2005年1—4月北京地区类流感样病例儿童流感嗜血杆菌感染情况分析

目的：了解北京地区2005年1—4月类流感样病例儿童流感嗜血杆菌感染的情况。方法：采集在北京儿童医院儿科门诊就诊病例，年龄1周-6岁，病程在3d内的126名类流感样病例患儿的咽部分泌物，接种于巧克力平板t，分离培养。并采用卫星试验和X＋V因子需求试验进行鉴定；应用SPSS11．5统计软件进行卡方检验。结果：共分离到23株流感嗜血杆菌，分离率为18．3％；男女儿童感染流感嗜血杆菌无盟著性差异（P〉0．05）；并且多发生于2—6岁儿童；进入4月份以后，流感嗜血杆菌分离率为44.5％，明显高于此次调查的其它时段（P〈0．01）；23株流感嗜血杆菌其中共有5株与流感病毒合并感染。结论：流感嗜血杆菌是造成儿童急性呼吸道感染的主要病原之。

基于优化的Elman神经网络的类流感的预测

流感对公众健康构成巨大威胁,准确的实时预测和即时反应对于控制流感疫情至关重要。采用美国疾病控制和预防中心的类流感疾病(ILI)数据来预测流感。为了准确预测每个区的流感,通过更新行驶距离率(traveling distance rate,RTD)获得改进的多元优化器(improved multi-verse optimizer,IMVO),并用IMVO来优化Elman神经网络(ERNN)的参数,得到模型IMVO-ERNN.比较结果表明,IMVO-ERNN模型优于MLR、ERNN和MVO-ERNN等模型,并能够实时预测美国流感爆发。

111起类流感疫情的流行特征

目的：了解类流感疫情流行特征。方法：设计调查表格，调查类流感疫情；采集类流感病例鼻咽拭子标本．利用MDCK细胞传代技术分离流感病毒。结果：2004年共计报告类流感疫情111起，总发病人数2012。病例主要发生在学校，占全部疫情的91．89％；发病学生1919例，。占发病人数的95．38％。2月至4月及9月为2个高发期。每起疫情的平均报告时间为5．31天。46．15％（12／26）的疫情检出甲3型流感病毒，29．54％（26／88）的标本检出甲3型流感病毒；同期在医院就诊127例患者检出率为13．397％，二者检出率差异不显著，X^2=0．00，OR=0．98（0．53～1．80），P=0．9489。结论；杭州市流感表现为散发和局部小暴发。

中医类流感知识图谱的构建

目的:以《中国百年百名中医临床家丛书》、中医书籍等为知识图谱构建素材,借鉴国际系统医学术语全集(SNOMED)、统一医学语言系统(UMLS)和中医药学语言系统(TCMLS)的语义关系构建“症状-证候-治法”及“所用方剂-中药”之间关系的语义网络。方法:采用人工知识抽取的方法,利用知识图谱构建素材和SQL Server 2008对数据进行预处理,选取图数据库Neo4j构建中医类流感温病理论知识图谱。结果:构建的知识图谱包含实体812个和关联4759个。结论:通过Cypher语言使“证-治”“证-症”“症-药”等关联知识图谱可视化,能够直观地展示各个实体之间的关系,为今后将中医类流感知识图谱与深度学习技术相结合应用于中医奠定了基础。

