慢病毒载体介导的类固醇生成因子-1沉默调控子宫内膜基质细胞蜕膜化与自噬

目的探讨慢病毒载体介导的类固醇生成因子-1(SF-1)沉默对人子宫内膜基质细胞(hESCs)蜕膜化进程的影响及机制。方法收集子宫内膜异位症(EM)患者与正常妊娠者的子宫内膜组织,通过Real-time PCR和免疫组织化学染色检测SF-1的差异表达情况。从正常妊娠者的子宫内膜组织中分离并鉴定hESCs,将hESCs分为对照组、雌二醇(E_(2))+孕酮(P4)组、短发夹RNA(shRNA,sh)-正常对照(NC)+E_(2)+P4组、sh-SF-1+E_(2)+P4组,进行对应处理后,倒置显微镜下观察hESCs形态变化,Real-time PCR和Western blotting分别检测细胞内人胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)、泌乳素(PRL)的mRNA表达水平和蛋白表达水平,流式细胞术测定细胞周期分布,免疫荧光染色观察细胞内自噬标记物微管相关蛋白轻链3(LC3)表达情况,Western blotting测定细胞内自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、Beclin-1表达水平。结果EM患者子宫内膜组织中SF-1 mRNA相对表达量和SF-1蛋白阳性率均高于正常妊娠者子宫内膜组织(P<0.05)。与sh-NC+E_(2)+P4组比较,sh-SF-1+E_(2)+P4组细胞多为长梭形,未见明显蜕膜化,IGFBP1、PRL的mRNA相对表达量与蛋白相对表达量均显著下调(P<0.05),G_(0)/G_(1)期细胞比例显著减少而S期细胞比例显著增加(P<0.05),细胞内LC3荧光表达增强,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著升高,Beclin-1蛋白相对表达量也显著上调(P<0.05)。结论EM患者子宫内膜组织内SF-1表达升高,通过慢病毒载体介导的SF-1沉默能够抑制hESCs蜕膜化过程,该作用可能与调控细胞自噬水平相关。

类固醇生成因子-1对青春期小鼠睾丸中睾酮生成及精子发生的调节

目的 探讨类固醇生成因子 1(SF 1)对青春期小鼠睾丸内分泌功能及精子发生过程的调节作用 ,并推测其可能机制。 方法 用免疫组织化学方法定位SF 1在不同年龄小鼠睾丸中的细胞分布 ,进一步分离有SF 1阳性表达信号的青春期小鼠Leydig细胞在体外进行培养 ,用反义转染方法抑制细胞内SF 1蛋白质的表达 ,检测细胞的睾酮分泌量及睾酮生成酶P4 5 0scc的mRNA水平变化。 结果 1 SF 1在青春期Leydig细胞核有表达 ;反义抑制细胞内SF 1蛋白质的表达 ,则细胞的睾酮分泌量及P4 5 0sccmRNA水平均显著下降 ;2 SF 1在青春期小鼠睾丸B型精原细胞及细线期、偶线期、粗线期的初级精母细胞核中也有表达。 结论 1 SF 1参与调节青春期睾丸Leydig细胞中P4 5 0scc基因的转录 ,影响睾酮分泌 ;2 SF 1作为一种核受体 ,可能也是生精过程中重要的转录调控因子 ,调节B型精原细胞向初级精母细胞分化及初级精母细胞第 1次减数分裂过程中特异表达的基因转录过程 ,从而影响青春期小鼠精子发生过程。

