状动脉损伤情况将其分为预后不良组和预后良好组。采用免疫散射比浊法检测KD患儿血清免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)水平,采用流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析T淋巴细胞亚群对KD患儿预后的预测价值。【结果】KD患儿治疗后血清IgG、IgA、IgM水平低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05)。KD患儿治疗后外周血CD3^(+)、CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)和CD4^(+)/CD8^(+)均低于治疗前(P<0.05)。KD患儿治疗后伴有冠状动脉损伤28例(29.17%),低于其治疗前的62例(64.58%),差异有统计学意义(P<0.001)。预后不良组CD3^(+)、CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)和CD4^(+)/CD8^(+)高于预后良好组(P<0.05)。CD3^(+)、CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)联合检测时的AUC高于其单独检测(P<0.05)。【结论】静脉注射免疫球蛋白治疗可以调节T淋巴细胞亚群水平,检测KD患儿体内T淋巴细胞亚群水平对KD患儿预后具有良好的预测价值。

白细胞免疫球蛋白样受体A3在类风湿关节炎患者外周血CD14^+单核细胞中的表达

目的:分析白细胞免疫球蛋白样受体A3(LILRA3)在类风湿关节炎(RA)患者外周血CD14+单核细胞中的表达。方法:收集2017年2至8月在浙江大学医学院附属第二医院风湿科住院治疗的RA患者53例和21名该院健康体检者的资料。流式细胞术检测CD14^+单核细胞亚群LILRA3表达,并分析其与RA患者的临床特征、实验室指标、自身抗体和疾病活动度的关系。结果:RA患者外周血CD14+单核细胞中LILRA3表达水平较健康对照组升高(P <0. 01)。LILRA3表达与RA患者压痛关节数、肿胀关节数、红细胞沉降率呈正相关(r=0. 280、0. 371、0. 341,P <0. 05或P <0. 01),但与年龄、病程、Sharp评分、C反应蛋白、血常规及免疫球蛋白等指标均无相关性(均P> 0. 05)。类风湿因子和抗环瓜氨酸肽抗体阳性患者LILRA3的表达率高于阴性患者(均P <0. 05)。以28处关节疾病活动指数(DAS28) 5. 1分作为疾病活动度分组的依据,高疾病活动度组LILRA3表达率较中低疾病活动度组升高,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论:RA患者外周血CD14+单核细胞中LILRA3表达升高,且与疾病活动度相关。

手足口病患儿免疫球蛋白IgG亚类和补体C3、C4及C反应蛋白水平分析

目的:探讨手足口病患儿免疫球蛋白IgG亚类和补体C3、C4及C反应蛋白(CRP)水平的变化及临床意义。方法:选取重型手足口病患儿103例作为重型组,普通手足口病患儿301例作为普通组,另选取同期健康体检的正常儿童50名作为对照组,检测3组免疫球蛋白IgG亚类和补体C3、C4及CRP水平。结果:重型组IgG1、IgG3和补体C3、C4水平明显低于对照组和普通组(P<0.01),CRP水平均明显高于对照组和普通组(P<0.01),普通组IgG1、IgG2、IgG3、IgG4和补体C3、C4及CRP水平与对照组差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:重型手足口病患儿体液免疫应答存在异常,患儿可在病毒感染的基础上继发细菌感染,联合检测免疫球蛋白IgG亚类和补体C3、C4及CRP水平对手足口病患儿病情进展具有一定的临床指导意义。

LTSE及LCBDE对胆总管结石伴胆囊结石患者血清免疫球蛋白及炎症因子水平的影响

【目的】探讨腹腔镜下经胆囊管取石术(LTSE)及腹腔镜下胆总管切开取石术(LCBDE)对胆总管结石伴胆囊结石患者血清免疫球蛋白及炎症因子水平的影响。【方法】回顾性分析2019年1月至2022年1月本院收治的50例胆总管结石伴胆囊结石患者的临床资料,根据手术方法的不同将其分为观察组(行LTSE及LCBDE治疗)和对照组(开腹胆总管切开取石术联合胆囊切除术),每组25例。比较两组手术临床指标手术时间、切口长度、术中出血量、肠胃恢复时间、住院时间,比较两组手术前后血清免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)和免疫球蛋白A(IgA)水平及炎症因子[C反应蛋白(CRP)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平,统计两组术后并发症发生情况。【结果】观察组手术时间、切口长度、肠胃恢复时间、住院时间均短于对照组(P<0.05),术中出血量低于对照组(P<0.05)。观察组术后IgG、IgM、IgA水平与术前比较,差异无统计学意义(P>0.05);对照组术后IgG、IgM、IgA水平低于术前(P<0.05),观察组术后IgG、IgM、IgA水平高于对照组(P<0.05)。两组术后血清CRP、IL-6水平高于术前,IL-10、TNF-α水平低于术前,差异有统计学意义(P<0.05);观察组术后CRP、IL-6水平低于对照组(P<0.05),IL-10水平高于对照组(P<0.05),TNF-α水平与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组并发症发生率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】LTSE及LCBDE治疗胆总管结石伴胆囊结石临床安全性较好,对机体免疫功能影响较小,患者炎症反应较轻,值得临床借鉴。