1株欧亚类禽猪流感病毒的分离鉴定及遗传进化分析

【目的】了解广东地区猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)的流行情况并探究其分子生物学特征。【方法】采集广东某猪场疑似猪流感病毒感染猪的鼻拭子和肺脏组织样品进行病毒分离鉴定、遗传进化和关键氨基酸位点分析。【结果】样品经实时荧光定量RT-PCR检测为猪流感病毒核酸阳性;在红细胞凝集试验中,该病毒对鸡红细胞有凝集作用,血凝效价为1∶128;8个基因片段序列结果经BLAST比对和进化树分析显示,HA、NA基因属于欧亚类禽猪流感病毒(H1N1)分支,PA、PB 1、PB 2、NP和M基因属pdm/09分支,NS基因属于北美三源重组分支,因此,本试验分离株属于G4基因型欧亚类禽猪流感病毒,将其命名为A/swine/Guangdong/CJM2/2022(H1N1)。关键氨基酸位点分析显示,分离株HA蛋白裂解位点序列为PSIQSR/GL,具有典型低致病性流感病毒的分子特征。HA基因在受体结合位点处的190、225、226位氨基酸分别为D、E、Q,表明其既具有结合人型唾液酸受体的潜能又具有结合禽型唾液酸受体的潜能。NA基因关键氨基酸残基均未发生突变,提示分离株对奥司他韦和扎那米韦等神经氨酸酶抑制剂的敏感性较高,而M基因3处氨基酸位点突变为V27A、A30T、D44A,提示对金刚烷胺类药物耐药性增加。【结论】本研究分离鉴定的毒株为G4基因型欧亚类禽猪流感病毒,关键氨基酸位点分析提示该毒株具有适应在哺乳动物中复制和毒力增强的特征。本研究结果为广东地区猪流感的防控提供了参考数据。

沈阳市类流感样病例病原检测分析

目的运用多重巢式反转录聚合酶链反应（multiplex nested reverse transcription polumerase chainreaction，多重巢式RT—PCR）快速检测类流感样病例（influenza like illness，ILI）相关病原，掌握流感症状人群的病原谱，并探讨类流感样病例百分比（Consultation rates of influenza—like illness，ILI％）作为流感流行监测指标的适用程度。方法于2007年1～4月采集辽宁省沈阳市纳入国家流感监测网络的医院门诊ILI病例咽拭子118份，同时采用传代狗肾（MDCK）细胞分离流感病毒，采用多重巢式RT—PCR检测13种类流感样病例相关病原，计算各病原的阳性率与构成比，并与同时期监测所得的ILI％比较。结果2007年1～4月，ILI％在5．0％左右波动，而流感病毒分离阳性率从峰值42．1％下降至0；多重巢式RT—PCR共检测出11种病原体，其中流感病毒阳性率亦从52．6％逐步下降至5．7％，鼻病毒、腺病毒和副流感病毒3者之和的阳性率在37．8％左右波动。结论结果提示，ILI的病原构成较复杂，难以从临床症状区分由流感病毒或其他病原导致的类流感样症状。因此，ILI％单独不足以表明流感病毒在人群中的流行情况，尚需辅助以敏感的实验室检测方法。

北京儿童医院类流感患者监测情况分析

目的研究首都医科大学附属北京儿童医院类流感患者监测情况,分析流感流行的特点和流行病学特征,指导流感监测和预报工作。方法对北京儿童医院门诊2005年9月1日至2006年4月30日就诊的患儿进行监测的数据进行统计、比较。同时,与北京市西城区疾病控制中心的总结数据和病毒分离结果进行比较分析。结果北京儿童医院内科就诊患者总量及类流感患者所占百分比的变化趋势,两者比较,有高度的相关性。将这两组数据与北京市西城区疾病控制中心的结果进行比较,三组数据的高峰时间与分离出的优势病毒株的出现时间相符。结论北京儿童医院作为监测类流感的哨点医院,监测的两组数据和病毒监测结果,能很好反映当时、当地的流感流行病学特征。类流感哨点医院对类流感具有非常有效和适时预报的作用。

上海市类流感监测病例中肠道病毒病原特征研究

目的:了解上海地区类流感病例中肠道病毒病原特征。方法:应用RD、Vero、Hep2细胞对2008年1月-12月收集的567份类流感咽拭子标本进行肠道病毒分离培养,并对分离的毒株进行肠道病毒Vp1区域扩增和测序,通过NC-BI BLAST服务器在线比对进行肠道病毒型别鉴定。结果:从567份咽拭子标本中分离到39株肠道病毒,全年阳性分离率占总分离标本数的6.88%。4月-7月期间获得分离毒株28株,阳性分离率占同期收集标本的21.05%。对所有分离到的肠道毒株进行测序比对,29株为COXB3型病毒、5株为COXA4型病毒、3株为COXA10型病毒,1株为COXA5型病毒和1株为COXA6型病毒。所有COXB3型毒株序列与GenBank网上当年公布的北京株、安徽株、广东株、广州株和日本株同源性达94%以上。结论:在上海地区2008年肠道病毒是引起上呼吸道感染的常见病原体之一,并以COXB3型病毒感染为主,还存在其他肠道病毒病原体感染。应用分子分型技术加强引起呼吸道感染的肠道病毒病原体监测可为相关疾病的流行或暴发提供预警信号,也为临床医生的正确诊断提供依据。