类固醇生成因子-1基因异常可导致46,XY严重睾丸发育不全

目的:在46,XY尿道下裂或隐睾病例中寻找类固醇生成因子-1(Steroidogenic factor-1,SF-1)基因异常情况,通过分析基因型与患儿表型的关系揭示SF-1基因在人类性腺分化发育中的作用机制。方法:收集60例46,XY尿道下裂或隐睾且肾上腺功能正常的患者和40例外生殖器发育正常的男性儿童分别为病例组和正常对照组,对所有研究对象的SF-1基因进行测序,测序结果用标准核苷酸BLAST软件进行序列比对。结果:本研究发现了1例SF-1基因突变,为杂合子缺失c.11835delC。该患儿的表型为尿道下裂会阴型伴双侧隐睾、生后呈女性外阴,严重的男性化不全。此外,还发现1个SF-1基因多态性位点rs1110061(G/C),等位基因G/C的频率在病例组及正常对照组中分布无明显统计学差异。结论:SF-1基因异常可能是46,XY尿道下裂或隐睾患儿的病因之一,其表型为46,XY严重男性化不全、严重睾丸发育异常。

孤儿核受体类固醇生成因子1

孤儿核受体是核受体超家族中较独特的成员 ,它参与了糖类、脂类及胆固醇和类固醇激素的代谢 ,可能是体内细胞基本功能的重要调节因子。孤儿核受体SF 1最初作为肾上腺和性腺中的P4 5 0羟化酶必需的调节子而被鉴定 ,在类固醇组织、垂体和下丘脑腹内侧核均有表达 ,SF 1在基因结构上具有不同于其他核受体的特征结构域 ,并广泛参与许多基因如类固醇合成酶类、M櫣ｌｌｅｒｉａｎ抑制性物质、黄体生成素 β亚基启动子等的表达调控 ,基因剔除实验证实SF

类固醇生成因子-1基因G146A多态性与2型糖尿病的相关性

目的探讨类固醇生成因子-1(SF-1)基因G146A多态性与2型糖尿病及其胰岛素抵抗的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)方法,对151例2型糖尿病患者(病例组)与141名非糖尿病患者(对照组)G146A位点进行分析。结果对照组SF-1 G146A中G／A+A／A基因频率为46．8％,显著低于病例组的58．3％(P=0．04)。病例组A等位基因频率明显高于对照组(P=0．01)。病例组中,G／A+A／A基因型携带者的空腹胰岛素水平、稳态模型评估胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及稳态模型评估胰岛β细胞分泌功能(HOMA-β)均显著高于G／G型携带者(P值均<0．05)。结论SF-1基因G146A多态性可能是发生2型糖尿病的易感因素,且与胰岛素抵抗作用相关。

类固醇生成因子-1与代谢综合征关系的研究进展

类固醇生成因子-1(SF-1)是一种孤儿核受体,在人类下丘脑、垂体、肾上腺和性腺等组织中均有表达,对内分泌器官的分化和发育,以及内分泌系统的代谢调节发挥重要的作用。通过对SF-1基因敲除小鼠模型的研究以及对人类SF-1基因突变表现型的分析,逐步明确SF-1在下丘脑—垂体—肾上腺轴和下丘脑—垂体—性腺轴的各个环节均参与调控。最近有研究表明,SF-1基因的突变和缺失,将导致一系列内分泌系统的代谢紊乱,最终导致糖尿病、肥胖和高血压等一系列代谢综合征的症候群。文章就SF-1与代谢综合征关系的研究进展作一综述。

类固醇生成因子-1启动子甲基化状态及其基因表达在子宫内膜癌中的临床意义

目的:探讨子宫内膜癌(EC)组织中类固醇生成因子-1(SF-1)启动子甲基化状态、基因表达及其临床意义。方法:应用亚硫酸氢测序、蛋白免疫印迹法、免疫组化检测重庆医科大学附属第一医院2013年1月至2014年8月收治的60例EC患者的术后标本、30例癌旁组织和20例正常子宫内膜组织中SF-1启动子甲基化状态和基因的表达,分析SF-1蛋白表达与肿瘤临床病理特征的关系。结果:(1)与癌旁组织和正常子宫内膜组织相比,EC组织中SF-1蛋白表达显著升高(P<0.05)。(2)SF-1蛋白的表达在不同的组织分级和病理类型的比较,差异有统计学意义(P<0.05),在不同的年龄、手术病理分期、肌层浸润深度和淋巴结转移间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(3)DNA甲基转移酶(DNMT)3a和DNMT3b在EC组织中的表达显著低于癌旁组织(P<0.05)。(4)EC组织中SF-1基因启动子区甲基化胞嘧啶百分比显著低于癌旁组织(8.2%vs 40.9%,P<0.05)。结论:EC组织中SF-1启动子呈低甲基化,SF-1蛋白表达显著增高,SF-1蛋白异常高表达与患者的临床病理特征有关,可能促进EC的发生、发展。

