建昌黑山羊类固醇21-羟化酶基因部分序列的多态性研究

本试验以建昌黑山羊母羊血液DNA为样本,采用PCR-SSCP技术研究类固醇21-羟化酶基因第八外显子在建昌黑山羊中是否具有多态性,并分析其与产羔数的关联性。试验结果显示:该基因片段的电泳图像呈现三根条带,各样本之间图像无变化。初步表明该基因外显子在建昌黑山羊中不存在多态性,与母羊的产羔数也没有直接关联。

绵羊高繁殖力候选基因类固醇21-羟化酶(CYP21)的研究

通过采取PCR-SSCP和限制性内切酶酶切的方法检测类固醇21-羟化酶(steroid 21-hydroxylase,CYP21)基因的10个外显子在高繁殖力绵羊品种(小尾寒羊)、中等繁殖力品种(湖羊)和低繁殖力品种(多赛特羊和特克塞尔羊)间的单核苷酸多态性,同时研究该基因对小尾寒羊高繁殖力的影响。结果显示,在所设计的10对引物中,仅引物P8扩增的片段存在多态性。对于P8扩增得到的片段,经HinPⅠ1酶切后,可在小尾寒羊、湖羊和多赛特羊中检测到AA和AB型,而在特克塞尔羊中只检测到AA型;经BcnⅠ酶切后,在小尾寒羊、湖羊、多赛特和特克塞尔羊中均检测到CC和CD型。测序结果显示AB型与AA型相比在2340位发生了A→G突变,但并未引起所编码的氨基酸发生改变;CD型与CC型相比在2376位发生了G→A突变,也未引起所编码氨基酸的变化。AB型小尾寒羊产羔数最小二乘均值比AA型的多0.96只(P<0.05),CC型和CD型小尾寒羊产羔数差异不显著(P>0.05)。研究结果初步表明CYP21基因的B等位基因是提高绵羊产羔数的一个候选DNA标记。

失盐型类固醇21-羟化酶缺乏症64例临床分析

目的探讨失盐型类固醇21-羟化酶缺乏症(21-OHD)的临床特点,以提高诊疗水平。方法回顾性分析64例失盐型21-OHD的临床特点、实验室检查、基因检测及治疗方法。结果 1临床症状:常见临床症状为阴蒂增大(女性)、呕吐、皮肤色素沉着。2实验室检查:100.0%(64/64)的患者血17-羟孕酮(17-OHP)增高,100.0%(46/46)血雄烯二酮(AN)增高,65.0%(26/40)血硫酸脱氢表雄酮(DHEAS)增高,59.6%(28/47)血睾酮(T)水平增高,72.1%(31/43)的患者血促肾上腺皮质激素(ACTH)增高。53.5%(23/43)的患者血皮质醇水平低下。5例行醛固酮检查的患者醛固酮明显降低[(0.11±0.07)nmol/L]。100.0%(64/64)的患者血钠水平低于135mmol/L,其中60.9%(39/64)的患者低于125mmol/L。85.9%(55/64)的患者高血钾。3基因检测:1例患者行基因检测,为CYP21A2基因内含子IVS2as-13A/C>G纯合突变,基因型与表型相一致。4治疗:57例患者给予补液,纠正电解质紊乱及酸碱失衡等对症治疗,予以氢化可的松静脉滴注,起始剂量为50~200mg/(d·m^2),3~10d,随后改为25~100mg/(d·m^2)的氢化可的松片剂,分2~3次口服。出院时有46例患儿采用糖皮质激素[氢化可的松剂量(10.29±4.22)mg/d]与盐皮质激素(氟氢可的松剂量0.025~0.1mg/d)联合治疗。11例出院后采用氢化可的松单药治疗[剂量为(18.64±2.34)mg/d]。结论 1失盐型21-OHD多在婴幼儿期发病且症状较重。2皮肤色素沉着、呕吐、女性男性化等症状以及低钠血症和高钾血症等血生化改变强烈提示失盐型21-OHD,同时血17-OHP(基础值以及快速ACTH刺激后)增高可确诊21-OHD。3CYP21A2基因检测有助于诊断和分型。4糖皮质激素替代治疗是主要治疗方法,剂量需个体化,避免用量过度。