人类重组免疫球蛋白λ轻链022与TOM1基因在2型糖尿病胰岛素抵抗患者网膜脂肪组织的表达

目的:探讨人类重组免疫球蛋白λ轻链(HSIGVL)022和TOM1基因在2型糖尿病胰岛素抵抗(T2DM-IR)患者网膜脂肪组织表达水平并鉴定HSIGVL022蛋白表达。方法:取2型糖尿病伴胰岛素抵抗(T2DM-IR组)与非糖尿病无胰岛素抵抗者(对照组)网膜脂肪组织,用荧光定量RT-PCR技术测定HSIGVL022和TOM1 mRNA的表达量,用免疫组化方法鉴定HSIGVL022蛋白表达。结果:荧光定量RT-PCR显示HSIGVL022和TOM1 mRNA的表达量T2DM-IR组和对照组分别为(34 140±6 160)(、4 440±617)和(5 930±661)(、1 360±82)拷贝/每百万看家基因(P<0.05);HSIGVL022较TOM1表达量高(P<0.01),且与HOMA-IR呈直线相关(P<0.05);免疫组化显示HSIGVL022蛋白在T2DM-IR组和对照组阳性率分别为(12.43±2.41)%(、2.31±0.48)%,强阳性率分别为(6.62±1.69)%(、2.12±0.34)%,P<0.05。结论:HSIGVL022和TOM1在人网膜脂肪组织中均有表达,HSIGVL022表达量较高;在T2DM-IR者中均呈上调表达,HSIGVL022蛋白表达相应增高;HSIGVL022 mRNA表达量与HOMA-IR呈直线相关;这2条基因可能与T2DM-IR有关。

免疫球蛋白与超敏C反应蛋白联合检测在幼儿手足口病早期诊断中的应用价值

目的探讨免疫球蛋白(Ig)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)联合检测在幼儿手足口病早期诊断中的应用。方法回顾性选取我院收治的手足口病患儿43例作为观察组,时间为2020年10月至2022年5月,对其临床基本资料进行分析与整理,依据患儿病情严重的程度将观察组分为轻症型23例、重症型20例;并选取同期健康体检儿童41名作为对照组。对所有受试者血清IgG、IgA、IgM、hs-CRP水平进行检测。对比观察组与对照组Ig及hs-CRP水平,轻症型、重症型患儿Ig及hs-CRP水平,Ig、hs-CRP水平单独检验与联合检验幼儿手足口病的检出结果及对应的诊断效能。结果与对照组进行比较,观察组血清IgG、IgA水平处于较低水平,血清IgM、hs-CRP水平则相对更高;与轻症型患儿进行比较,重症型患儿的血清IgG、IgA水平相对较低,血清IgM、hs-CRP水平则处于更高水平;与Ig、hs-CRP单独检查方式相比,Ig联合hs-CRP检查幼儿手足口病的灵敏度、准确度均相对较高,差异有统计学意义(P<0.05)。经Ig检查后,有32例为真实手足口病患儿,经hs-CRP检查后,有33例为真实手足口病患儿,经Ig联合hs-CRP检查后,有40例为真实手足口病患儿。结论相较于Ig、hs-CRP二者单独检查,Ig联合hs-CRP检查幼儿手足口病能明显提高临床诊断的灵敏度、准确度,进而具有较高的诊断价值,可作为今后对幼儿手足口病检查诊断的辅助检查方式。

