类固醇受体辅助活化因子-3通过PI3K/Akt/mTOR信号通路参与子痫前期发病机制中的作用研究

目的:探讨类固醇受体辅助活化因子-3(steroid receptor coactivator-3,SRC-3)参与人脐静脉内皮细胞株(HUVECs)受损的信号通路,及其在子痫前期发病机制中的作用。方法:收集2014年10月至2015年10月在重庆医科大学附属第一医院行选择性剖宫产手术的正常足月妊娠组(31例)以及子痫前期组(29例)的胎盘组织。使用Western blot检测2组胎盘组织SRC-3的表达。脐静脉内皮细胞株(HUVECs)分为4个处理组:正常常氧对照(N)培养组、缺氧/复氧(H/R)培养组、SRC-3 sh RNA慢病毒敲降(sh SRC-3)培养组以及PI3K特异性抑制剂(LY294002)培养组。使用Western blot检测内皮细胞中SRC-3、p-Akt(Ser473)、Akt、p-m TOR(Ser2481)、m TOR的表达。使用细胞管腔成型实验检测内皮细胞血管形成能力。结果:SRC-3在子痫前期胎盘组织蛋白水平低于正常足月胎盘(t=3.501,P=0.013)。细胞学实验中,与N组相比,H/R组、sh SRC-3组及LY294002组HUVECs的SRC-3(t=4.236,P=0.007;t=5.469,P=0.002;t=4.165,P=0.008)、p-Akt(Ser473)/Akt(t=5.214,P=0.002;t=5.188,P=0.002;t=7.054,P=0.000)、p-m TOR(Ser2481)/m TOR(t=4.832,P=0.003;t=5.695,P=0.001;t=5.699,P=0.001)表达降低。H/R组、sh SRC-3组、LY294002组HUVECs血管形成能力低于N组(t=5.268,P=0.002;t=4.648,P=0.004;t=4.087,P=0.009)。结论:SRC-3可能通过PI3K/Akt/m TOR通路参与子痫前期的发病机制。

类固醇受体辅活化子-3蛋白在巨噬细胞炎症反应中的作用研究

目的探讨类固醇受体辅活化子（SRC）-3蛋白在脂多糖（LPS）诱导腹腔巨噬细胞（peritoneal macrophages，PMφ）炎症反应中的作用。方法健康SPF级野生型（SRC-3＋/＋）小鼠、SRC-3基因敲除（SRC-3-/-）小鼠各5只，分别分离和原代培养PMφ，并分为SRC-3＋/＋组和SRC-3-/-组。收集并调整细胞浓度为1×10^6／mL，接种于6孔板，1mL／μL，给予10μg/mL LPS刺激，分别在刺激前（N）、刺激后4h和12h收集培养上清和PMφ。测定培养上清中TNF-α、IL-1β、IL-6、高迁移率族蛋白B1（HMGB1）和NO的浓度，PMφ的p65、c—Jun和iNOS的表达及NF—κB和AP-1的DNA结合活性。结果PMO经10μg／mLLPS刺激4h和12h后，培养上清液中分泌的TNF-α、IL-1β、IL-6和NO均显著上升，但在相应时间点SRC-3-/-组显著低于SRC-3＋/＋组，当LPS刺激4h后，两组PMO培养上清液中HMGBl的表达水平与刺激前比较差异无统计学意义（P〉0．05），刺激12h后SRC-3＋/＋组有所升高，而SRC-3-/-组与刺激前比较差异无统计学意义（P〉0．05）；LPS刺激4h和12h后PMφ的p65和C—Jun表达显著增加，在相应时间点SRC-3-/-组的p65显著高于SRC-3＋/＋组，而SRC-3-/-组C—Jun却显著低于SRC-3＋/＋组；LPS刺激4h和12h后，SRC-3＋/＋组的iNOS表达逐渐增加，而SRC-3-/-组未见变化；LPS刺激4h和12h后NF—κB和AP-1的DNA结合活性均显著增高，在相应时间点SRC-3-/-组均显著低于SRC-3＋/＋组。结论SRC-3可能通过调节iNOS、NF—κB和AP-1的表达及活性来调控PMφ的炎症反应。