经典型类固醇21-羟化酶缺乏症86例临床诊治分析

目的探讨经典型类固醇21-羟化酶缺乏症（21-OHD）患者的临床特点。方法回顾性分析86例经典型21-OHD患者的临床特点、实验室检查及治疗方法。结果86例患者中，失盐型64例（74．42％），单纯男性化型22例（25．58％），常见症状为色素沉着及高雄激素的临床表现。86例患者血17-羟孕酮（17-OHP）、血雄烯二酮（AN）均增高，仅28．85％的患者皮质醇低下，84．00％脱氢表雄酮增高。出院时46例患者采用糖皮质激素与盐皮质激素联合治疗，28例患者采用氢化可的松单药治疗，5例成年患者采用地塞米松治疗。结论经典型21-OHD患者主要为失盐型，多在婴幼儿期发病且症状较重易被诊断；单纯男性化型发病年龄跨度大，诊断易被延误。皮肤色素沉着、高雄激素血症是经典型21-OHD的主要临床表现。血17-OHP、AN在21-OHD的诊断中敏感性高于皮质醇和脱氢表雄酮。糖皮质激素替代治疗是主要治疗方法，剂量需要个体化，避免用量过度。

中国人21-羟化酶缺乏症携带者基因型和临床特点研究

目的经典型21-羟化酶缺乏症(21-hydroxylasedeficiency,21-OHD)患者假两性畸形的手术矫形和心理治疗均与康复医学相关,通过研究中国人21-OHD携带者基因突变和临床表型特点有利于该病的防治。方法33例肯定携带者及34例正常对照者基因组DNA作模板,用特定引物特异性扩增CYP21成两个片段,片段1从Exon1→Exon3,片段2从Exon3→Exon10。用片段1和片段2为模板进行第二轮PCR,用特定限制性内切酶消化后经琼脂糖凝胶电泳鉴定突变。结果26例肯定携带者中最常见的突变为I172N(19.2%),i2g(13.5%)和Del(11.5%)。肯定携带者17-羟孕酮(17-OHP)基础值女性为1.90±1.25ng/ml,男性为2.58±1.36ng/ml。血清皮质醇女性为13.60±4.49μg/dl,男性为12.2±6.27μg/dl。结论中国人21-OHD携带者最常见的突变为I172N、i2g和Del。血清17-OHP均值显著高于正常均值。血清F与正常均值无显著差异,血清F与血清17-OHP显著相关。

猪的21-羟化酶基因位点限制性片段长度多态性研究

采用纯种大约克和纯种二花脸猪血样提取基因组ＤＮＡ，分别用１１种限制性内切酶消化，以非放射性狄高辛试剂盒标记４．８ｋｂ２１－羟化酶（ＣＹＰ２１）基因为探针，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交对猪的ＣＹＰ２１基因位点的限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰｓ）进行了研究。结果在ＢａｎⅠ、ＨｉｎｄⅢ、ＫｐｎⅠ、ＰｓｔⅠ和ＴａｑⅠ５种限制性内切酶位点检测出了ＲＦＬＰｓ，且ＢａｎⅠ和ＫｐｎⅠ酶切位点的多态性为首次发现；而在其他６种酶切位点（ＡｐａⅠ、ＢａｍＨⅠ、ＤｒａⅠ、ＥｃｏＲⅠ、ＳｃａⅠ、ＸｂａⅠ）没有发现ＲＦＬＰｓ。用上述５种发现ＲＦＬＰｓ的限制酶对无亲缘关系的１２头大约克和１２头二花脸猪进行ＲＦＬＰｓ分析，各限制酶产生的ＲＦＬＰｓ类型数分别为３，３，５，３，３，表明猪的ＣＹＰ２１基因位点是一个多变异位点。