类流感(H1N1、H3N2、乙型)患者的血常规结果分析

目的:分析3种流感病毒(H1N1、H3N2、乙型)的流行病学特点及其感染患者的血常规结果,为类流感患者的临床预防、诊断和治疗提供新的思路和依据。方法:统计2010年1月至2012年12月在本院发热门诊就诊,且经病毒核酸检测证实的421例H1N1、H3N2及乙型流感患者,同时采集其手指末梢血进行血常规检查,用SPSS 19.0统计软件对其流感病毒流行趋势进行分析。结果:H1N1、H3N2、乙型流感病毒的暴发没有特定规律,但有阶段性。421例类流感患者的血常规分析中,白细胞总数正常者311例(73.87%)、增高者86例(20.43%);中性粒细胞百分比增高者313例(74.35%);淋巴细胞百分比降低者274例(20.43%)。3种流感患者的血常规结果经t检验后提示,H1N1与H3N2流感患者的白细胞总数、中性粒细胞百分比及淋巴细胞百分比间均无统计学差异(P>0.05),而H1N1及H3N2与乙型流感患者间的白细胞总数、中性粒细胞百分比及淋巴细胞百分比都存在统计学差异(P<0.01)。结论:H1N1、H3N2、乙型流感病毒的爆发无规律,但可在一定阶段流行,因此对类流感患者的监测要坚持全年并严密防范。流感病毒阳性患者主要以白细胞总数正常、中性粒细胞百分比增高及淋巴细胞百分比降低为主,但H1N1、H3N2流感患者比乙型流感患者的白细胞总数、中性粒细胞百分比要高,而其淋巴细胞百分比则相对乙型流感患者要低。故对于血常规检测结果与流感病毒感染的通常血象变化不符,但临床高度怀疑为流感病毒感染者,在抗菌治疗效果不明显时,应考虑作咽、鼻拭子病毒核酸检测,以进一步确诊。

欧亚类禽H1N1猪流感病毒研究进展

猪作为“流感病毒的混合容器”可以感染不同亚型的流感病毒,其中H1N1亚型在猪群中最为流行。可分为欧亚类禽H1N1猪流感病毒(Eurasian avian-like H1N1,EA H1N1)、经典猪流感病毒(Classical swine H1N1,CS H1N1)和2009年大流行H1N1病毒(2009 Pandemic H1N1,2009/H1N1)等。EA H1N1猪流感病毒自出现后便开始在欧洲和亚洲地区的猪群中快速传播,逐渐取代了当时流行的CS H1N1猪流感病毒。部分地区存在不同亚型的猪流感病毒或不同基因型的EA H1N1猪流感病毒共同传播的现象,特别是当2009/H1N1猪流感病毒出现后,为其重组提供了更多可选择的基因片段,增加了其发生重组的概率,其中G4基因型的EA H1N1猪流感病毒在哺乳动物中可表达出更强的适应性,成为优势基因型。通过氨基酸位点的突变,EA H1N1猪流感病毒实现了自身的进化,如病毒复制效率提高、毒力增强、突破物种屏障传播或耐药性的产生等,使现阶段针对其防治的手段受到牵制,多种因素共同奠定了其在传播中的主要地位,具有造成下一次流感大流行的潜力。阐明了EA H1N1猪流感病毒能够在传播过程中占据主导地位的原因,指出现阶段防治手段的局限性,并指出在以后的研究中应重点关注其在不断突破物种屏障传播时,通过基因片段的重组和关键氨基酸位点的突变而获得的适应性优势,以期为EA H1N1猪流感病毒的进一步研究提供相应的依据。

