HCG通过StAR蛋白快速调节睾酮的合成

以2～3周龄长白仔猪睾丸间质细胞为材料研究HCG对睾酮合成的快速调节作用.结果表明:(1)在2 h内,对照组间质细胞分泌睾酮的量为(3.25±0.28)ng/mL,而HCG(浓度为50 IU/mL)处理组睾酮的浓度为(8.79±0.54)ng/mL,增幅为4.54 ng/mL,二者差异极显著(P<0.01);(2)在2 h内,对照组细胞内cAMP的浓度为(13.13±1.12)pmol/mL,而处理组cAMP的浓度为(39.22±2.38)pmol/mL,二者之间差异极显著(P<0.01);(3)加入前体物后,胆固醇对照组睾酮浓度为(3.81±0.45)ng/mL,处理组睾酮浓度为(27.13±1.27)ng/mL,处理组睾酮的浓度明显高于对照(P<0.05),其它几种前体对照组与处理组差异不显著(P>0.05).(4)在2 h内,HCG增加了StAR蛋白和mRNA的表达.这表明在快速反应期,HCG通过促进StAR蛋白的表达,增强睾酮的生物合成.

玉米赤霉烯酮对小鼠睾丸间质细胞内StAR蛋白及类固醇合成关键酶表达的影响

为了探讨玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEA)抑制睾丸间质细胞分泌雄激素的毒性机理,本研究以体外培养的原代小鼠睾丸间质细胞为材料,分别以0(对照组)、1、5、10、20μg·mL-1的ZEA进行染毒,染毒12h后,利用Western-blot和QRT-PCR技术,检测了细胞内类固醇合成快速调节蛋白(StAR)和类固醇合成关键酶(P450scc、3β-HSD、P450c17a1和17β-HSD)在转录和蛋白水平的表达。结果显示,与对照组相比,随着ZEA染毒浓度的升高,StAR转录水平及蛋白水平的相对表达量都呈上升趋势(P<0.05或P<0.01);而类固醇关键酶P450scc、3β-HSD、P450c17a1、17β-HSD的转录水平及蛋白水平的相对表达量都呈下降趋势(P<0.05或P<0.01)。结果表明:ZEA抑制睾丸间质细胞分泌睾酮的一个重要原因是其抑制了睾酮合成通路中类固醇合成关键酶的分泌。

睾酮可通过抑制StAR蛋白的表达调节自身的分泌

为了研究睾酮的自分泌调节机制,选取2-3周龄的仔猪睾丸间质细胞为研究材料。不同浓度的睾酮(0、10mg/mL、20mg/mL、50mg/mL、100mg/mL)与间质细胞共孵育48h,更换培养液,加入hCG(50U/mL)孵育4h,收集培养液,用放射免疫法(RIA)测定睾酮、hCG和cAMP的浓度。然后用浓度为50mg/mL的睾酮与胆固醇,5mg/mL;孕烯醇酮,500ng/mL;脱氢表雄酮,500ng/mL;雄烯二酮,500ng/mL和22R-羟胆固醇(3μg/mL)共同孵育间质细胞48h,更换培养液,加入hCG(50U/mL)孵育4h,收集培养液和细胞,用放射免疫法(RIA)测定睾酮,用免疫印迹测定StAR水平。实验结果如下:(1)随着睾酮浓度的增加,睾酮对自身合成的抑制作用逐渐增强,当睾酮浓度为50mg/mL,睾酮分泌、hCG的结合率以及间质细胞内cAMP的浓度分别下降了69.93%、61.24%和52.4%。(2)尽管睾酮抑制了胆固醇和雄烯二酮向睾酮的转化,但对其它几种前体物的转化没有明显影响。(3)睾酮不但抑制了基础水平StAR的表达,而且也抑制了hCG刺激的StAR蛋白的表达,这表明睾酮可以通过抑制StAR蛋白的表达降低自身的合成。