SRC-3、IGF-1在子宫肌瘤组织中的表达及意义

目的:研究SRC-3、IGF-1蛋白及基因在子宫肌瘤中的表达,探讨其与子宫肌瘤发生发展的关系。方法:采用免疫组织化学SP法、RT-PCR和Western blot分别从细胞、基因及蛋白水平检测SRC-3和IGF-1在子宫肌瘤及瘤旁正常组织中的表达。结果:SRC-3蛋白的阳性表达主要定位于细胞胞浆中,少数位于细胞核。IGF-1蛋白的阳性表达定位于细胞胞浆中。SRC-3、IGF-1蛋白在子宫肌瘤中的阳性表达率(67.65%,80.88%)均显著高于瘤旁正常组织(16.18%,27.94%)(P均<0.05)。SRC-3 mRNA、IGF-1 mR-NA在子宫肌瘤中的表达水平均显著高于瘤旁正常组织(P均<0.05)。子宫肌瘤中SRC-3蛋白的表达与IGF-1蛋白的表达呈正相关(r=0.303,P<0.05)。结论:SRC-3、IGF-1与子宫肌瘤的发生发展有关。SRC-3可能参与调节IGF-1介导的信号传导通路,促进子宫肌瘤的发生发展,有望为子宫肌瘤的临床治疗提供新的研究方向。

子宫腺肌病患者子宫内膜组织中ER、PR、SRC-3表达变化及意义

目的观察子宫腺肌病(AM)患者子宫内膜组织中雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、类固醇受体辅助活化因子3(SRC-3)的表达变化,探讨其临床意义。方法采用组织芯片技术及免疫组化法检测42例AM患者异位内膜组织(异位内膜组)和15例子宫肌瘤患者非瘤区子宫内膜组织(对照内膜组)的ER、PR、SRC-3。结果与对照内膜组比较,异位内膜组ER、PR表达降低,SRC-3表达升高,P均<0.05;对照内膜组增殖期ER、PR、SRC-3表达均高于分泌期(P均<0.05),异位内膜组增殖期、分泌期ER、PR、SRC-3表达无明显差异(P均>0.05);异位内膜组分泌期ER表达低于对照内膜组分泌期(P<0.05)。异位内膜组ER与SRC-3表达呈负相关(r=-0.693,P<0.01)。结论 AM患者子宫内膜组织中ER、PR低表达、SRC-3高表达,三者可能与AM的发生、发展有关。

绝经后妇女血清SRC-3表达水平与骨量丢失程度的相关性分析

目的:探讨绝经后妇女血清类固醇受体辅助激活因子3(SRC-3)表达水平与骨量丢失程度的相关性。方法:选择2012年6月至2013年9月于广州军区总医院就诊的绝经后骨质疏松或骨量减少患者58例和健康绝经后妇女19例。DEXA测量腰椎和股骨颈骨密度,ELISA检测血清SRC-3表达水平,ROC曲线分析骨质疏松症的临界值。结果:与正常组相比,骨量减少组和骨质疏松组血清SRC-3水平明显下降(均P<0.001)。血清SRC-3水平与骨密度分级呈负相关(r=-0.543,P<0.001)。ROC曲线显示血清SRC-3浓度值0.297 ng/m L是骨质疏松的诊断临界值。Spearman相关分析显示血清SRC-3水平与BMI(r=0.395,P<0.001)和腰椎BMD(r=0.503,P<0.001)呈正相关。结论:SRC-3可能是影响绝经后妇女腰椎骨量丢失的重要因子。