7例儿童原发性肾上腺皮质功能减退症临床特征及NR0B1、类固醇生成因子-1基因突变分析

目的观察儿童原发性肾上腺皮质功能减退症(PAI)的临床特征及NR0B1、类固醇生成因子-1(SF1)基因的突变情况,并分析两者关系。方法 7例PAI患者,分别来自5个家系,记录其临床症状、体征以及血促肾上腺皮质激素(ACTH)、血皮质醇、电解质等实验室检查结果,采集患者及其家系成员的外周血进行NR0B1和SF1基因外显子测序,对测序结果阴性者进行多重连接探针扩增技术(MLPA)检测。结果 7例患者均为男性,均由儿童期起病,其中3例有家族史。全部患者均有不同程度的皮肤色素沉着、血ACTH升高及血皮质醇降低。仅1例患者存在NR0B1插入突变(5800-5801 ins G),但无肾上腺危象、低促性腺激素性性腺功能减退和生殖发育异常等表现;其母亲同时存在NR0B1同义突变(5129C>T,C38C)和插入突变(5800-5801 insG),但无肾上腺皮质功能减退表现。所有患者及其家系成员均未检测到SF1基因突变,MLPA检测亦未发现NR0B1和SF1存在大片段缺失或重复改变。结论儿童期PAI以遗传因素为主要病因,可能由先天性肾上腺皮质发育不良(AHC)所致,且NR0B1突变的区域、类型可能与临床表型的严重程度密切相关。除AHC外,可能存在X连锁致病基因导致PAI。

类固醇生成因子-1在肾上腺肿瘤中的诊断及预后价值

目前尚无可靠的免疫组织化学标志能有效鉴别肾上腺皮质瘤与其他肾上腺肿块。尽管一些标志，如melan—A和inhibin—a目前已被临床应用，但其诊断准确性极其有限。

p63蛋白、芳香酶P450及类固醇生成因子1在子宫内膜息肉中的表达及意义

目的 探讨p63蛋白、芳香酶P450 （P450arom）及类固醇生成因子1（SF-1）在子宫内膜息肉中的表达变化及其在子宫内膜息肉发病机制中的作用.方法 选择2012年6月至10月在复旦大学附属妇产科医院就诊、因异常阴道流血或宫腔占位等行宫腔镜手术、术后病理诊断为子宫内膜息肉的患者30例;同时经患者及医院伦理委员会同意,取息肉周围内膜组织20例及正常子宫内膜组织25例.采用免疫组化SP法及实时荧光定量PCR技术检测p63、P450arom及SF-1蛋白和mRNA的表达情况（蛋白的表达以组织化学评分表示）.结果 （1）蛋白表达：p63、P450arom及SF-1蛋白在子宫内膜息肉组织中的表达均显著升高（P＜0.05）,评分分别为（0.8±0.5）、（1.2±1.1）、（1.1±0.8）分,正常子宫内膜组织中均无3种蛋白的表达（评分均为0）.（2）mRNA表达：P450arom mRNA的表达水平在子宫内膜息肉组织中高于息肉周围内膜、正常子宫内膜组织,分别为0.274±0.082、0.105±0.052、0.105±0.065,分别比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）;而SF-1 mRNA（分别为0.105±0.049、0.053±0.043）及p63mRNA（分别为0.261±0.052、0.180±0.018）的表达水平在子宫内膜息肉与息肉周围内膜之间比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）.结论 p63、P450arom及SF-1可能是促进子宫内膜息肉形成的重要因子.