21-羟化酶缺陷症基因诊断方法的建立及应用

目的建立一种荧光偏振检测技术联合直接测序法诊断先天性肾上腺皮质增生症中21-羟化酶缺陷症的新方法,并对中国人群中最常见的2种基因缺失和8种点突变进行检测。方法收集40例健康者及2例患者外周血,提取基因组DNA。设计通用引物,同时扩增CYP21A2和CYP21A1P等位基因片段,然后用序列特异的TAMRA荧光标记探针对扩增产物进行杂交检测,利用荧光偏振仪检测扩增杂交的荧光偏振值,确定是否存在该基因的缺失,同时用直接测序法验证检测结果;对Exon3Del 8bp(GAGACTAC)缺失进行检测时,将缺失的8个碱基设计在引物上,确保引物的特异性。同时根据CYP21A2基因与其假基因序列差异,设计5对特异性引物扩增CYP21A2基因,PCR后直接测序检测中国人群中最常见的8种点突变,包括P30L、i2g、I172N、E6Cluster、V281L、920-921insT、Q218X、R356W。结果荧光偏振法未检测到CYP21A2基因大片段缺失,检测结果与直接测序法结果对比差异无统计学意义(P>0.05),一致率达100%,40例健康者未检测到点突变,1例患者检测出Exon1G56R,Exon7c.920-921InsT插入杂合突变,1例患者检测出Exon4I172N、Exon8Q318X杂合突变。结论荧光偏振检测法联合直接测序法诊断21-OHD是一种高效的检测手段,可以广泛用于临床,不仅能对患者基因突变类型进行分析,在指导遗传咨询及产前诊断方面亦发挥重要作用。

不同类型21-羟化酶缺乏症的临床表型和基因型对比研究

目的 对 3种不同类型 2 1-羟化酶缺乏症临床特点进行对比研究。方法 9例失盐型患者 ,2 6例单纯男性化型患者和 8例非经典型患者基因组DNA用特定引物特异性扩增CYP2 1,用特定限制性内切酶消化后经琼脂糖凝胶电泳鉴定突变。回顾性分析临床和生化检查特点。结果 (1)三种临床表现类型间 ,初诊年龄、初诊时骨龄、身高 ;反应 2 1-羟化酶活性的 17-OHP ,ACTH及 2 4hrUFC ;失盐表现等均存在有统计学意义的差异 ,P <0 .0 5。 (2 ) 8/ 9例失盐型患者是引起酶活性严重下降的基因型 ,2 0例能分型的单纯男性化型患者中 16例是引起酶活性中度下降的基因型 ,8例非经典型全部为酶活性轻度下降的基因型。基因型构成比在三种临床表型间存在有统计学意义的差异 ,χ2 =39.0 39,P =0 .0 0 0。结论 (1) 2 1-羟化酶缺乏症三种亚型临床表现具有各自特征。 (2 )基因型构成在三种 2 1-羟化酶缺乏症临床分型间存在差异 ,基因型决定临床表型。

非经典型类固醇21-羟化酶缺乏症6例临床分析

先天性肾上腺皮质增生症根据临床表现严重程度分为经典型和非经典型。非经典型21-羟化酶缺乏症是最常见的常染色体隐性遗传性疾病之一,目前发病率约为0.1%。受累者代表性临床表现为在儿童后期,青春期或成人期出现高雄激素的症状和体征。