SRC-3与乳腺癌的关系研究进展

类固醇受体辅助活化因子-3（SRC-3）是p160类固醇受体辅助活化因子SRC基因家族的成员,与体内多种肿瘤的形成密切相关。SRC-3不仅可以通过多种信号转导通路参与乳腺癌的发生,还与部分乳腺癌患者产生内分泌药物治疗抵抗的分子机制有关。临床治疗研究中发现,SRC-3和人表皮生长因子受体-2的共同过度表达常预示着乳腺癌患者较差的生存率。因此,SRC-3有望成为抗癌治疗的新靶点,解决目前内分泌治疗的药物抵抗问题,给更多乳腺癌患者带来福音。

绝经后骨质疏松症患者骨组织中SRC-3和PGC-1α的表达及意义

目的探讨绝经后骨质疏松症患者骨组织中类固醇受体辅助激活因子3(steroid receptor coactivator-3,SRC-3)和过氧化物酶体增殖物活化受体γ协同刺激因子-1α(peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1α,PGC-1α)的表达及意义。方法 2012年6月~2013年9月,选择于广州军区广州总医院关节外科住院的行全髋关节置换患者20例,术前双能X线(DXA)骨密度仪测量患者腰椎1~4(L1-4)骨密度,根据WHO颁布的诊断标准,分为试验组(腰椎BMD T评分<-2.5,10例)和对照组(T评分>-1.0,10例),术中取一侧开路器切除的粗隆部位松质骨。荧光实时定量RT-PCR和Western blotting分别检测骨组织中SRC-3和PGC-1α等m RNA和蛋白的表达。结果与对照组相比,试验组骨组织中SRC-3,PGC-1α,CBP/P300,P/CAF m RNA表达水平均下降(P值分别为<0.001,0.036,0.003,0.027),OPN m RNA表达水平升高(P=0.004)。Osteocalin m RNA表达在试验组和对照组中无统计学差异(P>0.05)。试验组SRC-3和PGC-1α蛋白相对表达量较对照组明显下调,分别下调了(53.23±0.55)%(P=0.037)和(72.17±0.64)%(P=0.003)。结论 SRC-3和PGC-1α可能参与绝经后骨质疏松症发病的病理过程。

子宫腺肌病组织中SRC-3、MMP-9表达变化及意义

目的观察子宫腺肌病(AM)组织中受体辅活化因子-3(SRC-3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达变化,并探讨其意义。方法选取手术切除的AM异位病灶组织42例为AM组;选择子宫肌瘤患者手术切除的非瘤区正常子宫内膜组织10例为对照组。采用组织芯片技术及免疫组化SP法检测两组子宫内膜组织中的SRC-3和MMP-9。结果 SRC-3、MMP-9在AM组子宫内膜组织的表达显著高于对照组(P均<0.01)。对照组增殖期子宫内膜组织中SRC-3、MMP-9的表达显著高于其分泌期(P均<0.05);AM组增殖期与分泌期异位子宫内膜组织中SRC-3、MMP-9的表达水平相近(P均>0.05),且均高于相应期别的对照组(P均<0.05)。AM组异位子宫内膜组织中SRC-3与MMP-9的表达呈正相关(r=0.720,P<0.05)。结论 SRC-3与MMP-9在AM异位子宫内膜组织中的表达增高,二者可能在AM的发生发展中起促进作用。

FBXW7和SRC-3在乳腺癌中的表达及临床意义

目的:探索F-BOX家族F框/WD-40域蛋白7(FBXW7)、类固醇受体辅助活化因子3(SRC-3)在乳腺癌中是否表达及期在临床中意义。方法:用免疫组织化学法检测FBXW7、SRC-3在乳腺癌及正常乳腺组织中是否有表达。结果:FBXW7在乳腺癌的表达率是64.00%、FBXW7在正常乳腺组织中的表达率是86.00%,乳腺癌与癌旁乳腺有差异且有统计学意义(P<0.01),而且与乳腺癌临床分期,淋巴结转移有关(P<0.05);SRC-3在乳腺癌中的表达为70.00%、SRC-3在正常乳腺组织中的表达为52.00%,乳腺癌与癌旁乳腺有差异且有统计学意义差异有统计学意义(P<0.01)同时与乳腺癌临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05);FBXW7与SRC-3之间存在负相关关系(r=-0.5856,P<0.01)。结论:FBXW7表达水平的下降和SRC表达水平的增高在乳腺癌的发展进程中都发挥了重要作用。联合检测FBXW7、SRC-3两因子将有助于提前预测乳腺癌进展和转移情况,它们还可能为乳腺癌的三级预防及找寻癌症分子靶向治疗的新靶点提供重要的参考价值。