老年人睾丸间质细胞结构及StAR和P450scc蛋白表达的变化

目的:观察老年人睾丸间质细胞结构以及类固醇激素合成快速调节蛋白(steroidogenic acute regulatoryprotein,StAR)和胆固醇侧链裂解酶(cholesterol-side-chain cleavage enzyme,P450scc)蛋白表达的变化,以探讨迟发性性腺功能减退症的机制。方法:青年人(20～30岁)及老年人(70～90岁)睾丸标本各10例,对患者进行AMS(Aging Male’s Symptoms)评分。应用HE染色观察睾丸组织形态学变化,电子显微镜观察睾丸间质细胞的超微结构改变,Western blot法比较青年组和老年组睾丸组织中StAR和P450scc蛋白表达水平的差异,并用ELISA法检测其血清总睾酮水平的差异。结果:老年组AMS评分显著高于青年组(61.25±7.08 vs.20.75±3.73,P<0.001),且血清总睾酮水平显著低于青年组(3.12±0.58μg/L vs.6.29±1.17μg/L,P<0.05)。HE染色显示,老年人睾丸呈老年退行性改变,电子显微镜下观察到老年睾丸间质细胞线粒体肿胀,线粒体嵴消失。睾丸组织中StAR和P450scc蛋白表达水平显著低于青年组(P<0.05)。结论:老年人睾丸间质细胞结构、线粒体的损伤,以及StAR和P450scc蛋白表达水平的下降等病理变化均与老年人迟发性性腺功能减退症症状和血清总睾酮水平变化密切相关,其确切机制有待深入研究。

邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯对雄性大鼠激素相关基因表达水平的影响

目的:探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)对雄性大鼠睾丸中激素相关基因表达水平的影响,为研究DEHP生殖毒性提供科学依据。方法:40只5周龄雄性SPF级SD大鼠,随机分为对照组(玉米油)、DEHP低剂量组(100 mg/kg)、DEHP中剂量组(500mg/kg)和DEHP高剂量组(1 5 00 m g/kg),每组10只,每天灌胃染毒1次,每周5次,连续染毒6周。于末次染毒24 h后处死动物,实时荧光定量PCR法测定睾丸组织内类固醇快速调节蛋白(StAR)、3β-羟基类固醇脱氢酶(3-HSD)、17-羟基类固醇脱氢酶(17-HSD)、促性腺激素释放激素(GnRH)及雌激素受体(ERα、ERβ)的基因表达水平。结果:与对照组比较,、β基因表达水平在DEHP各剂量组均明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.01或P<0.05);17β-HSD基因表达水平在DEHP高剂量组升高(P<0.01),而低剂量组和中剂量组则无明显改变(P>0.05);ERα基因表达在DEHP高剂量组升高(P<0.01);ERβ基因表达在DEHP低剂量组和中剂量组下降(P<0.01),但在DEHP高剂量组升高(P<0.01);GnRH基因表达水平在DEHP中剂量组和高剂量组均显著下降,差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:DEHP染毒可引起雄性大鼠激素相关基因表达水平改变,干扰雄性激素的合成,可能导致生殖障碍。

1950MHz射频电磁辐射对小鼠睾丸间质细胞睾酮分泌的影响

睾酮在雄性生殖中起着重要作用。为探讨1 950 MHz射频电磁辐射对小鼠睾丸间质细胞睾酮分泌功能的影响,采用s Xc辐照系统、GSM talk信号对小鼠睾丸间质细胞进行频率为1 950 MHz、比吸收率(SAR)为3 W/kg的24 h的射频辐射;再采用ELISA方法检测辐照后0、6、24 h及假辐照组细胞上清液中的睾酮含量,并利用Real time-PCR方法测定上述3个时间点及假辐照组细胞中类固醇合成快速调节蛋白(st AR)、细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450sc)、雄激素受体(AR)的m RNA的表达水平。结果表明:与假辐照组相比,辐照组细胞上清液中的睾酮含量于照射后6、24 h显著降低;辐照组细胞内的P450scc、AR的m RNA表达水平于照射后0、6、24 h显著降低;而辐照组的st AR m RNA表达水平在辐照后0 h时低于假辐照组,6、24 h时与假辐照组几乎无差异。因此,1 950 MHz射频电磁辐射能通过基因转录水平影响到小鼠睾丸间质细胞st AR、P450scc、AR的m RNA的表达,进而降低睾酮的合成和分泌。