类固醇生成因子1在卵巢子宫内膜异位囊肿及子宫腺肌病病灶中的表达

目的探讨类固醇生成因子1（SF-1）在子宫内膜异位症（内异症）患者在位内膜、卵巢内异症囊肿、子宫腺肌病病灶中的表达。方法选择2008年1月至2010年12月在北京大学第一医院妇科住院，因子宫腺肌病合并卵巢内异症囊肿行子宫全切除术及卵巢内异症囊肿剥除术或附件切除术的患者共30例，经病理确诊子宫腺肌病合并内异症囊肿共17例作为观察组；同期因宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅲ行子宫全切除术的患者10例作为对照组。将观察组患者的在位内膜、卵巢内异症囊肿病灶、子宫腺肌病病灶和对照组的子宫内膜组织进行石蜡切片，免疫组化Envision二步法检测SF-1蛋白的表达。结果两组患者在位内膜的腺体和间质细胞中均无SF-1蛋白表达；观察组卵巢内异症囊肿病灶的间质细胞核sF-1蛋白的阳性表达率为14／17，SF-l蛋白在卵巢内异症病灶的腺体细胞及子宫腺肌病病灶中均无表达。结论卵巢内异症囊肿与子宫腺肌病病灶中SF-1蛋白表达的差异可能在疾病的发生与发展中具有重要意义。

类固醇生成因子-1基因沉默对人肾上腺皮质腺癌H295R细胞的作用及其临床意义

目的研究类固醇生成因子-1（SF-1）基因下调对人肾上腺皮质腺癌H295R细胞的影响，并探讨SF-1在肾上腺肿瘤发病中的作用。方法用含SF-1特异性短发夹（shRNA）序列的质粒载体pGenesill—SF1shRNA及含非特异性序列的阴性对照质粒pGenesill—negative-shRNA分别转染H295R细胞。48h后用蛋白质印迹法和荧光定量PCR检测SF-1表达水平。WST-1法及细胞计数法检测转染后细胞增殖情况，免疫组化SABC法检测转染后各细胞组中Ki67表达，TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果SF-1-shRNA有效地抑制了SF—1的表达，在蛋白水平和mRNA水平的抑制率分别为69．07％和71．02％（P〈0．01）。WST-1及细胞计数法均显示SF-1基因沉默组细胞增殖缓慢，增殖明显受到抑制（P〈0．01）；而TUNEL结果恰好相反，荧光镜下SF-1基因沉默组凋亡细胞的数目及形态均比较明显，凋亡细胞数约为阴性对照组的3．7倍（P〈0．01）；SF-1基因干扰后，其Ki-67阳性细胞率要低于阴性对照组细胞，分别为（16．90±2．17）％和（33．48±3．16）％（P〈0．01）。结论SF-1基因沉默可抑制肾上腺皮质腺癌细胞增殖，有望成为研究肾上腺肿瘤发病机制及其治疗的重要分子。