欧亚类禽型H1N1猪流感病毒HA蛋白的表达及免疫原性评估

【目的】表达欧亚类禽型(eurasian avian-like,EA)H1N1猪流感病毒(SIV)的血凝素(HA)蛋白,并对其免疫原性进行测定。【方法】利用RT-PCR技术扩增病毒A/swine/Zhejiang/245/2013(H1N1)(ZJ245)的HA基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGS中,获得重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245),将其转染293T细胞,采用间接免疫荧光(IFA)检测和Western blot检测HA蛋白在体外的表达;将重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)经肌肉注射途径、以100μg/只剂量免疫16只6周龄BALB/c小鼠(I组和II组),间隔3周后进行加强免疫(二免);同等数量的小鼠以相同方式注射100μL无菌PBS作为非免疫对照组(III组和IV组)。首免和二免每周采血,分别采用血凝抑制(HI)试验和病毒中和(VN)试验两种方法测定不同类型的血清抗体效价;二免2周后,其中两组小鼠(I组和III组)用50μL(106.0EID50)的ZJ245病毒经滴鼻感染途径进行攻毒,另外两组(II组和IV组)用A/swine/Heilongjiang/44/2009(H1N1)(HLJ44)病毒进行攻毒。攻毒后14 d内每天观察小鼠的临床症状、统计发病与死亡情况,且每天称量小鼠体重,在体重下降比率超过25%时判定为小鼠死亡。攻毒后第3天,每组随机剖杀3只小鼠,分别采集脑、鼻甲、肺、脾和肾等脏器,匀浆处理后通过接种10日龄的非免疫鸡胚测定脏器的病毒含量。通过小鼠体重变化以及脏器滴定的病毒含量评估重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)的免疫保护效果。【结果】经酶切鉴定和测序验证表明ZJ245的HA基因的已正确克隆至真核表达质粒p CAGGS中获得重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245),经体外转染293T细胞后,IFA和Western blot证实了病毒的HA蛋白能够正确表达,并具有良好的生物学活性;小鼠的免疫与攻毒试验结果表明,重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)首免后一周可检测到针对同源病毒ZJ245的低水平HI和VN抗体,加强免疫后抗体水平明显升高,HI抗体达到76.88、VN抗体达到152.5;同时针对异源病毒HLJ44也产生了较低水平的HI和VN抗体。106.0 EID50的同源病毒ZJ245攻毒时,与非免疫组小鼠相对比,重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)的免疫完全阻止了因病毒攻击而导致的小鼠体重下降以及肺脏和鼻甲内病毒的复制;106.0 EID50的异源病毒HLJ44攻毒时,相比非免疫组小鼠,质粒免疫组小鼠体重的下降比率、以及肺脏和鼻甲内的病毒滴度均显著降低(P<0.0001、P <0.001、P <0.05)。【结论】重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)能够有效表达病毒HA蛋白,免疫后可使小鼠获得完全抵抗ZJ245感染及部分抵御HLJ44感染的免疫保护力,表明重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)具有良好的免疫原性。

研究认为类禽H1N1猪流感病毒可能引发人流感流行

12月29日，据新华网消息，由中国国家禽流感参考实验室主任陈化兰领导的一项新研究显示，欧亚类禽H1N1猪流感病毒已获得感染人的能力，是引起下次人流感大流行可能性最大的病毒，应予以高度重视。

上海市黄浦区2004—2009年流感发病临床特征分析

目的：探索流感样病例疫情演变规律与流行特点。方法：收集汇总2004—2009年流感监测资料,分析其流行趋势及影响因素。结果：2004—2009年黄浦区各月ILI（就诊百分比）在0.45%~10.01%之间,平均为1.70%;1、2月以及7、8月为发病高峰;15岁以下儿童少年ILI就诊数构成比和发病率高于其他年龄人群。结论：我区可能存在稳定的夏季流行高峰,尚须进一步监测和分析,15岁以下儿童少年为易感人群。