SRC-3、IGF-1R在乳腺癌中的表达及临床意义

目的:探索类固醇受体共激活因子3(SRC-3)、胰岛素生长因子-1受体(IGF-1R)在乳腺癌发生发展的关系及其意义。方法:用免疫组化检测SRC-3、IGF-1R在47例乳腺癌组织及其癌旁组织中的表达情况。结果:SRC-3阳性表达率在乳腺癌组织中是66.00%,而在正常乳腺组织中是36.20%,且SRC-3在乳腺癌组织与癌旁正常乳腺组织表达差异有统计学意义(P<0.01),并且与乳腺癌临床分期,组织分化、淋巴结转移有关(P<0.05);IGF-1阳性表达率在乳腺癌中是为76.60%、在正常乳腺组织中为48.90%,且IGF-1在乳腺癌与癌旁正常乳腺组织的表达差异有统计学意义(P<0.01),同时与乳腺癌临床分期、组织分化及淋巴结转移有关(P<0.05);在乳腺癌组织中SRC-3与IGF-1R之间的关系呈现正相关(r=0.769,P<.001)。结论:SRC-3过度表达和IGF-1R表达水平的增高在乳腺癌的发生发展过程中都起到重要作用。联合检测SRC-3及IGF-1R两因子将有助于评估乳腺癌进展及转移情况,它们很可能成为乳腺癌的三级预防及寻找分子靶向治疗的提供重要的参考价值。

补肾壮骨颗粒对去势大鼠骨密度和SRC-3及PGC-1α表达的影响

目的研究补肾壮骨颗粒对去势大鼠骨密度和血清、骨髓组织中类固醇受体辅助激活因子3(SRC-3)及过氧化物酶体增殖物活化受体γ协同刺激因子-1α(PGC-1α)表达的影响。方法将40只大鼠随机分为假手术组、模型组、中药组、阿仑膦酸钠组,每组10只。模型组、中药组、阿仑膦酸钠组均建立去卵巢骨质疏松模型,造模4 d后,中药组给予补肾壮骨颗粒2.5 mg/kg灌胃,阿仑膦酸钠组给予阿仑膦酸钠7 mg生药/kg灌胃,假手术组和模型组给予10 mL/kg生理盐水灌胃。连续干预12周后取血,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测4组大鼠血清SRC-3及PGC-1α水平;处死大鼠,运用小动物双能X射线骨密度仪测量4组大鼠股骨离体骨密度(BMD),实时荧光定量PCR法检测4组大鼠骨髓组织中SRC-3 mRNA及PGC-1αmRNA表达量。结果模型组、中药组、阿仑膦酸钠组血清SRC-3、PGC-1α水平及SRC-3 mRNA、PGC-1αmRNA表达量均明显低于假手术组(P均<0.05),中药组均明显高于模型组和阿仑膦酸钠组(P均<0.05);阿仑膦酸钠组SRC-3 mRNA表达量明显高于模型组(P<0.05),而血清SRC-3、PGC-1α水平和PGC-1αmRNA表达量与模型组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。中药组和模型组大鼠骨密度均明显低于假手术组(P均<0.05),中药组和阿仑膦酸钠组骨密度均明显高于模型组(P均<0.05),中药组与阿仑膦酸钠组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论补肾壮骨颗粒可能通过提高去势大鼠血清及骨髓组织中SRC-3和PGC-1α分子及基因表达水平而促进骨形成,从而提高骨密度。