山西省21-羟化酶缺乏症基因型与临床表型相关性分析

目的研究山西省21-羟化酶缺乏症患儿的基因突变,探讨基因型和临床表型的相关性。方法回顾性分析2014年1月至2016年10月山西省儿童医院收治的15例21-羟化酶缺乏症患儿的临床资料,采用Sanger测序法进行CYP21A2基因突变分析。CYP21A2基因检测结果与其临床表型进行比较,分析基因型与临床表型的相关性。结果 (1)本组15例患儿均为经典型患者,其中失盐型(SW)8例,单纯男性化型(SV)7例。(2)15例患儿共检测出7种突变,包括IVS2-13A/C>G、I172N、R356W、E3Δ8bp、c.1064G>A、c.141C>A、c.121C>T。最常见的突变为IVS2-13A/C>G(40%),其余常见突变依次为R356W(17%)、I172N(17%)及E3Δ8bp(7%)。SW最常见的突变为IVS2-13A/C>G和R356W,其等位基因频率分别达50%和19%。SV患者最常见的突变为I172N,其等位基因频率为36%。(3)SW、SV中基因型与临床表型的阳性预测值分别为88%、100%。结论 IVS2-13A/C>G、R356W、I172N为21-羟化酶缺乏症患儿常见突变,山西省热点突变为IVS2-13A/C>G。经典型患儿基因型与临床表型具有明显相关性。

21-羟化酶基因缺乏症的家系报道

目的通过对1个21-羟化酶缺乏症家系进行CYP21基因检测,探讨该家系中CYP21基因突变的种类和特点。方法收集该家系中2例患者及部分家系成员外周血,提取基因组DNA,根据CYP21基因与假基因序列特异性差异,设计5对高度特异引物扩增CYP21基因,进行聚合酶链反应后直接测序。结果该家系中2例患者共检测到2种基因突变,分别为I172N、Q318X杂合突变,其中Q318X来源于父亲,I172N为自发突变。结论 21-羟化酶基因突变中部分点突变可导致严重后果,对该类患者家系进行基因突变检测,不仅为诊断提供直接依据,而且能指导遗传咨询,具有重要的临床意义。

多囊卵巢综合征患者中非经典型21-羟化酶基因缺陷症的基因检测筛查

目的通过基因检测法筛查按照鹿特丹标准诊断的多囊卵巢综合征（PCOS）患者中的非经典型21-羟化酶基因缺陷症（NC-21OHD）。方法按照鹿特丹标准纳入2014-2015年于第四军医大学唐都医院内分泌科就诊的98例PCOS患者,依据改良Ferriman-Gallway评分（简称m F-G评分）结果分为3组,m F-G评分0~2分为A组,3~5分为B组,≥6分为C组;另纳入30名同期在该院体检中心体检的同龄健康女性作为对照组。收集所有受试者外周血,提取DNA,设计5对特异性引物扩增CYP21A2基因,扩增产物送上海生工公司进行测序。对基因检测结果异常者,进一步测定其上午8点血皮质醇和促肾上腺皮质激素（ACTH）水平。结果 30名健康对照者无一例检测到基因缺陷,而在98例PCOS患者中检测到5例基因异常者,基因型分别为V281L/920-921ins T（P1）、V281L/I230M（P2）、V281L/Normal（P3、P4、P5）,均为杂合突变。C组21-羟化酶基因缺陷发生率为28.6%,B组为3.3%。P1基因型属于已被鉴定的NC-21OHD基因型,基因型与临床表型相符;P3、P4、P5为携带者,而在P2中,由于I230M国内外文献未见报道,因此还不能确定P2属于NC-21OHD患者还是携带者。皮质醇和ACTH的检测结果表明,仅P1的皮质醇位于正常低限、ACTH位于正常高限,其余患者均正常。结论尽管PCOS与NC-21OHD临床表现相似,但是为两种完全不同的疾病,在发病机制和治疗方法上差异显著,因此有必要在已诊断的PCOS患者,尤其是m F-G评分≥6分的多毛患者中通过基因检测筛查NC-21OHD,明确区分两种疾病,以免误诊。

