类泛素化蛋白酶1基因的表达与肝癌细胞株侵袭转移的关系

目的:研究类泛素化蛋白酶-1(sentrin-specific protease-1,SENP-1)基因在不同侵袭潜能肝细胞肝癌细胞株及人永生化肝细胞中mRNA和蛋白的表达水平及其与肝癌细胞侵袭能力的关系。方法:使用RT-PCR、Real-time PCR、Western blotting和免疫荧光方法对肝癌细胞株MHCC97L(低侵袭性)、MHCC97H和HCCLM3(高侵袭性)、SMMC-7721和HepG2(无明显侵袭性)SENP-1 mRNA和蛋白表达水平进行检测,以人永生化肝细胞株HL-7702为对照,分析SENP-1的表达与肝癌细胞株侵袭转移能力的关系。结果:RT-PCR和Real-time PCR检测结果显示,SENP-1 mRNA(F=5.658;P=0.042)和蛋白(F=88.909,P=0.000)在肝癌细胞株中的表达随着肝癌细胞株侵袭潜能的增高而增高;Western blotting检测结果显示,5种肝癌细胞株SENP-1蛋白水平均显著高于人永生化肝细胞株;免疫荧光法观察发现,SENP-1蛋白在肝癌细胞株内主要为胞质表达,部分胞核表达。结论:SENP-1基因在肝癌细胞株中的高表达可能具有促进肝癌细胞侵袭转移的作用。

类泛素化蛋白酶8对T细胞活化与分化的影响

目的探讨类泛素化蛋白酶8(SENP8)在T细胞活化和分化过程中的作用。方法C57BL/6背景的Senp8基因打靶小鼠(Senp8F/F小鼠,简称WT小鼠)与同背景的Cd4⁃Cre转基因小鼠交配,获得在T细胞中特异性缺失SENP8的小鼠(Senp8F/F;Cd4⁃Cre小鼠,简称KO小鼠),通过鼠尾基因组DNA PCR以及胸腺细胞免疫印迹实验进行基因型鉴定。流式细胞术分析SENP8缺失对稳态T细胞比例和数量的影响,并以李斯特菌尾静脉注射感染WT和KO小鼠,7 d后流式细胞术分析CD8^(+)T细胞活化、扩增、效应因子表达情况。结果PCR鉴定结果揭示,KO小鼠有Cd4⁃Cre基因和纯合的Loxp片段;免疫印迹结果显示,KO小鼠胸腺细胞中的SENP8蛋白表达下降;证明成功构建了T细胞中特异性敲除SENP8的小鼠模型。流式细胞术检测结果表明,CD4^(+)T细胞和CD8^(+)T细胞在稳态WT和KO小鼠脾脏中的比例和数量并无显著差异。李斯特菌感染7 d后,条件性缺失SENP8不影响CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞数量增加和活化标志分子CD44表达,也不影响CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞中干扰素γ(IFN⁃γ)和颗粒酶B(GzmB)的表达。结论T细胞中缺失SENP8分子不影响T细胞的活化、扩增及李斯特菌感染过程中T细胞的细胞毒作用。