骨质疏松椎体压缩性骨折患者SRC-3、PGC-1α水平与骨密度的相关性

目的:探讨骨质疏松椎体压缩性骨折(OVCF)患者血清SRC-3、PGC-1α的水平及其与骨密度(BMD)的相关性。方法:将2014年5月~2016年5月我院骨科收治的64例OVCF患者作为观察组,同期匹配选择64例骨质疏松症且未合并骨折者作为对照A组及64例健康体检者作为对照B组。X线骨密度仪测定患者的腰椎骨密度,ELISA法测定患者血清SRC-3、PGC-1α的水平。结果:观察组患者的BMD值低于对照A组和对照B组,差异有统计学意义(P<0.05),对照A组的BMD值低于对照B组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组患者的血清SRC-3、PGC-1α水平分别为(0.186±0.056)ng/m L、(1.84±0.53)ng/m L,均低于对照A组[(0.347±0.068)ng/m L、(2.95±0.47)ng/m L]和对照B组[(0.713±0.072)ng/m L、(4.88±0.71)ng/m L],差异均有统计学意义(P<0.05),对照A组的SRC-3和PGC-1α水平均低于对照B组,差异有统计学意义(P<0.05)。OVCF患者的BMD值与血清SRC-3和PGC-1α水平均呈正相关(r=0.437,0.526,P<0.05)。结论:OVCF患者的血清SRC-3和PGC-1α水平较低,且BMD与其密切相关,SRC-3和PGC-1α可能参与了OVCF的病理生理过程。

胶质瘤细胞中IL-1RAP的作用及其与STAT3的关系

目的研究白介素1受体辅助蛋白(IL-1RAP)在胶质瘤中的作用及其与转录活化因子3(STAT3)的关系。方法构建IL-1RAP表达载体,转染胶质瘤细胞系U251,利用流式±细胞仪检测转染IL-1RAP对U251细胞周期及凋亡影响。利用免疫共沉淀钓取STAT3,检测转染IL-1RAP后STAT3的表达情况,并利用免疫荧光方法检测IL-1RAP与STAT3的共定位情况。结果 IL-1RAP蛋白定位于胶质瘤细胞核。与转染空质粒对照组相比,IL-1RAP有明显的促进肿瘤细胞凋亡[(52.10±5.51)%vs.(7.57±0.54)%,P<0.05]和周期阻滞作用[(68.22±1.96)%vs.(38.31±7.22)%,P<0.05]。通过免疫共沉淀和共定位证实IL-1RAP和STAT3可以相互作用。结论 IL-1RAP有抑制胶质瘤细胞增殖、促进细胞凋亡的作用。IL-1RAP可能通过与STAT3相互作用进入细胞核发挥促进细胞凋亡和抑制细胞周期的作用。

FBXW7和SRC-3在胃癌中的表达及临床意义

目的研究F框/WD-40域蛋白7(FBXW7)和类固醇受体辅助活化因子3(SRC-3)在胃癌中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学法检测FBXW7和SRC-3在胃癌及正常黏膜组织中的表达。结果 FBXW7在胃癌和正常黏膜组织中的表达率分别为46.7%和90.0%,二者差异有统计学意义(P<0.01),且与胃癌的分化程度、淋巴结转移及临床分期有关(P<0.05);SRC-3在胃癌和正常黏膜组织中的表达率分别为48.3%和10.0%,二者差异有统计学意义(P<0.01),且与胃癌的浸润深度、淋巴结转移及临床分期有关(P<0.05);FBXW7与SRC-3之间存在着负相关关系(r=-0.370,P=0.004)。结论 FBXW7和SRC-3有可能成为胃癌早期诊断、判断预后的新指标及治疗靶点。