经典型21-羟化酶缺乏症患儿基因型预测临床分型的研究

目的经典型21-羟化酶缺乏症(21-OHD)由CYP21A2基因突变引起,不同地区CYP21A2的突变频率不同,基因型-表型相关性也不完全一致。文中旨在探讨湖北地区经典型21-OHD患儿基因型与临床分型关系,通过基因型预测临床分型,为新生儿筛查阳性患儿的诊疗提供帮助。方法回顾性分析2010年8月至2019年3月武汉儿童医院遗传代谢内分泌科64例确诊为经典型21-OHD的患者。记录经典型21-OHD患者的具体临床分型(失盐型、单纯男性化型)、基因验证结果。采用二代测序联合多重链接探针扩增技术检测先证者及父母的基因型。根据突变从重到轻分为:极重度突变组(n=15)、重度突变组(n=23)、中度突变组(n=23)、未知突变组(n=3)。观察不同基因组与临床分型的相关性。结果 64例患儿中,失盐型40例(62.5%),单纯男性化型24例(37.5%);最常见的3种突变为I2G(28.8%)、p.I173N(21.6%)、Del(20.9%)。失盐型最常见的突变位点为I2G(39.8%)、Del(25.0%)、p.R357W(15.9%)、p.Q319X(8.0%)。单纯男性化型最常见的突变位点为p.I173N(51.0%)、Del(13.7%)、I2G(9.8%)、p.R484P(9.8%)。极重度突变组对失盐型的阳性预测率为86.7%(13/15),重度突变组对失盐型的阳性预测率为100%(22/22),中度突变组对单纯男性化型的阳性预测率为87.0%(20/23)。极重度突变组、重度突变组、中度突变组基因型与经典型21-OHD临床分型存在显著正相关(rs=0.691,P=0.00)。单纯男性化型患儿占比随基因突变对应的残留21-OHD活性增加而逐渐增多。结论 21-OHD患儿基因型为极重度和重度突变时倾向于失盐型;中度突变时倾向于单纯男性化型。基因型可以预测临床分型,为21-OHD患儿的诊疗提供了依据。

先天性肾上腺皮质增生症(21-羟化酶缺乏)1例家系基因报道

先天性肾上腺皮质增生症（CAH）是一组因肾上腺皮质激素合成途径中酶缺陷引起的疾病,属常染色体隐性遗传病,其中以21-羟化酶缺乏症（21-OHD）最常见,占90%-95%。据报道,CAH发病率有明显的种族和地区差异。分子生物学研究认为大多数CAH患者是因为酶的功能减退,导致皮质醇合成完全或部分受阻,经负反馈作用使促肾上腺皮质激素增加,

新复合杂合基因突变致非经典21-羟化酶缺陷症1例报告并文献复习

目的 报道1例非经典21-羟化酶缺陷症(21-hydroxylase deficiency, 21-OHD)患者的基因类型,丰富该类疾病的遗传数据库。方法 收集我院收治的1例非经典21-OHD患者临床资料,结合基因测序结果,以明确诊断。采集其亲属外周血,针对CYP21A2进行高通量基因测序,并结合相关文献进行复习。结果 患者,女,16岁,临床表现为阴蒂肥厚,无月经来潮,多毛、痤疮,青春前期身体呈生长加速现象,骨龄提前。基因检测结果显示,CYP21A2基因有两个复合杂合变异[错义突变c.1451G>A(p:R484Q),缺失突变deletion exon 1~3]。通过对其家系进行测序,发现错义突变c.1451G>A(p:R484Q)来自于其外祖父及母亲,而缺失突变deletion exon 1~3来自于其祖母和父亲。结论 发现了1例新复合杂合基因突变致非经典21-羟化酶缺陷症患者,丰富了21-OHD致病突变数据库,有助于提高临床医师对该病的认识。

21-羟化酶缺陷症的药物治疗和基因治疗新进展

21-羟化酶缺陷症(21-OHD)是先天性肾上腺皮质增生症(CAH)的最常见类型,由CYP21A2基因突变导致,呈常染色体隐性遗传,由于肾上腺类固醇激素合成途径中21-羟化酶缺乏或活性降低导致皮质醇和醛固酮合成减少以及雄激素分泌增多。患者表现为肾上腺皮质功能减退、高雄激素血症、男性性早熟和女性男性化等。临床上多采用糖皮质激素和盐皮质激素进行替代治疗。近年来,针对下丘脑-垂体-肾上腺轴各靶点的新药和治疗方案陆续研发,以及对基因治疗进行了新的探索。现就21-OHD的最新药物治疗和基因治疗进展进行阐述。