类固醇生成因子-1基因沉默在介导血管紧张素Ⅱ对醛固酮分泌调控的影响

目的 观察血管紧张素Ⅱ（ATⅡ）刺激人肾上腺皮质癌H295R细胞后醛固酮合成酶（CYP11B2）mRNA及醛固酮激素的改变,探讨类固醇生成因子-1（SF-1）基因沉默在介导该反应中的作用.方法 用携带U6启动子和SF-1特异性短发夹RNA（shRNA）序列的质粒载体pGenesil1-SF-1-shRNA及含非特异性shRNA编码序列的阴性对照质粒pGenesill-negative-shRNA转染人肾上腺皮质癌H295R细胞,应用Westem blot和荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测SF-1表达的改变,以100 nmol/L浓度ATⅡ刺激实验组和对照组细胞,检测ATⅡ刺激后3、6、9、12、15、18 h时间点CYP11B2 mRNA表达水平,与未刺激时对比,检测两组细胞CYP11B2 mRNA的最大增幅.用放射免疫法测定醛固酮激素在ATⅡ刺激24 h后的分泌水平,对比两组细胞醛固酮增幅.结果 实验组细胞SF-1在蛋白水平和mRNA水平分别下降了69.07%和71.20%（P＜0.01）.ATⅡ刺激后12 h时CYP11B2 mRNA表达水平最高,与未刺激前比较,实验组和对照组的CYP11B2 mRNA增幅分别是50.21倍和800.09倍（P＜0.01）,后者是前者的15.93倍（P＜0.01）.同样,ATⅡ刺激后醛固酮激素分泌水平均升高,对照组细胞刺激前后分别为（0.061±0.007）μg/L和（0.256±0.014）μg/L（P＜0.01） 而实验组醛固酮激素在ATⅡ刺激前后则分别为（0.101±0.010）μg/L和（0.252±0.016）μg/L（P＜0.01）,两组比较,前者增幅高于后者1.7倍（P＜0.01）.结论 SF-1表达下调可以降低CYP11B2 mRNA及醛固酮对ATⅡ的敏感性和反应性.

类固醇生成因子1和DAX-1在肾上腺皮质肿瘤中的表达及临床意义

目的 探讨类固醇生成因子1（SF-1）和DAX-1在肾上腺皮质肿瘤中的表达及其临床意义.方法 应用实时荧光定量PCR检测39例肾上腺皮质肿瘤：包括对血管紧张素Ⅱ无反应的醛固酮瘤（AⅡ-U-APA）12例、有反应的醛固酮瘤（AⅡ-R-APA）5例、分泌醛固酮的肾上腺皮质癌2例、皮质醇瘤10例、肾上腺无功能瘤10例及8例正常肾上腺皮质的SF-1、DAX-1、ACTH受体和内参β3-actin mRNA的表达.应用Western印迹检测SF-1和DAX-1蛋白在上述组织中的表达,比较不同组织中SF-1、DAX-1mRNA及蛋白表达的差异.对SF-1和DAX-1在肾上腺皮质肿瘤中的表达差异与患者的临床资料行相关性分析.结果 SF-1和DAX-1 mRNA及蛋白在正常肾上腺皮质、AⅡ-U-APA、AⅡ-R-APA、肾上腺皮质醛固酮癌、皮质醇瘤和无功能瘤中的表达存在差异[ SF-1 mRNA相对值：24.58±2.45、23.89±3.17、21.59±3.00、（38.75,44.16）、14.17±2.80和36.38±3.50; DAX-1 mRNA：0.57 ±0.06、0.37±0.05、0.43±0.05、（1.52,1.21）、0.39±0.04和0.83 ±0.08：SF-1蛋白：0.76±0.11、0.76±0.10、0.73±0.07、（1.24,1.40）、0.55±0.04和0.98±0.10：DAX-1蛋白：0.65±0.14、0.39±0.13、0.43±0.14、（1.18,1.02）、0.56±0.04和1.03±0.13;均P＜0.05或P＜0.01];AⅡ-U-APA组织中SF-1正常、DAX-1表达减低、SF-1/DAX-1比值增高且与醛固酮瘤的大小呈明显负相关；SF-1在皮质醇瘤中明显低表达,且与皮质醇瘤大小呈正相关；SF-1和DAX-1 mRNA及蛋白在肾上腺无功能皮质瘤中高表达、在肾上腺醛固酮分泌癌中表达有明显高于其他各组的趋势、而在嗜铬细胞瘤中无表达.结论 SF-1和DAX-1在不同肾上腺皮质肿瘤中表达各异,提示他们可能参与肾上腺皮质肿瘤的生长和激素分泌.