StARmRNA在仔猪睾丸组织中的表达研究

类固醇合成快速调节蛋白(steroidogenic acute regulatory protein,StAR)在调节类固醇合成中发挥了重要作用,为了认识StAR蛋白在仔猪性腺发育早期中的表达,以7、14、23、37日龄的仔猪睾丸为研究对象,采用组织原位杂交方法研究了StARmRNA在仔猪睾丸中的表达水平。结果表明:在7、14、23、37日龄的仔猪睾丸中,StARmRNA在睾丸的间质细胞中表达,其中在7日龄StARmRNA表达很弱,14、23、37日龄StARmRNA表达较强,StAR蛋白在这一时期的睾丸间质表达与其合成睾酮的能力一致。

自噬信号因子P70S6K参与Cox7a2调控睾酮生成机制研究

目的:研究Cox7a2对TM3 Leydig细胞睾酮生成的影响以及涉及其中的自噬调控信号的作用。方法:构建Cox7a2荧光表达载体,转染TM3 Leydig细胞。ELISA测定睾酮水平,Western印迹检测Cox7a2对睾酮合成快速调节蛋白StAR表达和自噬调控因子P70S6K磷酸化水平的影响。结果:在TM3 Leydig细胞中,LH刺激能增加促进StAR蛋白表达,增加睾酮合成水平。Cox7a2在TM3小鼠睾丸Leydig细胞中抑制P70S6K磷酸化水平,降低StAR蛋白的表达,进而抑制LH诱导的睾酮合成。结论:Cox7a2通过抑制快速调节蛋白StAR的表达减少LH诱导的睾酮分泌,这至少和Cox7a2抑制自噬调控因子P70S6K有关。

Cox7a2对睾酮合成及StAR、P450scc和3β-HSD蛋白表达影响研究

目的研究Cox7a2在TM3小鼠睾丸Leyidg细胞中过农达对LH诱导的睾酮合成及对StAR(睾酮合成调节关键蛋白),P450scc(胆同醇侧链裂解酶),3β—HSD(3β-羟基甾脱氢酶)蛋白表达的影响。方法构建Cox7a2荧光表达载体,转染TM3小鼠睾丸Leydig细胞,融合蛋白表达及LH诱导刺激后,ELISA测定细胞上清液中睾酮含量,Western blot检测StAR蛋白、P450scc和3β-HSD酶的表达变化。结果Cox7a2在TM3小鼠睾丸Leydig细胞中过表达抑制LH诱导的睾酮合成,降低StAR蛋白的表达,对P450scc和3β-HSD的蛋白表达没有明显影响。结论在TM3小鼠睾丸Leydig细胞中,Cox7a2至少通过抑制类固醇快速调节蛋白StAR的表达,进而抑制LH诱导的睾酮合成。

长期饮酒减少大鼠睾丸间质细胞PBR和StAR蛋白表达

目的研究慢性饮酒对雄性大鼠睾丸外周型苯二氮[艹卓]类受体（PBR）和类固醇生成快速调节蛋白（StAR）表达的影响。方法以不同浓度的乙醇饲养40只Wistar大鼠20周，检测睾丸组织PBR和StAR蛋白的表达。结果慢性饮酒Wistar大鼠的睾丸曲精小管生精细胞层明显减少，管腔中可见断裂的精子鞭毛，少见完整的精子；免疫沉淀显示PBR和StAR蛋白表达下降，与对照组相比较，小、中、大剂量饮酒组PBR和StAR表达分别下降13．8％、20．9％、50．4％和34．5％、37．7％、95．2％；免疫组化显示小、中、大剂量饮酒组睾丸间质组织中的PBR和StAR表达面积分别减少33．27％、37．71％、63．59％和27．12％、51．84％、58．41％。结论慢性饮酒能降低睾丸间质PBR和StAR蛋白表达，且其与乙醇浓度呈正相关。