急性时相反应蛋白SAA和CRP对川崎病静脉注射免疫球蛋白无应答的预测价值

目的探讨急性时相反应蛋白血清淀粉样蛋白A(SAA)和C反应蛋白(CRP)对川崎病(KD)患儿静脉注射免疫球蛋白(IVIG)无应答的预测价值。方法根据IVIG无应答的定义将358例KD患儿分为IVIG无应答组(41例)和IVIG应答组(317例)。检测血清中SAA、CRP水平并计算SAA/CRP的值,比较2组患儿IVIG治疗前后的临床和实验室检测指标。二分类Logistic回归分析IVIG无应答的影响因素,通过受试者工作特征(ROC)曲线探讨SAA、CRP对预测IVIG无应答的临床价值。结果IVIG无应答组CRP、SAA、总胆红素、丙氨酸转氨酶和天冬氨酸转氨酶水平高于IVIG应答组(P<0.05),淋巴细胞计数、血小板计数、血清钠和使用IVIG前发热时间低于IVIG应答组(P<0.05)。二分类Logistic回归分析显示,CRP(OR=1.008,95%CI:1.001~1.015)、SAA(OR=1.002,95%CI:1.001~1.003)、总胆红素(OR=1.030,95%CI:1.009~1.051)、血清钠(OR=0.862,95%CI:0.762~0.975)、淋巴细胞计数(OR=0.733,95%CI:0.567~0.947)和IVIG前发热时间(OR=0.688,95%CI:0.513~0.922)是IVIG无应答的独立影响因素(P<0.05)。治疗后,IVIG无应答组冠状动脉病变发生率高于IVIG应答组(P<0.05)。ROC曲线分析显示,SAA和CRP预测IVIG无应答的最佳截断值分别为252.45 mg/L和82.80 mg/L,约登指数分别为0.325和0.382,两者联合预测的约登指数为0.423。SAA、CRP及两者联合预测IVIG无应答的ROC曲线下面积分别为0.681、0.703和0.761,联合预测效能良好。结论急性时相反应蛋白SAA和CRP升高是KD患儿IVIG无应答的危险因素,联合检测可辅助预测IVIG的无应答。

人血白蛋白及人免疫球蛋白类制品的纯度测定

目的:比较琼脂糖凝胶电泳法、毛细管区带电泳法与中国药典品种项下规定的醋酸纤维素薄膜电泳法测定人血白蛋白及人免疫球蛋白类制品纯度的结果差异。方法:将人血白蛋白及人免疫球蛋白类制品均制备成蛋白浓度为5%的溶液,分别采用全自动醋酸纤维素薄膜电泳仪、全自动琼脂糖凝胶电泳仪及全自动毛细管电泳仪进行测定,均以峰面积归一化法计算纯度。结果:除毛细管区带电泳法测得的人血白蛋白大部分结果不符合中国药典2015年版品种项下的标准限度外,另外两种方法测得的人血白蛋白结果及人免疫球蛋白类制品3种测定方法的结果均分别符合中国药典2015年版品种项下的标准限度。结论:初步判定琼脂糖凝胶电泳法和毛细管区带电泳法均可用于人血白蛋白及人免疫球蛋白类制品的纯度的测定。

外周血miR-155水平对免疫球蛋白治疗川崎病患儿临床疗效的预测价值

【目的】探讨外周血miR-155水平对免疫球蛋白治疗川崎病(KD)患儿临床疗效的预测价值。【方法】选取2018年10月至2021年3月本院收治的187例KD患儿为研究对象,根据治疗后14 d内临床疗效将其分为敏感组(n=162)和无反应组(n=25)。分析影响KD患儿临床疗效的因素,分析治疗前外周血miR-155相对表达量对KD患儿免疫球蛋白治疗临床疗效的预测价值。【结果】187例KD患儿经治疗后有25例(13.37%)出现免疫球蛋白无反应情况。无反应组丙氨酸转氨酶、天冬氨酸氨基转移酶、γ-谷氨酰转肽酶、总胆红素、超敏C反应蛋白、红细胞沉降率、肌钙蛋白I、氨基末端脑钠肽前体(NT-proBNP)及miR-155相对表达量均高于敏感组(P<0.05)。Logistic回归分析显示,miR-155相对表达量、NT-proBNP是影响KD患儿免疫球蛋白治疗临床疗效的相关因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,外周血miR-155相对表达量评估KD患儿免疫球蛋白治疗的临床疗效的最佳截断值、灵敏度、特异度、曲线下面积分别为3.01、76.00%、80.25%、0.785(P<0.05)。【结论】KD患儿免疫球蛋白无反应发生风险高,miR-155与KD患儿免疫球蛋白治疗临床疗效有关,miR-155预测KD患儿免疫球蛋白治疗临床疗效的效能较高。