人体外泌汗腺细胞的三维培养及形态学观察

目的探讨人体外泌汗腺组织体外三维培养方法，并对构建的三维组织进行形态学分析。方法取整形手术患者自愿捐赠的正常腹部全层皮肤，经II型胶原酶消化分离人体外泌汗腺组织，以含5ng／mL重组人EGF、25mg／mL牛垂体提取物、100U／mL青霉素和100μg／mL链霉素的无血清角质细胞培养基进行培养。倒置相差显微镜下观察细胞生长情况。待原代细胞达80％融合后，调整细胞浓度至l×10^5个／mL；取0-3mL细胞悬液与0．3mLMatrigel基底膜基质混匀培养，倒置相差显微镜下观察细胞生长情况。培养14d后，取标本行冰冻切片，HE染色观察细胞形态结构，免疫组织化学染色检测细胞角蛋白7（cytokeratin7，CK7）和CKl9抗原表达。结果倒置相差显微镜观察示，经II型胶原酶消化后大量汗腺组织游离；贴壁后3～5d长出汗腺细胞，细胞持续分裂达2～3周，形成围绕汗腺组织块的环状单层；3～4周后细胞衰老。汗腺细胞接种于Matrigel基底膜基质中2～3d，细胞开始分裂，随后形成小细胞团、管状结构以及类球状结构；约2周时混合培养物开始液化，培养终止。HE染色示部分细胞形成中空管状结构，管壁由1～2层细胞构成，类似于在体汗腺的分泌部和导管部；免疫组织化学染色见培养的汗腺细胞CK7和CKl9表达均呈阳性。结论人汗腺细胞接种于Matrigel基底膜基质三维培养，形成的组织结构模拟了在体汗腺的组织形态结构。