利用人气道基底细胞体外构建类气管球

目的:利用人气道基底细胞体外培养类气管球。方法:利用河南省人民医院肺移植术中弃用的供肺分离并培养人气道基底细胞、肺成纤维细胞。将气道基底细胞和肺成纤维细胞1∶1混合,重悬于基质胶,用EpiX Base培养基培养,以单独培养的基底细胞或肺成纤维细胞为对照。观察是否形成类气管球及不同时间点类气管球的形态,并采用免疫荧光染色明确成熟类气管球的细胞成分。将气道基底细胞老年株或青年株分别和人肺成纤维细胞老年株或青年株联合培养,观察形成的类气管球的差别。结果:气道基底细胞单独培养或与肺成纤维细胞联合培养均可见类气管球形成,肺成纤维细胞单独培养无类气管球形成。类气管球在镜下呈球形,随着培养时间延长球体增大,14~21 d达峰值。免疫荧光染色可见KRT5+P63+基底细胞分布于类气管球球体表面,FOXJ1+纤毛细胞和MUC+分泌细胞分布在管腔内部。培养第20天,与基底细胞青年株相比,基底细胞老年株与成纤维细胞联合培养所形成的类气管球直径更大,数量更多。结论:人气道基底细胞体外培养可形成类气管球,人肺成纤维细胞和气道基底细胞联合培养可促进类气管球的形成。来自老年宿主的基底细胞体外培养所形成的类气管球的直径大于青年宿主且数量更多。