类固醇生成因子-1(SF-1)的研究进展

类固醇生成因子-1(SF-1),又被称为Ad4BP或NR5A1,是孤儿核受体家族成员,在类固醇生成、脑和垂体激素调控、肾上腺肿瘤发生中发挥着关键作用,是肾上腺和性腺发育及功能的重要调控因子。最近几年,SF-1的研究取得了很大进展,本文将对SF-1的发现、分子结构、体内表达进行简述,重点阐述SF-1调控的靶基因、转录激活功能调控在生理病理中的研究,特别是相关的拮抗药物进展等几个方面。

类固醇生成因子-1在醛固酮瘤中的表达及意义

目的 探讨类固醇生成因子-1（SF-1）在原发性醛固酮增多症（PA）发病中的作用.方法 分别收集16例醛固酮瘤组织标本和12例正常肾上腺组织标本,Western b1ot法检测各标本SF-1蛋白表达水平,荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测其mRNA表达水平.结果 醛固酮瘤组SF-1无论在蛋白表达水平还是在mRNA表达水平均高于正常肾上腺组,蛋白表达水平分别为（0.87±0.05和0.39±0.07,P＜0.01）,mRNA水平则前者是后者的10.48倍（P＜0.01）,差异均有统计学意义.结论 SF-1表达上调在PA的发病中发挥着重要作用.

类固醇生成因子-1表达下调在介导促肾上腺皮质激素对H295R细胞醛固酮和皮质醇急慢性分泌调控中的作用

目的 观察促肾上腺皮质激素（ACTH）刺激人肾上腺皮质癌H295R细胞后对醛固酮和皮质醇的调控影响,并探讨类固醇生成因子-1（SF-1）基因沉默在介导该反应中的作用.方法 用慢病毒包装携带SF-1特异性短发夹RNA（shRNA）序列的载体pLVX-shRNA-SF-1,同时设立阴性及空白对照组,转染人肾上腺皮质癌H295R细胞,转染后48 h应用Western blot和实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）法检测SF-1表达水平.设置100 nmol/L ACTH刺激实验组和对照组细胞,检测刺激1h后类固醇急性调节蛋白（StAR） mRNA表达水平,检测刺激48 h后醛固酮合成酶CYP11B2和皮质醇合成酶CYP11B1 mRNA表达水平;采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定同时期醛固酮和皮质醇激素的含量,比较两组细胞醛固酮和皮质醇增幅.结果 实验组细胞SF-1在蛋白水平和mRNA水平分别下降了69％和71％ （P＜0.05）.ACTH刺激1h时实验组比对照组StARmRNA表达水平升高1.4倍,两组细胞醛固酮水平分别为（91.59 ±4.28）和（79.90±2.41） ng/L（P＜0.05）,但皮质醇水平分别为（23.72±1.50）和（23.74±1.40） ng/L（P ＞0.05）.刺激48 h时实验组CYP11B2基因表达水平是对照组细胞的13倍,但醛固酮表达含量分别为（129.50 ±6.87）、（131.52 ±7.56） ng/L（P＞0.05）;实验组CYB11 B1 mRNA表达水平仅为对照组细胞的1.18倍（P＞0.05）,但皮质醇含量为（28.95 ±1.51）和（33.08±1.67） ng/L（P＜0.05）.两种激素在ACTH刺激后对比各自增幅,对照组分别为实验组的1.37倍和1.80倍（P＜0.05）.结论 SF-1表达下调可以降低醛固酮和皮质醇对ACTH的敏感性和反应性.

孤核受体类固醇生成因子-1缺陷与性腺发育

孤核受体类固醇生成因子-1（SF-1）是核受体超家族的成员之一,参与人体肾上腺和性腺组织发育、类固醇激素合成和生殖功能等多种相关基因的表达与调控.到目前为止,人类已发现25种SF-1基因突变,其临床表现轻重不一,检测SF-1基因缺陷可能有助于明确46,XY性发育障碍患者的分子病因诊断.