21-羟化酶缺乏症基因型和临床表型探析

目的:对21-羟化酶缺乏症患儿的全临床数据进行分析,观察基因突变的观点,进而分析基因型以及表型之间的关系。方法:在对新生儿进行筛查的过程中发现、诊断出了20例21-羟化酶缺乏症患儿和父母,利用等位基因的特异性进行测序以及多重以来探针等测定基因型。结果:经过下表分析可知,患儿在治疗过程中的身高、体质量等均比治疗之前明显下降;在本次研究中找到CYP21A2基因突变均找得到,主要的携带者是其父母,其中一共发现6种形式的突变情况,较为常见的突变是I2G,处于第二位的则是del,同时这两种突变也是失盐型患儿最为常见的突变类型,即P<0.05存在临床不均衡性。结论:21-羟化酶这一基因诊断技术将基因型、临床表型存在一定的一致性。

女性非经典型21-羟化酶缺陷症的诊断及治疗分析

目的:探讨女性非经典型21-羟化酶缺陷症(21-OHD)的诊断及治疗方法。方法:回顾分析就诊于南京市妇幼保健院的1例女性非经典型21-OHD患者的临床资料和基因检测结果。结果:患者内分泌检查结果提示:血清雄激素水平、17-OHP和孕酮升高;血清电解质水平正常;基因诊断结果为非典型21-OHD单发突变(单纯型)。通过糖皮质激素治疗后成功妊娠并分娩。结论:女性非经典型21-OHD临床表型非特异性,易与多囊卵巢综合征(PCOS)混淆,故对高度可疑的患者应进行基因检测,以便早期诊断并给予恰当治疗。

一种新复合杂合突变导致21-羟化酶缺陷症

目的探讨1例单纯男性化型21-羟化酶缺陷症(21-OHD)基因突变的类型和特点及临床表型与基因突变类型之间的关系。方法收集患者的临床资料,提取外周血白细胞DNA,用PCR方法扩增CYP21A2基因的10个外显子及内含子边界,测序鉴定CYP21A2基因突变位点,进一步分析突变位点与临床表型的关系。结果患者的临床表现主要为外阴发育异常。基因测序结果显示为复合杂合突变,其一个等位基因为c.515 T>A,p.I172N,另一个等位基因为c.593 T>G,p.L198X,此种复合杂合突变主要引起单纯男性化表现。p.L198X是至今尚未见报道的一种新突变。结论发现了CYP21A2基因一种新的突变p.L198X,丰富了CYP21A2基因突变数据库。同时从分子遗传学方面证实了对患者的诊断,患者基因型能很好地解释其临床表现。

21-羟化酶缺陷症7例临床特点及基因诊断分析

目的通过对7例21-羟化酶缺陷症(21-OHD)患者的临床特点及CYP21A2基因突变进行分析,以期提高临床对此病的诊治水平。方法分析2017年11月至2020年6月于河南省人民医院就诊的7例21-OHD患者的临床资料,并提取全血基因组DNA,采用PCR直接测序技术及多重连接探针扩增技术(MLPA)对CYP21A2基因外显子及旁侧内含子区域进行检测。结果7例患者就诊年龄为3 d~44岁,染色体核型为46,XY 3例,46,XX 4例,其中失盐型2例,单纯男性化型5例。7例患者促肾上腺皮质激素、17α-羟孕酮、孕酮均升高,皮质醇降低或正常低限,雄激素升高,双侧肾上腺增生,均检测出CYP21A2基因突变,其中3例分别为c.293-13C>G(I2G)、c.518T>A(p.I173N)、c.1069C>T(p.R357W)纯合突变,4例分别为c.292+1G>A/c.293-13C/A>G、c.518T>A/c.1451_1452delGGinsC、c.293-13C/A>G/c.518T>A、c.740delA/外显子1~7del复合杂合突变。结论21-OHD基因型与临床表型高度一致,CYP21A2基因可能为21-OHD的致病基因,结合临床表现及遗传学分析,有助于本病早期确诊和改善预后。