SRC-3及FBXW7在宫颈癌中的表达及临床意义

目的初步研究宫颈癌中类固醇受体辅助活化因子-3（SRC-3）、F框／WD40域蛋白7（FBXW7）的表达及临床意义。方法应用免疫组化SP法检测60例宫颈癌组织、20例正常宫颈组织中SRC3、FBXW7的表达情况。结果SRC-3在宫颈癌、正常宫颈组织中的表达率分别为33．3％、10．0％，两者间比较差异无统计学意义（P〉0．05），但随着肿瘤分化程度的逐渐降低，SRC-3的表达水平有不断增高的趋势。SRC-3的阳性表达率与宫颈癌的分化程度、临床分期、淋巴结转移有相关性。FBXW7在宫颈癌、正常宫颈组织中的表达率分别为48．3％、90．0％，两者之间的差异有统计学意义（P〈0．05），且与宫颈癌的分化程度、临床分期、淋巴结转移有关（P〈0．05）；SRC-3与FBXW7之间存在着负相关关系（r=-0．259，P=0．045）。结论SRC-3、FBXW7有可能成为宫颈癌早期诊断、判断预后的新指标及治疗靶点。

Th17细胞分化和功能调控研究的新进展

辅助性T细胞家族新成员Th17细胞亚群在机体促炎症反应机制中发挥重要功能,尤其是促进多种自身免疫疾病发病的重要效应细胞;因此该细胞亚群的分化和免疫功能调控研究具有重要的基础和临床医学价值。本文就影响Th17细胞分化的细胞因子、转录因子、芳香烃受体、视黄酸和溴氯哌喹酮等的最新进展进行了简要综述,以期加深对Th17细胞分化和免疫功能调控机制的了解,拓宽进一步深入研究的视野和思路。

山茱萸总苷及山茱萸多糖对急性心肌梗死大鼠心肌保护作用的影响

目的观察山茱萸总苷及山茱萸多糖对急性心肌梗死(acute coronary infarction,AMI)心肌线粒体保护作用及对糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)表达的影响。方法采用结扎冠状动脉左前降支制备AMI大鼠模型,按照随机数字表法分为假手术组、模型组、山茱萸总苷预防给药组(总苷预防组)、山茱萸多糖治疗组(多糖治疗组)和山茱萸总苷治疗组(总苷治疗组),每组12只,除正常组和模型组给予生理盐水灌胃外,其余各给药组分别灌胃给予对应的药物治疗。进行超声心动图及血流动力学检测评价心功能;Masson三色染色法进行心肌梗死面积测定;荧光实时定量PCR法检测心肌组织线粒体发生相关基因过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α(αsubunit of peroxisome proliferators-activated receptor-γcoactivator-1,PGC-1α)、PGC-1β、心肌细胞核呼吸因子(nuclear respiratory factor-1,NRF-1)和GSK-3βmRNA表达。结果与假手术组比较,模型组心肌梗死面积增大,心功能下降,PGC-1α、PGC-1β和NRF-1 mRNA表达降低,GSK-3βm RNA表达升高(均P<0.05)。与模型组比较,总苷预防组、总苷治疗组和多糖治疗组心肌梗死面积缩小,心功能改善,NRF-1 mRNA表达升高,总苷预防组和多糖治疗组PGC-1α和PGC-1βmRNA表达升高,多糖治疗组GSK-3βmRNA表达降低(均P<0.05)。与总苷预防组比较,总苷治疗组短轴缩短率(fractional shortening,FS)、主动脉收缩压(aortic systolic blood pressure,SBP)升高,多糖治疗组射血分数(ejection fraction,EF)降低,总苷治疗组和多糖治疗组PGC-1α、PGC-1β及NRF-1 mRNA表达下降,多糖治疗组GSK-3βmRNA表达下降(均P<0.05)。与总苷治疗组比较,多糖治疗组FS、EF、左室收缩末压(left ventricular end systolic pressure,LVESP)、SBP、GSK-3βmRNA降低(P<0.05)。结论山茱萸总苷及山茱萸多糖具有改善AMI大鼠心功能、缩小心肌梗死面积、促进心肌线粒体生物合成的作用;山茱萸总苷及多糖对AMI大鼠心肌细胞线粒体保护作用可能是通过GSK-3β信号通路实现。