类泛素化蛋白酶1在肝细胞肝癌组织的表达及其与侵袭和转移的关系

目的探讨类泛素化蛋白酶1（SENP-1）在人肝细胞肝癌中的表达及其与肝癌细胞侵袭转移的关系。方法应用聚合酶链式反应（PCR）和免疫组织化学方法检测肝癌组织，癌边缘组织，非癌组织中SENP-1和缺氧诱导因子-1d（HIF-la）的表达，同时检测微血管密度（MVD），使用PCR和Westernblot检测3种肝癌细胞株MHCC97H、MHCC97L和HepG2的SENP-1表达，SENPl-siRNA质粒转染基因沉默高表达SENP-1基因的肝癌细胞MHCC97H，划痕和侵袭试验检测转染前后肝癌细胞迁移和侵袭能力的变化，Westernblot检测转染前后半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase-8）、B淋巴细胞瘤2基因（bcl-2）和相关下游基因HIF-la和血管内皮生长因子（VEGF）表达变化。结果肝癌边缘组织中SENP-1、HIF-1仅的表达显著高于肝癌组织及非癌组织（P=0．000），癌边缘组织中MVD低于癌组织（P=0．000）。3种肝癌细胞株SENP-1表达均比人永生化肝细胞株高，SENP-1的表达随着肝癌细胞株侵袭转移能力的增加而增高。SENPl-siRNA质粒转染MHCC97H细胞后，促细胞凋亡蛋白Caspase-8表达升高，抑制细胞凋亡蛋白bcl-2表达降低，相关下游基因HIF-la和VEGF的表达降低。划痕试验结果显示，转染后肝癌细胞划痕距离在24h后较未处理组增加。Transwell试验结果显示，转染后肝癌细胞穿膜细胞数较未处理组明显减少（P=0．000）。结论SENP-1在人肝癌细胞肝癌中的高表达具有促进肝细胞癌侵袭转移的作用，其机制可能与SENP-1的过表达促进肝癌细胞适应缺氧微环境和抑制细胞凋亡有关。

SENP1与CerBb-2蛋白表达在乳腺癌中的临床意义

目的:探讨乳腺癌组织中类泛素化蛋白酶1(SENP1)和原癌基因CerBb-2蛋白的表达,并分析两者与乳腺癌病理因素的关系。方法:采用ABC免疫组化染色法,检测乳腺癌及乳腺良性病变组织(对照组)中SENP1蛋白的表达;同时采用EnVision免疫组化染色方法检测这2种组织中CerBb-2蛋白的表达。结果:SENP1蛋白在乳腺癌中的阳性率为60.78%(62/102),在乳腺良性病变中的阳性率为16.67%(5/30),两者间差异有统计学意义(P<0.01);SENP1的表达与乳腺癌分化程度、肿瘤细胞淋巴结转移情况和患者TNM分期相关(P<0.05)。乳腺癌组织中CerBb-2的阳性率为50.98%(52/102),对照组阳性率为10.00%(3/30),两者间差异有统计学意义(P<0.01)。乳腺癌组织中CerBb-2的表达与肿瘤临床分期及淋巴结转移情况相关(P<0.05)。SENP1的表达与CerBb-2的表达呈正相关。结论:SENP1和CerBb-2均对乳腺癌的增殖、生长、侵袭和转移起重要作用,有望成为肿瘤治疗的新靶点。

SENP-1和HIF-1α在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

【目的】探讨SENP-1和HIF-1α在肝细胞肝癌组织,癌边缘组织及非癌组织中的表达与肝癌发展的关系和在肝癌新生血管生成中的作用。【方法】应用RT-PCR、荧光定量PCR和免疫组织化学方法检测57例肝癌组织,癌边缘组织,非癌组织中SENP-1和HIF-1α的表达,用CD34多克隆抗体标记新生血管内皮细胞,计数微血管密度(MVD),分析三者表达的相关性及与相关临床病理参数的关系。【结果】肝癌组织与癌边缘组织SENP-1、HIF-1αmRNA表达显著高于非癌组织,SENP-1和HIF-1α在癌边缘组织及癌组织细胞的胞浆内有明显表达,癌边缘组织的表达强度及阳性率显著高于癌组织(P<0.05),且表达阳性率随肝癌组织分化程度降低而增高,而在非癌组织的实质细胞中则不表达;在癌边缘组织及癌组织中SENP-1与HIF-1α蛋白表达正相关(r=0.761,P=0.000;r=0.346,P=0.008),HIF-1α蛋白表达与MVD负相关(r=-0.684,P=0.000;r=-0.808,P=0.000)。【结论】SENP-1和HIF-1α的表达可能是肝癌细胞适应缺氧微环境的重要调节机制,与肝癌新生血管生成密切相关。