人禽流感H5N1病毒HA1蛋白抗原表位及主要免疫功能区特征的研究

目的确定人禽流感H5N1病毒HA1蛋白的单克隆抗体(McAb)抗识别表位及主要免疫功能区。方法将16条人禽流感H5N1病毒HA1基因重叠片段克隆入真核表达载体pDisplay,构建表达HA1蛋白的重叠肽段重组质粒,转染HeLa细胞后制备细胞抗原片。利用灭活的H5N1病毒免疫BALB/c小鼠,制备病毒特异单克隆抗体(单抗)和多克隆抗体(多抗),采用间接免疫荧光法分析单抗、多抗与HA1肽段的反应性,确定HA1蛋白的单抗识别表位及主要免疫功能区。结果成功克隆、表达了16条不同长度的H5N1肽段,并制备、获得30株分泌抗H5N1型禽流感病毒McAb的杂交瘤细胞株,其中18株为抗HA的单抗,18株中有6株单抗具有中和病毒活性。利用表达的H5N1肽段对单抗识别表位进行分析,初步确定3B5、3D1、3B2、M6、M3等18株McAb识别表位区域分别位于氨基酸残基aa133-143、aa155-165、aa166-196、aa166-176、aa34-66及aa296-328之间,其中3B5、3D1、3B2、M6等McAb识别表位为序列依赖型表位,M3和M7等具有中和活性的McAb识别表位为构象性中和表位。结论利用制备的H5N1病毒特异性McAb和表达的病毒HA1蛋白重叠肽抗原,初步确定了18株抗HAMcAb的识别表位和HA1蛋白的主要免疫功能区,为进一步研究开发新型疫苗提供了重要理论依据。

禽流感能使人致病死亡

禽流感(真性鸡瘟)为我国一类对外检疫对象,至今为止我国大陆尚无发生本病的报道。据香港卫生署1997年8月20日报道。

鸡禽流感诊断技巧和防治措施

鸡禽流感为鸡的常见疾病,且疾病容易反复,故此鸡禽流感已成为大规模养鸡防治的重要疾病。本文着重探讨鸡禽流感的诊断技巧及防治要点,为应对鸡禽流感疫情提供理论依据。1鸡禽流感鸡禽流感属于病毒性传染病,病毒为禽流感病毒,容易发生在鸡、鸭、鸟等禽类群体中,病毒广泛存在饲养环境中。

陕西省首例人感染G4基因型欧亚类禽H1N1猪流感病毒基因特征分析

目的分析陕西省首例人感染G4基因型欧亚类禽H1N1猪流感病毒(EA H1N1 SIV)的基因特征。方法采集患者咽拭子标本,接种MDCK细胞进行病毒分离获得毒株,采用全基因组深度测序方法获得分离株的8个基因节段序列,通过GenBank数据库中Blast程序进行核苷酸同源性分析,构建系统进化树,分析病毒基因特征。结果病例咽拭子标本经实验室确诊为EA H1N1 SIV,后分离毒株命名为A/Shaanxi-Weicheng/1351/2022(H1N1v)。同源性分析显示,该分离株的PB2、NP、HA、NA和M基因均与A/swine/Beijing/0301/2018(H1N1)核苷酸同源性最高,分别为98.29%、98.73%、97.41%、97.52%和99.08%。进化树显示,该分离株属于G4基因型EA H1N1 SIV,其中PB2、PB1、PA、NP和M基因来自pdm/09 H1N1,HA和NA基因来自EA H1N1,NS基因来自三源重配H1N1。其HA蛋白裂解位点为IPSIQSR↓G,为低致病性流感病毒的分子特征。NA蛋白未出现与神经氨酸酶抑制剂相关的氨基酸突变。PB2蛋白701N、PA蛋白P224S突变、NP蛋白Q357K突变、M蛋白P41A突变和NS蛋白92D均说明其对哺乳动物的适应性增强。结论该患者为陕西省首例人感染G4基因型EA H1N1 SIV病例,该病毒为低致病性,但其对哺乳动物的适应性增强,需要加强对此类SIVs的监测。

欧亚类禽猪流感病毒病原学研究进展

欧亚类禽猪流感病毒被认为是引起下次流感大流行可能性最大的动物流感病毒之一。1979年,第一次在猪群中分离到欧亚类禽猪流感病毒,该病毒随后在欧洲流行。欧亚类禽猪流感病毒从2005年起在我国猪群中广泛存在,偶尔可突破种属屏障感染人;在江苏、河北和湖南等地区已出现人感染欧亚类禽猪流感病毒,由此对公共卫生和生猪养殖业均有一定的威胁和影响。本文综述了欧亚类禽猪流感病毒的流行情况、病原学特征及其相关致病分子机制研究进展,旨在为欧亚类禽猪流感病毒的风险评估提供科学依据。