生长激素在体外受精-胚胎移植卵巢反应不良患者中的应用

目的探讨生长激素(GH)在卵巢反应不良患者体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中的作用及其机制。方法2008年9月至2009年4月拟再次行IVF-ET治疗的卵巢反应不良患者(既往周期Gn启动量≥225IUqd,获卵数≤5个)共53例,其中GH组26例,对照组27例。GH组从Gn启动前一天或当日开始合用GH至人绒毛膜促性腺激素(HCG)注射日。取卵日收集卵泡液测定GH、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、雌二醇(E2)水平,RT-PCR半定量检测颗粒细胞类固醇合成快速调节蛋白(StAR mRNA)表达。结果GH组患者自身对照结果显示:HCG日E2水平、获卵数、MⅡ卵子数、受精率、移植胚胎数和可用胚胎数均显著增加,促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)用量减少(P<0.05)。GH组与对照组相比移植胚胎数、可用胚胎数和卵泡液IGF-1水平显著增高(P<0.05);临床妊娠率和卵泡液GH、E2、颗粒细胞StAR mRNA水平均提高(P>0.05)。结论合用GH可改善卵巢反应不良患者IVF-ET结局,其机制与提高卵泡液IGF-1水平,改善卵子、胚胎质量有关。

黄连素对伴胰岛素抵抗的多囊卵巢综合征大鼠卵巢状态的影响

目的研究黄连素对伴胰岛素抵抗(IR)的多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢状态及磷酸化胰岛素受体底物-1丝氨酸307(p-IRS-1 Ser307)、类固醇合成快速调节蛋白(p-StAR)表达的影响。方法SPF级、雌性SD大鼠100只,随机分为空白组(n=25)、模型组(n=25)、对照组(n=25)及实验组(n=25)。模型组、对照组及实验组大鼠均用来曲唑(1 mg·kg^-1·d^-1)诱导建立伴胰岛素抵抗的PCOS大鼠模型。造模成功后,对照组给予135 mg·kg^-1·d^-1二甲双胍,灌胃;实验组给予81 mg·kg^-1·d^-1黄连素,灌胃,空白组与模型组则灌胃等量生理盐水。各组均连续干预3周。用氧化酶法测定空腹血糖(FBG)水平;用电化学发光法测定空腹胰岛素(FINS)水平,计算稳态模型胰岛素抵抗(HOMA-IR)指数;用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)及睾酮(T)含量;用免疫组化法检测各组大鼠卵巢组织中p-IRS-1 Ser307、p-StAR蛋白阳性表达情况。结果空白组、模型组、对照组及实验组大鼠FBG水平分别为(3.96±0.63),(5.64±0.81),(4.42±0.73),(6.12±2.05)mmol·L^-1;FINS水平分别为(9.89±2.31),(22.13±2.09),(13.14±1.67),(16.65±2.18)mU·L^-1;HOMA-IR指数分别为2.27±0.36,4.12±0.71,2.68±0.38,3.54±0.21。与空白组相比,模型组、对照组及实验组大鼠FBG、FINS及HOMA-IR指数、血清性激素水平和卵巢组织p-IRS-1 Ser307、p-StAR蛋白阳性细胞百分比均显著升高;与模型组相比,对照组与实验组以上指标均显著降低,且对照组低于实验组(均P<0.05)。结论黄连素可降低伴胰岛素抵抗的PCOS大鼠的血清FBG、FINS及HOMA-IR指数及性激素水平,还可通过下调p-IRS-1 Ser307与p-StAR蛋白表达改善PCOS引起的胰岛素抵抗和高雄激素血症。